Correlation of Runt-related transcription factor gene 3 expression in osteosarcoma tissue with cell proliferation and angiogenesis

Objective:To study the correlation of Runt-related transcription factor gene 3 (RUNX3) expression in osteosarcoma tissue with cell proliferation and angiogenesis.Methods: A total of 80 patients with osteosarcoma who were treated in our hospital between February 2014 and February 2017 were collected, and the RUNX3 expression in osteosarcoma tissue and adjacent tissue were detected. According to the RUNX3 expression in tumor tissue, the patients were further divided into high RUNX3 expression group and low RUNX3 expression group, and the proliferation gene and angiogenesis gene expression were compared.Results:RUNX3, KISS-1 and RanBP9 mRNA expression in osteosarcoma tissue were significantly lower than those in adjacent tissue while VCP, Six1, S100A6, IF-1α, MMP-14, bFGF and Ang-2 mRNA expression were significantly higher than those in adjacent tissue;KISS-1 and RanBP9 mRNA expression in osteosarcoma tissue of high RUNX3 expression group were significantly higher than those of low RUNX3 expression group while VCP, Six1, S100A6, IF-1 , MMP-14, bFGF and Ang-2 mRNA expression were significantly lower than those of low RUNX3 expression group.Conclusions:The desease of RUNX3 expression in osteosarcoma tissue is one of the direct causes of increased tumor proliferation activity and strong angiogenesis.

HPV DNA负荷量、辅助性T细胞17、FoxP3+调节性T细胞及炎症因子与高危型HPV感染的相关性分析

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)DNA、辅助性T细胞17(Th17)、叉头状转录因子3阳性(FoxP3^(+))调节性T细胞(Treg)及宫颈灌洗液中炎症因子与高危型HPV感染的相关性,为高危型HPV感染防治提供新思路。方法将2020年9月至2021年2月该院收治的高危型HPV感染患者100例纳入研究作为研究组,然后将其中50例高危型HPV16/18阳性患者作为HPV16/18组,50例其他12种高危型阳性病例作为其他亚型组。另外,选取同期体检的健康女性作为对照组(n=50)。比较研究组和对照组HPV DNA负荷量、Th17、FoxP3^(+)Treg及宫颈灌洗液中炎症因子[白细胞介素(IL)-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-17A]水平,比较HPV16/18组和其他亚型组各项指标水平,比较不同宫颈病变患者各项指标水平。分析各项指标与高危型HPV感染、宫颈病变的相关性,以及对宫颈病变患者高危型HPV感染的诊断价值。结果研究组HPV DNA负荷量、Th17、FoxP3^(+)Treg及宫颈灌洗液中IL-10、TNF-α、IL-17A水平均高于对照组(P<0.05),HPV16/18组各项指标水平均高于其他亚型组(P<0.05)。不同宫颈病变患者各项指标水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。HPV DNA负荷量、FoxP3^(+)Treg、Th17及宫颈灌洗液中IL-10、TNF-α、IL-17A水平与高危型HPV感染分型(HPV16/18=1,其他亚型=2)均呈负相关(P<0.05),与宫颈病变(宫颈上皮内瘤变Ⅰ级=1,宫颈上皮内瘤变Ⅱ级=2,宫颈上皮内瘤变Ⅲ级=3,宫颈癌=4)均呈正相关(P<0.05)。各项指标联合诊断高危型HPV16/18阳性的曲线下面积(AUC)为0.911(95%CI:0.837~0.959),大于各指标单独诊断。结论高危型HPV感染患者HPV DNA负荷量、Th17、FoxP3^(+)Treg及炎症因子水平异常,与高危型HPV感染分型、宫颈病变密切相关,而且HPV DNA负荷量与Th17、FoxP3^(+)Treg、炎症因子相关,各项指标联合检测可为临床防治高危型HPV持续感染提供可靠依据。

