hREV3基因对细胞增殖周期的影响

应用反义阻断REV3基因表达的人胚肾上皮细胞（HEK-293-M-REV3-）来研究人类REV3基因对细胞增殖周期的影响，评价该基因在哺乳类细胞突变形成中的作用，探讨其与肿瘤形成的关系。文章应用流式细胞技术分别对在自发或不同理化诱发条件[（紫外线，UVB）和（甲基甲烷磺酸酯，MMS）]下，对体外培养的HEK-293-M—REV3-细胞进行细胞增殖周期和DNA含量的影响进行检测，并计算细胞的增殖指数。结果显示：自发状态下，HEK-293-M—REV3-细胞与对照组细胞相比S期延长；而UVB和MMS不同理化因素诱导时，HEK-293-M—REV3-细胞的G2-M期或S期比例明显比对照组增加，PI值也相应增加。因此可以推测，当REV3基因低表达时，细胞无论在自发还是诱发情况下突变频率均降低，原因可能与细胞周期的改变有关，进而再引起DNA复制叉阻滞、合成减少，导致细胞死亡或凋亡。

人REV3基因与紫外线诱导突变形成原因的探讨

目的利用反义阻断REV3基因表达的人胚肾上皮细胞(HEK293-M-REV3-)检测其对紫外线(UVB)的敏感性及细胞动力学的改变,评价hREV3基因在紫外线诱发突变中的作用。方法体外培养HEK293-M-REV3-细胞,利用MTT法检测hREV3缺陷细胞系对UVB的敏感性,采用流式细胞技术DNA含量分析法检测细胞周期及DNA倍体指数(D I值)的变化,计算增殖指数PI值。结果HEK293-M-REV3-细胞系对UVB的IC50为47.97m J/cm2,其敏感性明显比对照细胞高,流式细胞技术检测结果显示,自发状态下HEK293-M-REV3-细胞系的S期比例增加,UVB处理后细胞G2-M期延长,随着处理后培养时间的延长,细胞周期停滞现象更明显,细胞的PI相应的有所改变。结论阻断hREV3基因表达,细胞对紫外线等物质敏感性增加,提示REV3基因参与哺乳动物细胞易误性跨损伤修复,易引起突变形成,原因可能与细胞周期的改变有关,由于REV3基因的低表达,细胞不能跨越损伤而使细胞周期停滞于致突变物质作用敏感的S期或G2-M期,引起DNA复制叉停滞,最终引起的结果是细胞的凋亡或死亡。

REV3基因低表达对COLO-205细胞增殖的影响

目的检测REV3基因低表达后对COLO-205细胞增殖的影响情况。方法采用RNA干扰技术特异性的下调人类结肠癌细胞(COLO-205)中REV3基因的表达情况:实验组细胞加入的培养基中包含脂质体及降低REV3基因表达的质粒,阴性对照组细胞加入的培养基中包含脂质体及空质粒,空白对照组细胞只加入培养基。实时荧光定量PCR技术检测不同细胞REV3基因的相对表达量,通过细胞计数和MTT检测,比较REV3基因表达量不同的细胞生长增殖情况。结果 REV3基因的表达量降低后,COLO-205实验组细胞的增殖速度与对照组细胞相比较明显降低,差别有统计学意义(P<0.05);而阴性对照组和空白对照组的细胞增殖情况虽然有一定的差异,但差别没有统计学意义。结论特异性的下调REV3基因在COLO-205中的表达量,可能对该细胞的生长与增殖均具有一定的抑制作用。