不同因素对人Ⅹ型磷脂酶A2包涵体重折叠的影响

人Ⅹ型磷脂酶A2 在大肠杆菌中的表达产物完全以不溶的包涵体形式存在. 用以前适用于人胰型(IB 型) 磷脂酶A2 的稀释重折叠方法,并不能使它有效重折叠. 以初步纯化的包涵体为对象,发现溶液的温度、pH 值和蛋白质浓度对Ⅹ型磷脂酶A2 体外重折叠有很大的影响. 研究了一些小分子化合物对Ⅹ型磷脂酶A2 ,在高蛋白质浓度(1 g/L)下重折叠的影响,发现1 mol/L 的L-精氨酸能提高其重折叠效率达6倍多. L-精氨酸的结构类似物L-瓜氨酸对Ⅹ型磷脂酶A2 的重折叠有较弱的改善,而L-赖氨酸和L-精氨酸甲基酯则降低了Ⅹ型磷脂酶A2 的活性恢复. 结果表明,L-精氨酸对蛋白质重折叠的帮助作用,可能是通过精氨酸与折叠中间物的结合产生的,精氨酸的胍基和羧基都是必需的,其侧链胍基以其特殊的带电方式阻遏了重折叠过程中的积聚和分子间二硫键形成的反应.

人ⅡA型磷脂酶A_2衍生肽P26抗菌作用与结构修饰的研究

目的比较人ⅡA型磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)C末端衍生的多肽和经修饰后的环肽对不同细菌在体外的杀菌效应,了解其作用机制。方法根据人ⅡA型PLA2氨基酸顺序C末端26个氨基酸残基,合成直链肽P26,同时将其修饰为环肽P26。采用琼脂铺板计数法,将不同浓度的两种多肽分别与6种细菌在37℃孵育2 h,然后铺板并置于37℃恒温箱培养18～24 h,记录每一琼脂板上的菌落数(CFU),并计算多肽作用后的杀菌率。结果两种多肽对革兰阳性菌金黄色葡萄球菌、枯草杆菌和炭疽杆菌有较强的杀菌活性,环肽P26的作用比直链肽P26强4倍左右;对革兰阴性菌大肠杆菌、变形杆菌和绿脓杆菌的杀菌作用较弱,而环肽P26的作用更弱。结论衍生自人ⅡA型PLA2 C末端26个氨基酸残基的肽P26和修饰得到的环肽P26对G+菌有较强的杀菌活性,经修饰成环肽后作用更强,可能与环肽分子带的正电荷更集中有关。