FGF2对矿化诱导下STAT3介导的h DPSCs成牙分化作用研究

目的探讨成纤维细胞生长因子2(FGF2)对人牙髓干细胞(hDPSCs)成牙分化的影响及对信号转导子与激活子3(STAT3)通路的调节作用。方法hDPSCs随机分为对照组、FGF2组、Stattic组和FGF2+Stattic组,细胞进行成骨诱导。FGF2组细胞20 ng/mL FGF2处理,Stattic组细胞4μM Stattic预处理30 min,FGF2+Stattic组细胞4μM Stattic预处理30 min后,20 ng/mL FGF2处理。CCK-8检测细胞活力,qRT-PCR检测牙本质基质蛋白1(DMP-1)和牙本质涎磷蛋白(DSPP)mRNA相对表达量,检测碱性磷酸酶(ALP)活性,茜素红染色观察矿化情况,蛋白印迹法检测FGF2、p-STAT3、DMP-1和DSPP蛋白相对表达量。结果与对照组比较,FGF2组细胞增殖活性、ALP活性、DMP-1和DSPP mRNA表达量、FGF2、p-STAT3、DMP-1和DSPP蛋白表达量升高(P<0.05);与对照组比较,Stattic组细胞增殖活性和ALP活性减弱、DMP-1和DSPP mRNA表达量以及FGF2、p-STAT3、DMP-1和DSPP蛋白表达量降低(P<0.05);与FGF2组比较,FGF2+Stattic组细胞增殖活性和ALP活性减弱,DMP-1和DSPP mRNA和蛋白相对表达量、FGF2和p-STAT3蛋白相对表达量降低(P<0.05);与Stattic组比较,FGF2+Stattic组细胞增殖活性和ALP活性增强,DMP-1和DSPP mRNA和蛋白相对表达量、FGF2和p-STAT3蛋白相对表达量升高(P<0.05)。结论FGF2可诱导hDPSCs成牙本质分化,可能是通过调节STAT3信号通路发挥作用。

绿原酸调控miR-124/STAT3轴减轻ox-LDL诱导的血管内皮细胞炎症损伤

目的:探讨绿原酸(CGA)通过调节miR-124/信号转导和转录活化因子3(STAT3)轴对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎症损伤的影响。方法:体外培养HUVECs细胞,分为对照组、ox-LDL组、ox-LDL+CGA 25、50、100μmol/L组、ox-LDL+CGA 100μmol/L+NC inhibitor组、ox-LDL+CGA 100μmol/L+miR-124 inhibitor组,ox-LDL浓度均为150μg/ml。RT-qPCR检测细胞中miR-124、STAT3 mRNA水平;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA检测细胞培养液中TNF-α、IL-1β、IL-6水平;Western blot检测细胞中STAT3、CyclinD1、Bax、Caspase-3蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-124与STAT3的靶向关系。结果:与对照组相比,ox-LDL组HUVECs凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、STAT3 mRNA及蛋白表达水平显著升高,细胞OD值、CyclinD1蛋白表达、miR-124表达水平显著降低(P<0.05);与ox-LDL组比较,ox-LDL+CGA 25、50、100μmol/L组细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、STAT3 mRNA及蛋白表达水平显著降低,细胞OD值、CyclinD1蛋白表达、miR-124表达水平显著升高(P<0.05);抑制miR-124表达可逆转CGA对ox-LDL诱导的HUVECs细胞炎症损伤的减轻作用;双荧光素酶报告基因实验显示miR-124与STAT3存在靶向关系。结论:CGA可减轻ox-LDL诱导的HUVECs炎症损伤,其作用机制与上调miR-124及抑制STAT3表达有关。

磷酸化信号转导和转录激活因子3(Y705)在子宫腺肌症中的表达及其临床意义

目的通过检测磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)(Y705)和血管内皮生长因子(VEGF)在正常子宫内膜与子宫腺肌症在位内膜中的定位与表达,探讨p-STAT3(Y705)和VEGF在子宫腺肌症中发生发展中的作用。方法免疫组织化学SP法检测14例正常子宫内膜和14例子宫腺肌症在位内膜中p-STAT3(Y705)和VEGF的定位和表达情况;Real-time PCR检测正常子宫内膜与子宫腺肌症在位内膜组织中STAT3 mRNA表达情况;Western blotting检测正常子宫内膜与子宫腺肌症在位内膜组织中p-STAT3(Y705)、STAT3和VEGF蛋白的表达水平。结果 p-STAT3(Y705)主要在正常子宫内膜和子宫腺肌症在位内膜腺上皮细胞核中表达,子宫腺肌症在位内膜蛋白表达高于正常子宫内膜(P<0.05),正常子宫内膜和子宫腺肌症在位内膜相应的增殖期和分泌期p-STAT3(Y705)的表达无显著性差异(P>0.05)。正常子宫内膜和子宫腺肌症在位内膜中,STAT3在mRNA和蛋白表达水平差异均无显著性(P>0.05)。VEGF主要表达在腺上皮细胞中,子宫腺肌症在位内膜蛋白表达高于正常子宫内膜(P<0.05),正常子宫内膜和子宫腺肌症在位内膜相应的增殖期和分泌期VEGF的表达差异无显著性(P>0.05)。结论 p-STAT3(Y705)促进血管生成对子宫腺肌症的发生发展有一定的作用。

