二烯丙基二硫活化NADPH氧化酶诱导人白血病K562细胞凋亡

目的研究DADS诱导人白血病K562细胞凋亡的分子机制。方法应用MTT法检测细胞的活性;流式细胞术检测细胞内的活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平以及凋亡细胞百分率;Real-time PCR检测NADPH氧化酶各亚基mRNA水平;免疫共沉淀检测蛋白Rac2与蛋白p67phox的结合;Western blot检测Rac2蛋白的表达。结果 DADS能明显抑制K562细胞的增殖,呈时间和剂量依赖性;6 mg·L-1DADS作用人白血病K562细胞6 h后,NADPH氧化酶复合物的6个亚基mRNA水平都明显上调;5.0、10.0 mg·L-1DADS作用人白血病K562细胞24 h后蛋白Rac2的表达水平明显上调;免疫共沉淀结果显示,DADS诱导的K562细胞凋亡过程中有Rac2与p67phox结合;流式细胞术检测凋亡细胞百分率结果显示,PMA能明显提高DADS诱导K562细胞凋亡的作用,而DPI能抑制DADS诱导K562细胞凋亡。PMA能提高DADS诱导K562细胞活性氧的水平,而DPI明显抑制了活性氧的产生。结论 NADPH氧化酶的活化是DADS诱导K562细胞凋亡过程中活性氧的主要来源,DADS通过活化NADPH氧化酶诱导K562细胞凋亡。

姜黄素对人白血病K562细胞凋亡的影响

Ｋ５６２细胞对多种化疗药物诱导凋亡具有抗性，本文以ＡＯ／ＥＢ染色法、细胞分光光度术、ＤＮＡ凝胶电泳及电镜观察等方法，发现姜黄素可显著诱导Ｋ５６２细胞凋亡，提示该药对治疗慢性粒细胞性白血病可能有价值。

蒜头果蛋白对人白血病K562细胞体外生长的抑制作用

从蒜头果种子中提取蒜头果蛋白并测定其对人白血病K562细胞体外生长的抑制作用。结果表明,蒜头果蛋白具有明显抑制K562细胞体外增殖的作用,且存在时间和剂量依赖性,其半数抑制浓度IC50值为1.58×10-8mol·L-1。蒜头果蛋白与顺铂联用表现出了明显的协同抑制效应,两药联用效应会增加。此外,蒜头果蛋白的热稳定性较好,非常便于贮存。本文为蒜头果蛋白在肿瘤治疗方面的开发利用提供依据和思路,也为该蛋白作为新药的研发奠定基础。

葡萄糖神经酰胺合酶基因在多药耐药肿瘤细胞株K562/AO2中的表达及其与白血病多药耐药的关系

目的观察葡萄糖神经酰胺合酶(GCS)基因在人红白血病多药耐药细胞株K562/AO2的表达及其与肿瘤多药耐药性(MDR)的关系。方法运用Alamar BlueTM多功能细胞染色法证实K562/AO2的多药耐药性;采用RT-PCR技术检测K562/AO2及其亲本K562细胞株的GCS基因、MDR1基因、bcl-2基因、bax基因的表达水平及其差异。结果(1)阿霉素(ADR)对K562/AO2细胞和K562细胞的IC50分别为75μg/ml和0.65μg/ml,耐药指数为115;长春新碱(VCR)对K562/AO2细胞和K562细胞的IC50分别为8μg/ml和0.22μg/ml,耐药指数为36。(2)K562/AO2细胞GCS基因和MDR1基因的表达明显强于K562细胞;K562/AO2细胞bcl-2基因表达强于K562细胞,而bax基因表达弱于K562细胞。结论GCS基因可能在白血病多药耐药中起着重要的作用,而细胞凋亡基因的表达异常可能是它导致肿瘤多药耐药的主要分子病理机制之一。

石蒜碱对人白血病细胞K562凋亡作用的研究

为了研究石蒜碱对人白血病细胞K562的凋亡作用,采用MTT法检测石蒜碱对K562细胞的细胞毒作用,数据表明石蒜碱对K562细胞的IC50为16.000μmol/L.流式细胞仪检测石蒜碱对K562细胞凋亡率的影响,数据表明给药剂量越大,其凋亡率越高,凋亡率与给药剂量呈依赖关系.激光共聚焦扫描显微镜检测石蒜碱对K562细胞膜电位的影响,数据表明随着给药剂量增大,膜电位逐渐降低,且成剂量依赖关系.结果显示石蒜碱能够诱导K562细胞凋亡并使其膜电位降低.

