LIF对人胎脑神经干细胞体外增殖和分化的影响

目的:观察白血病抑制因子(LIF)对体外培养的人胎脑神经干细胞增殖和分化的影响。方法:用添加表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)的N2培养基培养人神经干细胞(hNSC)。实验分添加LIF(LIF+)组和无LIF(LIF-)组,接种12天后计数细胞集落(球)的形成率。传代培养观察120天,定期进行活细胞计数,绘制生长速率曲线。取第6代细胞球进行分化诱导,免疫荧光技术鉴别神经细胞的特异性抗原标志,并计算各细胞类型间的比例。结果:两组集落形成百分比分别为:LIF+为0.50%-0.91%;LIF-为0.49%-0.94%。两组间的差异并无显著意义(P>0.05)。在相同培养条件下,各例胎脑来源的NSC扩增速率的相差并无显著性意义(P>0.05),但LIF对NSC扩增有重要作用,刺激细胞扩增了约4000-8400倍,无分化发生;LIF-组仅为43-97倍,培养两个月后可观察到分化现象。在培养过程中观察到:LIF的作用主要表现在细胞接种传代约50-60天以后。用免疫细胞化学荧光进行分化细胞类型鉴定,计数神经元和星形胶细胞数,并计算其中神经元所占的百分比。LIF+培养为12%-83%,明显高于LIF-组的8%-23%(P<0.005),来源于海马的NSC分化为神经元的比例要高于来源于纹状体的NSC。结论:LIF能阻抑人胎脑NSC的分化,促进其体外长期增殖,其效应主要表现在接种传代培养的50-60天以后。LIF还影响NSC的分化,可显著提高分化细胞中神经元的百分比,海马源性hNSC对LIF更为敏感。

LIF基因修饰的ECV-304细胞对脐血造血细胞体外培养的影响

目的观察经LIF基因修饰的ECV-304细胞对脐血造血干/祖细胞(HSC/HPC)体外培养的影响。方法用脂质体转染法将pcDNA3.0-LIF真核表达质粒导入ECV-304人脐静脉内皮细胞,并通过G418筛选获得能稳定表达LIF的ECV-304转基因细胞。用LIF基因修饰的ECV-304细胞与脐血CD34+细胞共培养,检测培养前后CD54+细胞、CD34+CD54+细胞和CD34+CD62L+细胞数量的变化,观察转LIF基因的ECV-304细胞对脐血造血细胞的影响。结果成功获得经LIF基因修饰的ECV-304转基因细胞,该细胞能支持脐血CD34+细胞的扩增,且能维持细胞表面与归巢有关的黏附分子的表达,培养后CD34+CD54+和CD34+CD62L+细胞亚群数量显著增加。结论经LIF基因修饰的ECV-304细胞可改善脐血造血细胞体外培养的微环境,有助于抑制HSC/HPC的分化并保持其归巢能力。

LIF基因在COS-7细胞中的表达及活性研究

目的人白血病抑制因子(LIF)基囚在COS-7细胞中进行瞬时表达,检测表达产物对HL-60白血病细胞的作用。方法用脂质体转染法将pcDNA3．0-LIF真核表达质粒导入COS-7细胞,通过形态学观察、MTT、FCM法研究COS-7细胞表达产物对HL-60细胞的影响。结果人LIF基因可在COS-7细胞中进行有效表达,表达产物对HL-60白血病细胞具有抑制生长和诱导凋亡的作用。结论人LIF基囚在COS-7细胞中能有效表达,表达产物具有较强的抑制白血病细胞生长,诱导细胞凋亡的作用。

科学哲学的价值论转向——科学进步模式新探

科学进步及其标准问题是 2 0世纪中叶以来科学哲学研究的重点及争论的焦点问题之一。综观现代科学哲学的历史 ,从逻辑实证主义的“科学→真理”模式到劳丹的“科学→解决问题”模式 ,尽管反映了对于科学进步问题的认识发展 ,但均未超出认识论领域 ,并存在着不可克服的困难 ;由于它们忽视科学的社会性与实践性 ,因而无法根本解决科学进步的合理性问题。科学哲学研究从认识论到价值论的转向是一种必然趋势 .本文在扩展劳丹“真理与价值相通”思想和发掘法兰克福学派技术批判理论的基础上 ,提出了以对人类的终极关怀为目标的“科学→价值”模式。