氧化应激对膀胱癌中抑癌基因人runt相关转录因子3的影响

目的研究外源性活性氧过氧化氢(H2O2)诱导的氧化应激对膀胱癌中抑癌基因人runt相关转录因子3(RUNX3)表达和启动子区甲基化状态的影响。方法将膀胱癌HT1197细胞株分为H2O2组、H2O2+N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)组、H2O2+5-氮杂-2’脱氧胞苷(5-Aza-dC)组和空白对照组。采用Western印迹法检测H2O2作用下NAC、5-Aza-dC对细胞RUNX3蛋白表达的影响,甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)检测H2O2作用下NAC、5-Aza-dC对细胞RUNX3启动子甲基化状态的影响,Western印迹法检测H2O2处理对DNA甲基转移酶1(DNMT1)和组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)蛋白表达的影响,平板克隆形成实验检测H2O2处理对细胞克隆形成能力的影响。结果 H2O2组处理HT1197细胞株48h后的RUNX3蛋白表达水平显著低于空白对照组(P<0.05);而H2O2+NAC组、H2O2+5-Aza-dC组随着H2O2处理时间的增加RUNX3蛋白表达无明显变化,与空白对照组的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。H2O2组细胞RUNX3基因启动子区域发生甲基化,H2O2+NAC组和H2O2+5-Aza-dC组细胞发生部分甲基化,而空白对照组细胞RUNX3基因启动子区域未发生甲基化。使用H2O2处理膀胱癌细胞株48h后,H2O2组HT1197细胞中HDAC1和DNMT1蛋白表达均显著高于空白对照组(P值均<0.05)。H2O2组细胞形成的克隆体积较大、数量较多,其克隆形成率显著高于空白对照组(P<0.05)。结论外源性活性氧H2O2能促进膀胱癌细胞生长并影响RUNX3启动子区甲基化状态和表达,用抗氧化剂NAC或去甲基化制剂5-Aza-dC能逆转RUNX3启动子区甲基化并恢复其表达。提示外源性活性氧H2O2造成的膀胱癌细胞氧化应激很可能是膀胱癌细胞株中抑癌基因RUNX3启动子区异常甲基化、表达下调的主要原因。

Runx3、Rassf1a基因启动子在胃癌组织中的高甲基化及Dnmt1的表达

目的:探讨人类相关转录因子3(human runt-related transcription factor 3,Runx3)、Ras相关区域家族1A(ras-association domain family 1a,Rassf1a)基因启动子区的甲基化和甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,Dnmt1)基因的表达与胃癌发生的关系及临床意义.方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(meth-ylation specific PCR,MSP)检测68例胃癌组织及其相应癌旁正常组织中Runx3、Rassf1a基因启动子区甲基化状态;同时应用实时荧光定量逆转录-多聚合酶链反应(real-time RT-PCR)和免疫组织化学SP法分别检测基因的Runx3、Rassf1a、Dnmt13个基因mRNA和蛋白的表达情况.结果:胃癌组织中Runx3、Rassf1a基因的甲基化阳性率较正常组织明显升高(45.59%vs10.29%;64.70%vs7.35%).胃癌组织中Runx3和Rassf1a mRNA阳性表达率明显低于正常组织(36.76%vs100%;27.94%vs97.06%),而胃癌组织中Dnmt1 mRNA阳性表达率则明显高于正常组织(80.88%vs17.65%),差异均有统计学意义差异.胃癌组织与正常组织RUNX3、RASSF1a、DNMT1蛋白与mRNA表达基本相一致.Runx3 mRNA、Rassf1a mRNA阴性表达的胃癌组织中其基因启动子的甲基化率较阳性表达者明显升高(72.09%vs0;85.71%vs2.94%),差异具有统计学意义.胃癌组织中RUNX3、RASSF1a与DNMT1蛋白的表达均呈负相关(r=-0.627,P<0.0001;r=-0.477,P<0.0001).结论:Runx3、Rassf1a基因启动子区的高甲基化及Dnmt1基因高表达可能与胃癌发生有关.