蛋白酶体抑制剂MG132的浓度对人白血病细胞K562凋亡的影响

探讨蛋白酶体抑制剂MG132在诱导人白血病K562细胞凋亡过程中作用。分别以不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG132处理人白血病细胞K562,通过MTT法检测K562细胞活力,应用AnnexinⅤ和PI双染的细胞流式法检测K562细胞凋亡率和细胞内活性氧(ROS)水平,应用酶标仪法检测K562细胞内Caspase-3活性变化的情况。结果表明,随着MG132浓度的增加,各个指标与对照组比较差异均有显著性(P<0.05):K562细胞增殖明显受到抑制;细胞凋亡率明显增加,且当MG132浓度为900 nmol/L时,细胞凋亡率达36.5%;同时,ROS水平和caspase-3活性明显升高。因次,蛋白酶体抑制剂MG132可显著抑制人白血病细胞K562增殖并促进其凋亡。

家蝇胚胎细胞抗菌肽对人髓样白血病细胞K562的杀伤作用

目的探讨家蝇胚胎细胞抗菌肽和高三尖杉酯碱(HHT)对人髓样白血病细胞K562的抑制、杀伤作用。方法采用脂多糖诱导家蝇胚胎细胞,提取抗菌肽。采用磷酸盐缓冲液(PBS)配制80、160、320及640μg/mL4个浓度,阴性对照组仅加入PBS和培养基。采用流式细胞术检测不同浓度抗菌肽对K562细胞周期和细胞凋亡率的影响。用处于对数生长阶段的K562和人脐静脉血管内皮细胞制备成浓度相同的2个药物组(HHT组和抗菌肽组),不加入药物的2种细胞作为正常对照组。采用流式细胞术检测正常对照组及2个药物组对2种细胞的有效杀伤率。结果 4个浓度组抗菌肽均使K562的S期降低,增殖指数降低,并引起G0/G1期升高,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。4个浓度组K562细胞凋亡率与阴性对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。HHT组和抗菌肽组对K562的有效杀伤率显著升高,HHT组和抗菌肽组与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。HHT组对人脐静脉血管内皮细胞的有效杀伤率显著高于正常对照组和抗菌肽组(P<0.05)。结论家蝇胚胎细胞抗菌肽能有效抑制肿瘤细胞的生长,对正常人体细胞无抑制、杀伤作用。

二烯丙基二硫诱导K562细胞凋亡及与G_2/M期阻滞关系研究

目的探讨二烯丙基二硫(DADS)对体外培养的人白血病细胞系K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法采用细胞计数法、形态学观察、MTT分析法、AO/EB染色、流式细胞术探讨DADS对K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果 1.DADS在10～80mg·L^(-1)范围内,对K562细胞的抑制作用呈剂量-时间依赖效应。2.DADS浓度在10～80mg·L^(-1)时作用K562细胞24h后,凋亡率逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。3.不同浓度DADS作用于K562细胞24h后,K562细胞阻滞于G_2/M期。结论 DADS有抑制K562细胞增殖和促进K562细胞凋亡的作用,其作用的可能机制与k562细胞阻滞于G_2/M期有关。

三氧化二砷通过JNK信号通路诱导K562细胞凋亡

目的:探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在三氧化二砷(As2O3)诱导K562细胞凋亡中的作用及机制。方法:体外培养K562细胞,用As2O3及特异性JNK抑制剂SP600125对K562细胞进行处理;倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化;MTT法检测不同时间点细胞增殖抑制率;AnnexinV/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA检测p-JNK蛋白表达的变化;流式细胞术检测突变型P53表达。结果:ELISA显示4μmol/LAs2O3作用48h后p-JNK蛋白表达增强,经SP600125预处理后,As2O3诱导的K562细胞p-JNK蛋白表达明显减弱(P<0.01),As2O3诱导的细胞增殖抑制率和细胞凋亡率均下降,与As2O3单作用组相比突变型P53表达增加(P<0.05)。结论:JNK信号转导通路在As2O3诱导K562细胞凋亡过程中发挥重要作用,是As2O3诱导K562细胞凋亡的主要途径之一。