以转染白血病抑制因子基因的人胚肺成纤维细胞为饲养层培养人胚胎生殖细胞

目的以转染白血病抑制因子(LIF)基因的人胚肺成纤维细胞为饲养层培养人胚胎生殖细胞,为建立无动物成分污染的人胚胎生殖细胞培养体系奠定基础。方法将LIF真核表达载体pcDNA3.1(+)-LIF转染到人胚肺成纤维细胞中,通过筛选和鉴定获得表达LIF的阳性细胞。将原始生殖细胞(PGCs)种植到转染后细胞制备而成的饲养层上,在不添加外源性LIF的条件下培养,并对PGCs来源的细胞集落进行鉴定。结果经RT-PCR及Western blotting鉴定证实,转染pcDNA3.1(+)-LIF的人胚肺成纤维细胞表达LIF基因。在转染后人胚肺成纤维细胞上生长的PGCs可形成典型的鸟巢状集落,经检测集落碱性磷酸酶活性呈强阳性,表达胚胎阶段特异性抗原SSEA-1、SSEA-4、TRA-1-60、TRA-1-81,及未分化标志Oct-4。结论用转染LIF基因后的人胚肺成纤维细胞作为饲养层能支持PGCs来源人胚胎生殖细胞的生长,维持自我更新。

白介素-1α及与白介素-11、白血病抑制因子和胶质细胞源性神经生长因子联合诱导人神经干细胞向多巴胺神经元的分化

目的探讨细胞因子白介素-1α(IL-1α)及与白介素-11(IL-11)、白血病抑制因子(LIF)和胶质细胞源性神经生长因子(GDNF)联合应用对体外诱导人神经干细胞定向分化为多巴胺神经元的影响。方法采用无血清培养技术和单细胞克隆技术、免疫荧光双标技术。结果对照组仅有极少量的神经干细胞分化为不成熟的多巴胺神经元;IL-1α组分化的多巴胺神经元较多,但细胞形态欠成熟;联合因子组分化的多巴胺神经元最多,细胞较为成熟。结论IL-1α具有诱导人神经干细胞向多巴胺神经元分化的作用,联合应用IL-1α、IL-11、LIF和GDNF对人神经干细胞向成熟的多巴胺神经元分化具有协同作用。

重组人白血病抑制因子蛋白对兔椎间盘退变模型髓核细胞凋亡的影响机制

目的:探讨重组人白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)蛋白对兔椎间盘退变模型髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)凋亡的影响机制。方法:采用针刺法构建兔椎间盘退变模型,利用磁共振成像观察兔椎间盘退变程度,摘除髓核组织提取组织蛋白,采用Western Blot法检测髓核组织LIF蛋白表达水平,提取退变NPCs,采用流式细胞术观察不同浓度重组人LIF蛋白对退变NPCs凋亡的影响,采用Western Blot法检测不同浓度重组人LIF蛋白对细胞外基质成分和MAPK-ERK1/2通路蛋白表达的影响。结果:模型组兔的椎间盘高度和信号-噪声比(SNR)明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组兔髓核组织中LIF蛋白表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);针刺2周、4周及8周,各组兔髓核组织中LIF蛋白表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);0、10、20、50及100 ng/ml重组人LIF蛋白处理的退变NPCs凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.05);0、10、20、50及100 ng/ml重组人LIF蛋白处理的退变NPCs中Aggtecan蛋白、Ⅱ型胶原及p-ERK1/2蛋白表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:兔椎间盘退变髓核组织中LIF蛋白呈高表达,其可能通过激活ERK1/2通路促进细胞外基质合成达到抑制NPCs凋亡作用,重组LIF在延缓椎间盘退变方面显示出了良好前景。