转录因子EZH2和RUNX3在骨巨细胞瘤中的表达及与复发的关系研究

目的:探讨zeste基因增强子同源物2(EZH2)和人类RUNT相关转录因子3(RUNX3)在骨巨细胞瘤中的表达,及与骨巨细胞瘤复发的关系。方法:选取2013年10月至2018年1月在本院经病理组织检查确诊为骨巨细胞瘤并接受手术治疗者53例为研究对象,术中收集骨巨细胞瘤患者瘤组织以及瘤旁组织(距瘤组织>3cm),采用免疫组织化学法检测EZH2和RUNX3的表达,分析其与患者临床病理特征的关系;采用Spearman进行相关性分析;术后随访36个月,比较复发组与未复发组EZH2和RUNX3的表达情况。结果:骨巨细胞瘤瘤组织EZH2阳性表达率(69.81%)高于瘤旁组织(15.09%)(P<0.05),RUNX3阳性表达率(32.08%)低于瘤旁组织(86.79%)(P<0.05);瘤组织EZH2、RUNX3表达与肿瘤直径、影像学分级、病理学分级、组织浸润程度均有关(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示,骨巨细胞瘤瘤组织中EZH2、RUNX3表达呈负相关(r=-0.544,P<0.05);复发组EZH2阳性表达率(93.33%)高于未复发组(60.53%)(P<0.05),RUNX3阳性表达率(0.00%)低于未复发组(44.74%)(P<0.05)。结论:骨巨细胞瘤瘤组织中EZH2为高表达,RUNX3为低表达,且与患者临床病理特征密切相关,EZH2、RUNX3表达呈负相关,EZH2可能抑制RUNX3表达,EZH2、RUNX3可能用于骨巨细胞瘤的病情及预后评估。

白细胞介素22经信号转导和转录激活因子3通路对人脐静脉内皮细胞苏氨酸495磷酸化及小鼠内皮功能和血压的影响

目的探讨白细胞介素22(IL-22)经信号转导和转录激活因子3(Stat3)通路对人脐静脉内皮细胞苏氨酸495(thr495)磷酸化及小鼠内皮功能和血压的影响,为治疗高血压提供新的思路。方法随机将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分成6组,分别为二甲基亚砜溶剂处理组(对照组),重组人IL-22组,S31-201组,S31-201+IL-22组,Go6976组,Go6976+IL-22组,各组经相应处理后检测Stat3通路活化状态和一氧化氮合酶(e NOS)抑制性位点thr495磷酸化的表达。32只C57BL/6小鼠随机分成4组,均经腹腔注射给药,第一组给予磷酸盐缓冲液(PBS)(对照组),第二组给予15μg/kg IL-22(模型组),第三组给予15μg/kg IL-22+二甲基亚砜溶剂(S31-201对照组),第四组给予15μg/kg IL-22+5 mg/kg S31-201(S31-201模型组)。处理14 d后测量尾动脉收缩压、主动脉NO表达、Stat3通路活化状态和thr495磷酸化的表达。结果 HUVECs经过重组人IL-22处理后可以引起Stat3通路活化及e NOS thr495磷酸化增多,这种作用可以被Stat3通路阻断剂S31-201阻断(P<0.05),但蛋白激酶C(PKC)阻断剂Go6976对其没有影响(P>0.05)。IL-22组小鼠较对照组收缩压显著升高,主动脉Stat3通路活化及e NOS thr495磷酸化增多,NO的表达下降,这些作用均可被S31-201阻断(均P<0.05)。结论 IL-22可以通过激活Stat3通路引起内皮功能障碍和高血压。抑制IL-22的生成或Stat3通路的激活是一个预防或治疗高血压的方法。