洋紫荆中菲醌化合物bauhinione对K562细胞的增殖抑制作用

目的探讨从洋紫荆中分离得到的新的菲醌化合物bauhinione对体外培养的人类慢性骨髓性白血病K562细胞的增殖抑制作用。方法应用罗丹明B法检测bauhinione对癌细胞K562和tsFT210的抑制作用;采用形态学观察以及流式细胞术(FCM)检测该化合物对K562细胞的细胞周期抑制和诱导凋亡作用;通过倍量稀释法考察该化合物的最小抑制质量浓度及其质量浓度为12.5mg.L-1时的时效关系。结果Bauhinione对两种癌细胞的IC50值分别为(24.9±2.1)mg.L-1和(111.36±3.5)mg.L-1,说明K562细胞对bauhinione的作用敏感;Bauhinione对K562细胞的最小抑制质量浓度为6.25mg.L-1;对K562细胞的增殖抑制作用是通过G2-M期抑制和诱导凋亡实现的,并与时间呈依赖关系。结论Bauhinione在体外有抑制K562细胞增殖的作用,为洋紫荆的抗癌活性成分之一。

三氧化二砷诱导K562细胞凋亡及其对Bcl-2和突变型P53蛋白表达的影响

目的：探讨Bcl-2和突变型P53蛋白在三氧化二砷（As2O3）诱导K562细胞凋亡中的作用及机制。方法：分别以1、2、4、8、16μmol/L的As2O3诱导K562细胞凋亡,MTT法检测24、48、72h时细胞增殖抑制率,DNAl-adder法检测细胞凋亡,AnnexinV/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率,流式细胞术检测Bcl-2和突变型P53表达。结果：不同浓度的As2O3对K562细胞具有增殖抑制作用,且呈现时间剂量依赖性。DNA ladder及AnnexinV/PI法结果显示4~16μmol/L的As2O3作用24h均可诱导K562细胞凋亡,且呈剂量依赖性。As2O3诱导K562细胞凋亡同时伴随着胞浆Bcl-2和突变型P53表达降低。结论：As2O3可诱导K562细胞凋亡,Bcl-2和突变型P53表达降低可能与其有关。

模拟微重力对K562细胞增殖的影响

目的:研究微重力环境"航天贫血症"发生的相关机制。方法:采用美国国家航空航天局提供的旋转式细胞培养系统(RCCS-1)模拟微重力环境,培养人白血病K562细胞。用牛巴氏计数板计数细胞,用流式细胞术检测细胞周期,用Western-bloting方法检测细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白表达及其磷酸化水平。结果:模拟微重力环境培养的K562细胞的增殖速度显著低于地面普通培养对照组;同时还显著抑制细胞周期进程,使其停滞在G0/G1期;模拟微重力环境培养的细胞磷酸化ERK1/2表达随时间延长逐渐下降。结论:模拟微重力环境使细胞周期阻滞于G0/G1期,可能是由模拟微重力作用下ERK1/2磷酸化水平下降所致。

环孢素A联合苯基棕榈酰胺吗啡丙醇对K562/AO2细胞GCS基因表达的影响及对逆转多药耐药

目的研究环孢素A(CsA)和苯基棕榈酰胺吗啡丙醇(PPMP)联合应用对人白血病多药耐药细胞株K562/AO2的葡萄糖神经酰胺合酶(GCS)基因表达的影响及对白血病多药耐药的逆转作用,探索逆转白血病细胞耐药的策略。方法应用Alamar BlueTM多功能细胞染色法测定阿霉素(ADR)对K562和K562/AO2细胞的半数抑制浓度(IC50)及判断CsA的非细胞毒性剂量;采用RT-PCR法检测GCS基因和mdr1基因的mRNA表达。结果CsA浓度低于4.5μg/ml对K562/AO2细胞无细胞毒性。ADR对K562和K562/AO2细胞的IC50分别为(0.84±0.04)μg/ml和(89.24±1.27)μg/ml;当1μg/ml CsA和25μmol/L PPMP单用或联合作用于K562/AO2细胞时,ADR的IC50分别为(7.81±0.74)(、17.49±0.53)(、2.82±0.07)μg/ml;而低浓度CsA(0.01μg/ml)和PPMP(10μmol/l)联合作用时IC50为(16.08±1.25)μg/ml。CsA联合PPMP可明显降低GCS基因的mRNA表达,低浓度CsA和PPMP联用也有此作用。结论CsA联合PPMP可通过抑制K562/AO2细胞的GCS基因mRNA表达有效逆转其耐药,低浓度CsA联合PPMP在逆转其耐药的同时降低了细胞毒性。

