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人甲状旁腺激素在大肠杆菌中的表达及鉴定 被引量:4
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作者 方宏清 戴红梅 +5 位作者 李彦英 赵洪亮 刘志敏 朱厚础 马清钧 陈惠鹏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期102-106,共5页
化学合成人甲状旁腺激素 (hPTH)全长基因 ,克隆到大肠杆菌表达载体pBV2 2 0和pET2 2b中 ,获得了高表达。经破菌、阳离子交换层析、反相层析纯化获得了纯度大于 95 %的纯品。N端测序、质谱分析结果表明重组hPTH结果完整 ,N端无Met或fMet... 化学合成人甲状旁腺激素 (hPTH)全长基因 ,克隆到大肠杆菌表达载体pBV2 2 0和pET2 2b中 ,获得了高表达。经破菌、阳离子交换层析、反相层析纯化获得了纯度大于 95 %的纯品。N端测序、质谱分析结果表明重组hPTH结果完整 ,N端无Met或fMet。生物活性试验证明重组hPTH具有激活腺苷酸环化酶、增加骨质量和骨密度等作用。 展开更多
关键词 人甲状旁腺激素 大肠杆菌 表达 鉴定
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人甲状旁腺素的基因表达及活性的初步研究 被引量:1
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作者 李光富 唐家琪 +2 位作者 于明明 张林元 张克勤 《南京师大学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1999年第1期77-81,共5页
从人甲状旁腺瘤组织中分离到mRNA,逆转成cDNA后,设计带有突变碱基的引物,通过聚合酶链式反应,扩增hPTH基因,使N端前5氨基酸的碱基富含腺嘌呤核苷(A).将该基因克隆到表达载体PETIC上,转化大肠杆菌BL21... 从人甲状旁腺瘤组织中分离到mRNA,逆转成cDNA后,设计带有突变碱基的引物,通过聚合酶链式反应,扩增hPTH基因,使N端前5氨基酸的碱基富含腺嘌呤核苷(A).将该基因克隆到表达载体PETIC上,转化大肠杆菌BL21(DE3)表达,实验证实hPTH的表达量占菌体蛋白总量的11%;细胞粗步处理产物经腺苷环化酶的生物鉴定实验证实,重组hPTH具有生物活性,粗产物500倍稀释后,hPTH的放免活性为206.5ng/L。 展开更多
关键词 甲状旁腺激素 基因表达 生物活性 PTH
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人甲状旁腺素N端34肽基因的合成、克隆及融合表达 被引量:3
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作者 王朝晖 刘景晶 丁敏 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期216-219,共4页
选用大肠杆菌偏爱的密码子,用计算机辅助设计、合成长度分别为59 、59 及60 碱基的三段寡核苷酸。以中段寡核苷酸为模板,两端寡核苷酸为引物,经PCR 合成完整的hPTH(134) 基因,并克隆到pUC18 载体中。对克隆基因进行序列分析,结果与设... 选用大肠杆菌偏爱的密码子,用计算机辅助设计、合成长度分别为59 、59 及60 碱基的三段寡核苷酸。以中段寡核苷酸为模板,两端寡核苷酸为引物,经PCR 合成完整的hPTH(134) 基因,并克隆到pUC18 载体中。对克隆基因进行序列分析,结果与设计的完全一致。将该基因与表达载体pKA 连接构建表达质粒pKAT,转化大肠杆菌JM105 细胞,SDSPAGE 表明hPTH(134) 融合蛋白获得了表达,并且酸水解后融合蛋白被裂解为大小两个片段。 展开更多
关键词 人甲状旁腺素(134) 聚合酶链式反应 基因克隆 融合表达
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糖基化终产物对人血管内皮细胞过氧化体增殖物激活型受体γ基因表达的影响
4
作者 刘勇 刘乃丰 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 2004年第2期135-138,共4页
为探讨糖基化终产物对人血管内皮细胞表达过氧化体增殖物激活型受体γ基因的影响 ,体外培养人血管内皮细胞株 (ECV30 4 ) ,分别用不同浓度葡萄糖 (0、2 0、5 0和 80mmol L)孵育的糖基化终产物修饰牛血清白蛋白(2 0 0mg L)、不同浓度的... 为探讨糖基化终产物对人血管内皮细胞表达过氧化体增殖物激活型受体γ基因的影响 ,体外培养人血管内皮细胞株 (ECV30 4 ) ,分别用不同浓度葡萄糖 (0、2 0、5 0和 80mmol L)孵育的糖基化终产物修饰牛血清白蛋白(2 0 0mg L)、不同浓度的糖基化终产物修饰牛血清白蛋白 (5 0、10 0、2 0 0和 4 0 0mg L)干预 2 4h和葡萄糖浓度为 5 0mmol L孵育的糖基化终产物修饰牛血清白蛋白干预细胞 0、12、2 4、36、4 8和 72h ,逆转录聚合酶链反应检测细胞中过氧化体增殖物激活型受体γmRNA的表达水平。结果发现 ,葡萄糖浓度为 2 0、5 0和 80mmol L孵育的糖基化终产物修饰牛血清白蛋白及浓度为 5 0、10 0、2 0 0和 4 0 0mg L的糖基化终产物修饰牛血清白蛋白都减少过氧化体增殖物激活型受体γmRNA的表达 (P <0 .0 0 1) ,干预 12、2 4、36、4 8和 72h后过氧化体增殖物激活型受体γmRNA表达均较未干预组明显减少 (P <0 .0 0 1)。此结果提示 ,糖基化终产物可抑制人血管内皮细胞过氧化体增殖物激活型受体γ基因的表达。 展开更多
关键词 细胞生物学 糖尿病 糖基化终产物 人血管肉皮细胞 过氧化体增殖物激活型受体Γ 基因表达
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人甲状旁腺激素的基因克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量:4
5
作者 刘国安 唐建国 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期264-268,共5页
人甲状旁腺激素(Humanparathyroidhormone,hPTH)是84个氨基酸组成的多肽激素。从人甲状旁腺肿瘤组织分离纯化总RNA,其mRNA逆转录得cDNA,以cDNA为模板,PCR扩增得hPTH基因。将... 人甲状旁腺激素(Humanparathyroidhormone,hPTH)是84个氨基酸组成的多肽激素。从人甲状旁腺肿瘤组织分离纯化总RNA,其mRNA逆转录得cDNA,以cDNA为模板,PCR扩增得hPTH基因。将该基因克隆到表达载体pBV220上,转化大肠杆菌DH5α细胞,获得了表达。细胞抽提液1000倍稀释后hPTH的放免活性26577ng/dl,为对照的480倍。表达产物粗分离后经ResourceS阳离子柱进行了分离。 展开更多
关键词 甲状旁腺激素 基因克隆 表达 纯化 基因工程
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白蛋白修饰的人甲状旁腺激素的表达、纯化及活性鉴定 被引量:1
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作者 王一君 陈蕴 +5 位作者 张莲芬 雷楗勇 陈其亮 李英 储敏 金坚 《药物生物技术》 CAS CSCD 2009年第1期8-13,共6页
采用构建的含人甲状旁腺激素-血清白蛋白融合蛋白(PTH-HSA)的酵母工程菌Pichiapastoris进行表达条件研究,发酵上清中PTH-HSA表达量为171mg/L。发酵液经超滤浓缩。
关键词 甲状旁腺激素 巴斯德毕赤酵母 融合蛋白 纯化 活性 成骨细胞
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