非小细胞肺癌血清MGMT、RASSF2、RUNX3及RASSF1A基因启动子CpG岛甲基化的联合检测及意义

目的探讨非小细胞肺癌患者血清中人类O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)、RASSF2、人类Runt相关转录因子3、RAS相关区域家族1A基因启动子区域甲基化状况及其临床意义。方法基因测序法检测62例NSCLC患者(肺癌组)和30例肺部良性疾病患者和16例健康体检者(对照组)血清中MGMT、RASSF2、RUNX3、RASSF1A基因启动子区域甲基化状况,并分析目标基因启动子区域甲基化状况与临床特征的关系。结果肺癌组MGMT基因甲基化频率为27.42%(17/62),而对照组为0(0/46)(x2=14.97,P<0.01);MGMT基因甲基化状态与年龄、性别、病理类型和分化状况无明显相关(P>0.05)。甲基化组吸烟指数(620.78±135.34)高于非甲基化组(498.96±150.87)(t=2.91,P<0.05)。MGMT基因甲基化多见于晚期患者,Ⅰ～Ⅱ期甲基化率为0(0/11)而Ⅲ～Ⅳ期为33.33%(17/51)(Fisher精确概率法,P<0.05)。肺癌组RASSF2基因甲基化频率为38.71%(24/62),而对照组为0(0/46)(x2=22.89,P<0.01);NSCLC患者血清RASSF2基因甲基化检出率与年龄、性别、病理类型、临床分期、分化程度无明显相关(P>0.05),不吸烟者RASSF2甲基化率高于吸烟者(61.90%vs26.83%,x2=7.20,P<0.05)。结论 MGMT、RASSF2、RUNX3、RASSF1A等基因异常甲基化在NSCLC患者外周血中有较高的发生率。MGMT、RASSF2、RUNX3、RASSF1A等基因异常甲基化状态可能和患者临床资料有一定关系。MGMT、RASSF2、RUNX3、RASSF1A等基因异常甲基化可能在NSCLC发生、发展中起重要作用。MGMT、RASSF2、RUNX3、RASSF1A等基因异常甲基化状态有望成为NSCLC辅助诊断和预后判断的分子标记。

原发性肝癌RUNX3基因启动子区甲基化及其意义

目的检测原发性肝癌(hepatocellular carcinomas,HCC)中人RUNT相关转录因子3(human runt-related tran-scription factor 3,RUNX3)基因启动子的甲基化情况,探讨其与患者临床特征的关系。方法收集95例HCC患者的肿瘤标本及相应的癌旁肝组织、20例正常肝组织,95例HCC患者中合并肝硬化患者57例,按照肝硬化Child-Pugh肝功能分级标准,将57例患者分为A级36例,B级11例,C级10例,运用甲基化特异性PCR检测RUNX3基因启动子CpG岛甲基化状态,分析RUNX3甲基化情况与患者临床特征的关系。结果 95例HCC组织中,45.3%(43/95)存在RUNX3基因CpG岛的异常甲基化,癌旁肝组织中有9.5%(9/95)存在异常甲基化,而正常肝组织中未检测到RUNX3基因CpG岛的异常甲基化;RUNX3基因异常甲基化在HCC组织中的发生率与癌旁组织及正常肝组织比较差异有统计学意义(P<0.01),RUNX3基因CpG岛甲基化与患者肝硬化、门脉癌栓关系密切(P<0.05)。肝硬化Child-Pugh肝功能C级组RUNX3启动子甲基化水平明显高于A级组和B级组(P<0.05)。结论 HCC存在RUNX3基因CpG岛异常甲基化,CpG岛的甲基化可能是导致其基因表达降低的主要原因之一,并与患者肝硬化、门脉癌栓密切相关。

RUNX3启动子甲基化与胃癌发生发展的关系

目的检测胃癌RUNX3基因启动子区域甲基化情况,探讨RUNX3基因在胃癌发生和发展过程中的意义。方法采用DNA甲基化特异性聚合酶链反应[methylation-specific polymerase chain reaction,PCR(MSP)]技术对30例胃癌患者手术切除肿瘤组织及其癌旁组织RUNX3基因启动子区域甲基化进行检测。结果 RUNX3基因甲基化率在胃癌中为70.0%(21/30),其癌旁组织中为16.7%(5/30),有统计学差异(P<0.05)。结论 RUNX3的甲基化可能是癌症特异性的,其启动子区甲基化与胃癌的发生、发展密切相关。