RAB32对慢性粒细胞白血病K562细胞增殖和迁移作用的研究

目的:探讨RAB32对慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞增殖和迁移作用的影响。方法:使用Western blot和qRT-PCR分别检测RAB32在CML患者、健康对照以及CML K562细胞株中的表达情况。进一步转染RAB32-shRNA到K562细胞株中敲除RAB32基因后,流式细胞仪分析K562细胞周期变化,Western blot和qRT-PCR分别检测K562细胞中细胞增殖相关蛋白C-myc、Cyclin D1和细胞迁移相关蛋白MMP-3、MMP-9的蛋白和mRNA表达水平变化。结果:Western blot和qRT-PCR检测结果显示,RAB32在CML患者和K562细胞株中高表达(P<0.01)。在K562细胞株中转染RAB32-shRNA抑制RAB32表达后,细胞周期分析结果显示,较NC-shRNA组相比,RAB32-shRNA组K562细胞的S期和G2/M期细胞比例均有不同程度降低,且S期细胞比例降低更为显著(P<0.01)。Western blot检测结果显示,与NC-shRNA组相比,RAB32-shRNA组K562细胞的细胞增殖相关蛋白C-myc、Cyclin D1和细胞迁移相关蛋白MMP-3、MMP-9蛋白表达水平明显降低(P<0.01),qRT-PCR检测结果显示,这四种因子的mRNA水平也相应降低(P<0.01)。结论:抑制RAB32的表达能够抑制CML K562细胞的增殖和迁移能力。

Bmi-1 siRNA对人白血病K562细胞增殖的影响及其机制

目的探讨Bmi-1 siRNA对人白血病K562细胞增殖的影响及其作用机制。方法通过脂质体将化学合成针对Bmi-1基因的siRNA转染K562细胞,采用MTT法观察Bmi-1 siRNA对K562细胞增殖的抑制作用;流式细胞术分析细胞周期变化;Western blot检测Bmi-1siRNA对K562细胞中Bmi-1和P16蛋白表达的影响。结果Bmi-1 siRNA能明显延长K562细胞的倍增时间、G1期比例增加;下调Bmi-1表达的同时上调P16蛋白表达。结论体外化学合成的Bmi-1 siRNA对K562细胞的体外增殖具有明显的抑制作用,下调Bmi-1蛋白表达的同时上调P16蛋白表达。

青龙衣醇提物对人白血病K562细胞的基因芯片表达的影响

目的:了解青龙衣醇提物对人白血病K562细胞的基因芯片表达的影响,在基因水平探讨青龙衣醇提物抑制K562细胞增殖的作用机制。方法:制备青龙衣醇提物,在37℃恒温、5%CO2培养K562细胞。采用浓度为0.1、0.5、2.5、12.5、62.5 mg/m L的青龙衣醇提物分别处理K562细胞;采用倒置显微镜与荧光显微镜观察处理后K562细胞的形态改变,并采用流式细胞仪检测K562细胞周期。提取细胞的总RNA,生成c DNA,构建基因芯片,并检测基因表达的结果。结果:经过12.5 mg/m L青龙衣醇提物处理后,通过流式细胞仪测定细胞周期:G1期细胞占23.8%,S期占59.9%,G2期占16.3%;而对照组的细胞周期:G1期占22.9%,S期占72.4%,G2期占4.7%;经青龙衣醇提物处理的细胞中,G2期的细胞比例上升,S期细胞比例下降。管家基因为β-actin,构建的基因芯片的特异性、均一性与重复性均良好。表达上调的基因有chk1;下调的基因有cyclin B1、cyclin E1、cyclin D1、cdk4、cdk2、E2F1、PCNA、VEGF、DNA-TopoⅠ、DNA-PK、jnk和mcl-1。结论:青龙衣醇提物通过调控与细胞周期、血管生成、细胞凋亡有关的基因表达,抑制K562细胞的细胞周期进程,从而表现出抗肿瘤作用。

与白血病骨髓间充质干细胞共培养后K562细胞增殖与凋亡的变化

目的比较K562细胞与人白血病骨髓间充质干细胞（LMSC）共培养前后增殖和凋亡的变化。方法采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）分析法检测SCG和CCG组K562细胞光密度（OD）值,比较不同培养条件下K562细胞的增殖情况。采用流式细胞仪检测与LMSC共培养后K562细胞周期变化,Annexin V/聚酰亚胺（PI）荧光标记法检测血清饥饿后与LMSC共培养后K562细胞凋亡的变化。结果与LMSC共培养后,K562细胞的增殖受到明显抑制,CCG组OD值明显低于SCG组。流式细胞仪检测细胞周期发现,与LMSC共培养后,G0~G1期细胞比例明显增高,S期细胞比例明显下降,且G2~M期细胞比例也呈上升趋势;CCG＋0%FBS组K562细胞凋亡较SCG＋10%FBS组明显增多,较SCG＋0%FBS明显降低,LMSC有抵抗白血病细胞凋亡的作用。结论 LMSC通过阻滞G0~G1期K562细胞周期而发挥抑制增殖的作用,并能抑制血清饥饿诱导的K562细胞凋亡。