《庆余年》中的情感蕴藉及其人文性思考

电视剧《庆余年》是一部集玄幻、成长、重生意识等众多元素的古装穿越剧,它在身份认同分裂、代际观念疏离与人际交往的善与恶三个方面与现代性社会相通,触碰到了社会转型期新青年的隐性心理而独具反思意义,同时进一步引起对个人与集体、理想与现实的选择,历史的重复与否等问题的思考与追问。

胎盘组织白血病抑制因子和hCG的表达与妊娠期高血压疾病的关系

目的:探讨白血病抑制因子(LIF)基因和人绒毛膜促性腺激素(hCG)基因在胎盘组织的表达与妊娠期高血压疾病(HDCP)的关系。方法:采用荧光定量RT-PCR(FQ-RT-PCR)技术,对37例子痫前期患者、50例妊娠期高血压患者和80例正常足月妊娠妇女胎盘组织进行LIF-mRNA和hCG mRNA的检测,分析目的基因与β-actin拷贝数的比值。结果:①子痫前期组LIF mRNA的表达较妊娠期高血压组和正常对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.01),且随着病情的加重,LIF mRNA表达下降。妊娠期高血压组和正常对照组比较,LIF mRNA的表达稍有降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。②hCG mRNA的表达水平均按照正常对照组、妊娠期高血压组、子痫前期组依次升高,子痫前期组与妊娠期高血压组、正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。妊娠期高血压组与正常对照组比较,hCG mRNA表达水平的差异无统计学意义(P>0.05)。③通过pearson相关分析,子痫前期组LIF mRNA的表达量和hCG mRNA的表达量相关系数为-0.57,呈显著性负相关(P<0.05)。结论:HDCP患者胎盘中LIF表达下降和hCG水平升高,可能通过影响细胞滋养细胞的浸润能力而影响血管床的发育,共同参与了子痫前期的发病过程。

白血病抑制因子通过JAK2/STAT3信号通路对牙周膜细胞增殖影响的研究

目的:探究白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)及(双面联胎激酶2,Janus kinase 2,JAK2)/(信号传导转录启动因子3,signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)对人牙周韧带细胞(human perio-dontal ligament cells,HPDLCs)增殖影响.方法:体外培养HPDLCs至第3代,在LIF、LIF中和抗体及JAK2抑制剂(AG490)刺激后检测HPDLCs增殖情况,HPDLCs分裂速度、细胞周期及对JAK2/STAT3信号通路的影响.结果:CCK-8检测显示,LIF在20~40 ng/mL促进HPDLCs增殖(P<0.01),而LIF中和抗体或AG490组,增殖显著被抑制(P<0.01).流式分析显示LIF组HPDLCs荧光强度最弱而LIF/AG490和AG490组荧光强度较强.碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色显示LIF组PI指数明显增高,S期明显增长,而LIF/AG490和AG490组则相反.免疫荧光显示LIF组p-JAK2及-STAT3的表达显著提高.Western Blot显示LIF组JAK2明显磷酸化;而AG490组,p-JAK2被减弱;STAT3的磷酸化也如此.结论:LIF通过JAK2/STAT3信号通路促进HPDLCs增殖.

白血病抑制因子对人牙周膜细胞成骨向分化的影响

目的:探究白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,HPDLCs)成骨分化能力的影响。方法:分离培养HPDLCs,分别为空白对照组、标准骨诱导组和加入重组人白血病抑制因子(recombinant human leukemia inhibitory factor,rh LIF)的骨诱导组。7 d后碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)染色及活性检测,21 d后矿化结节染色和定量分析,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测第5 d HPDLCs中成骨相关基因ALP、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)和骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)的mRNA表达量。结果:7 d后,标准骨诱导组ALP染色呈深蓝色,LIF刺激后,染色明显变浅,活性显著下降(P<0. 01)。21 d后,标准组HPDLC有大量矿化结节形成,而LIF组明显减少(P<0. 05),qRT-PCR结果显示标准组ALP、BSP和OCN的表达显著提高(P<0. 01),而LIF刺激后,表达明显降低(P<0. 01)。结论:LIF可抑制HPDLC的成骨向分化。