BRCA1和人线粒体转录终止因子3在非小细胞肺癌组织中的表达情况

目的探讨BRCA1和人线粒体转录终止因子3(hMTERF3)在非小细胞肺癌组织中的表达情况。方法选取70例非小细胞肺癌患者,术中收集癌组织标本以及癌旁组织标本。检测并比较癌组织与癌旁组织BRCA1、hMTERF3蛋白表达水平,以及不同病理特征患者的癌组织中BRCA1、hMTERF3蛋白表达水平。结果非小细胞肺癌癌组织中BRCA1、hMTERF3蛋白相对表达水平高于癌旁组织(均P<0.05)。侵及浆膜、肿瘤体积≥5 cm^(3)、病理分期为Ⅲ及Ⅳ期、有淋巴结转移、低分化的非小细胞肺癌患者BRCA1、hMTERF3蛋白相对表达水平分别高于未侵及浆膜、肿瘤体积<5 cm^(3)、病理分期为Ⅰ及Ⅱ期、无淋巴结转移、中或高分化的患者(P<0.05)。结论BRCA1和hMTERF3在非小细胞肺癌组织中呈异常高表达,且与病理参数具有一定相关性,两者或在非小细胞肺癌的发生和发展中发挥重要作用。

鼻咽刷洗物MSH2和RUNX3基因甲基化在鼻咽癌早期诊断及预后判断中的作用

目的探讨鼻咽刷洗物检测MSH2和RUNX3基因甲基化在鼻咽癌早期诊断及预后判断中的作用。方法选择经病理确诊的鼻咽癌患者54例、慢性鼻咽炎患者18例和健康志愿者20例作为研究对象,运用甲基化特异性PCR检测鼻咽刷洗物中MSH2和RUNX3基因启动子区甲基化情况,评估将其用于诊断鼻咽癌的特异度和敏感度,分析基因甲基化与鼻咽癌患者临床病理特征的关系。结果鼻咽癌患者鼻咽刷洗物MSH2和RUNX3基因甲基化频率分别为70.37%(38/54)和51.85%(28/54),在慢性鼻咽炎患者和健康志愿者中均未检测到MSH2和RUNX3基因启动子甲基化(P<0.001)。鼻咽癌患者鼻咽刷洗物中运用甲基化特异性PCR检测MSH2基因甲基化诊断鼻咽癌的特异度为100%、敏感度70.37%;RUNX3基因甲基化诊断鼻咽癌的特异度为100%、敏感度51.85%;平行联合检测MSH2和RUNX3基因甲基化诊断鼻咽癌的特异度为100%、敏感度90.74%。鼻咽刷洗物中MSH2和RUNX3基因甲基化与患者临床病理特征无显著相关性(P>0.05)。结论运用甲基化特异性PCR平行联合检测鼻咽刷洗物MSH2和RUNX3基因甲基化对早期诊断鼻咽癌有高度特异性和敏感度,具有潜在的临床应用价值,但目前尚不能作为判断鼻咽癌临床预后预测指标。

鼻咽刷洗物RUNX3基因甲基化在鼻咽癌早期诊断中价值研究

目的探讨鼻咽刷洗物检测RUNX3基因甲基化在鼻咽癌早期诊断中价值。方法运用甲基化特异性PCR检测54例鼻咽癌患者、18例慢性鼻咽炎患者和20例健康志愿者配对鼻咽部组织及鼻咽刷洗物中RUNX3基因启动子区甲基化情况。结果鼻咽癌患者鼻咽部癌组织RUNX3基因甲基化频率59.26%(32/54),鼻咽刷洗物51.85%(28/54);而在慢性鼻咽炎患者和健康者鼻咽部组织及鼻咽刷洗物中均未检测到RUNX3基因启动子甲基化。鼻咽癌组织与鼻咽刷洗物中RUNX3基因甲基化密切相关(r=0.86),RUNX3基因甲基化与患者临床病理特征无明显相关关系。结论鼻咽刷洗物检测RUNX3基因甲基化具有肿瘤特异性,对早期诊断鼻咽癌有一定的临床价值。