4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对人白血病K562细胞的蛋白质组学研究

目的研究新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR)诱导人白血病K562细胞分化作用的蛋白质组学机制。方法1×10-6mol·L-1的ATPR及ATRA分别作用于人白血病K562细胞48 h后,收集细胞并提取总蛋白,纯化之后使用胰蛋白酶酶解,固相萃取法脱盐,高分辨率液相色谱质谱联用仪检测肽段,使用Proteome Discoverer 1.2软件寻找出差异表达的蛋白质,利用生物信息学DAVID数据库、KEGG数据库、STRING数据库,分析鉴定出的差异蛋白质所具有的分子功能、所参与的生物学过程等信息。结果 ATPR组特异性的蛋白质鉴定出120个,ATRA组特异性蛋白质有143个,两者共有蛋白422个。DAVID分析显示ATPR特异性蛋白质主要参与39个生物学过程,包括蛋白质和大分子的代谢、蛋白质转运和定位等。KEGG分析发现,ATPR组特异性蛋白质主要参与新陈代谢过程、PI3K-Akt信号通路、TGF-β信号通路等其他癌症相关信号通路。STRING蛋白相互作用网络分析显示ATPR特异性蛋白质,如EIF3A、EIF6、RPL3、RPL8、RPL13、RPL7A、RPL21、RPS3、RPS14、NACA、BTF3、NHP2L1、PPP2CA蛋白与其他≥10个相关蛋白存在直接相互作用关系。结论 ATPR组特异性中心蛋白质均参与对细胞生长增殖、诱导细胞分化和凋亡等过程的调控,这些蛋白质间的相互作用网络及特异性中心蛋白质是ATPR诱导K562细胞分化作用的可能机制。

Hsa-miR-203联合伊马替尼对慢性粒细胞白血病K562细胞的作用

目的探讨hsa-miR-203联合甲磺酸伊马替尼(mesylate imatinib MI)对人慢性粒细胞白血病K562细胞的影响。方法体外培养K562细胞,利用LipofectamineTM2000将has-miR-203模拟物转染至K562细胞,MTT法检测使用miR-203、MI以及两者联合使用对细胞增殖的抑制率,流式细胞术检测对细胞早期凋亡率的影响。结果 miR-203转染至K562细胞(24、48、72 h)后,联合MI显著抑制K562细胞增殖,抑制效果较各单独使用组作用明显增强。单用miR-203浓度为50μmol·L-1时的抑制率分别为19.69%、25.62%、35.21%。而联合不同浓度(0.5、1、2、3、4μmol·L-1)的伊马替尼,抑制率随着作用时间增加,呈时间—依赖效应。单用hsa-miR-203、伊马替尼及两者联合作用于K562细胞48 h后,早期凋亡率分别为7.8%、8.9%、12.5%。结论当一定浓度的hsa-miR-203与不同浓度的伊马替尼联合之后,对K562细胞的增殖抑制作用增强,hsa-miR-203提高了K562细胞对伊马替尼的敏感性,其机制可能为共同促进K562细胞早期凋亡有关,并为白血病的治疗提供新的依据。

miR-203影响K562细胞对三氧化二砷敏感性的研究

目的 探讨has-miR-203与慢性粒细胞白血病三氧化二砷（As2O3）治疗的敏感性的关系及可能的作用机制.方法 体外培养K562细胞,利用LipofectamineTM 2000将miR-203模拟物转染至K562细胞,流式细胞术检测转染效率,MTT法检测使用miR-203,As2O3以及两者联合使用对细胞增殖的抑制率,并计算IC50;最后用金正均Q值法评价用药效果.结果 miR-203转染至K562细胞,联合As2O3显著抑制K562细胞增殖,抑制效果较各单独使用组作用明显增强.As2O3浓度为0.05,0.1,0.2和0.4 μmol/L时的抑制率分别为24.0%±5.0%,33.1%±1.5%,39.4%±3.4%和47.1%±5.5%.micRNA-203浓度为5,10,20和40 μmol/L时的抑制率分别为27.0%±6.7%,38.8%±3.2%,44.6%±3.0%和59.6%±3.7%.不同浓度梯度的As2O3联合20 μmol/L的micRNA-203抑制率分别为46.9%±3.2%,48.9%±3.9%,50.2%±5.5%和56.1%±1.9%.结论 当一定浓度的miR-203与不同浓度梯度的As2O3联合之后,对K562细胞的增殖抑制表现为相加作用,提高了K562细胞对As2O3的敏感性,为白血病的治疗提供新的依据.