RUNX3基因甲基化与鼻咽癌的临床生物学行为关系

目的探讨RUNX3基因甲基化与鼻咽癌临床生物学行为关系。方法运用甲基化特异性PCR对54例鼻咽癌组织、18例慢性鼻咽炎症组织和20例正常鼻咽上皮组织的RUNX3基因启动子区甲基化状态进行检测。结果 RUNX3基因在鼻咽癌组织中启动子甲基化频率为59%(32/54);而在慢性鼻咽炎症组织和正常鼻咽上皮组织中均未检测到RUNX3基因启动子甲基化。RUNX3基因启动子区甲基化与患者临床生物学行为无明显相关关系。结论 RUNX3基因甲基化具有肿瘤特异性,RUNX3基因甲基化参与鼻咽癌发生发展,但目前尚不能作为判断鼻咽癌临床预后预测指标。

siRNA-ATF3表达载体对人胶质母细胞U373MG的作用研究

目的构建、筛选并鉴定siRNA-ATF3表达载体,探讨转录激活因子3(ATF3)、乳腺丝氨酸蛋白酶抑制因子(Maspin)和基质金属蛋白酶2(MMP2)在转染了siRNA-ATF3表达载体的人胶质母细胞U373MG细胞株中的表达和意义。方法构建siRNA-ATF3表达载体,并转染U373MG细胞株,以荧光定量PCR和Western blot检测筛选出有效的siRNA-ATF3表达载体,以免疫细胞化学法检测转染siRNA-ATF3表达载体的U373MG细胞株中ATF3、Maspin和MMP2的蛋白表达情况。结果U373MG细胞中的ATF3蛋白表达量可被pSilencer siR1-ATF3和pSilencer siR2-ATF3表达载体有效降低。转染siRNA-ATF3表达载体后U373MG细胞生长状态差,增殖速度减慢。ATF3和MMP2在空白组和Control-siRNA组中的阳性表达量高于3个干扰组;与空白组和Control-siRNA组相比,Maspin在ATF3-siRNA组表达最高,在顺铂组和ATF3-siRNA+顺铂组中的表达降低。结论siRNA-ATF3表达载体有效抑制U373MG细胞的生长和增殖,顺铂可协同增强抑制效果,ATF3、Maspin和MMP2可能协同参与了U373MG细胞的生长和增殖,siRNA-ATF3表达载体可作为治疗抑制胶质母细胞瘤生长增殖的有效手段。

UBQLN-1和RUNX3在直肠癌组织中的表达和临床意义

目的探讨UBQLN-1(泛素-1)和人Runt相关转录因子3(RUNX3)在直肠癌组织中的表达和临床意义。方法选取2017年6月—2019年6月河北北方学院附属第一医院行手术切除的85例直肠癌组织和相应癌旁正常组织,应用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)和免疫组化法检测UBQLN-1及RUNX3 mRNA与蛋白水平,分析其与肿瘤临床病理特征间的关系及二者表达的相关性。结果直肠癌组织中UBQLN-1 mRNA表达水平高于癌旁正常组织,RUNX3 mRNA的表达水平低于癌旁正常组织,差异均有高度统计学(P<0.01)。直肠癌组织中UBQLN-1阳性表达率高于癌旁正常组织,RUNX3阳性表达率低于癌旁正常组织,差异有高度统计学意义(P<0.01)。直肠癌组织中UBQLN-1与RUNX3表达呈负相关(r=-0.225,P=0.038)。结论UBQLN-1和RUNX3在直肠癌组织中的异常表达与其发生发展、演进密切相关,且二者呈明显负相关,可作为直肠癌诊断、治疗和预后评估的潜在分子生物学指标。

P-JAK2/P-STAT3与突变型p53蛋白在宫颈病变中的表达及临床意义

目的探讨宫颈病变中磷酸化JAK激酶2(P-JAK2)、磷酸化信号转导与转录因子3(P-STAT3)及突变型p53蛋白的表达及其临床意义。方法选取我科收治的宫颈鳞癌(SCC组)57例、低级别上皮内瘤变(LSIL组)36例、高级别上皮内瘤变(HSIL组)30例和正常宫颈(NC组)30例为研究对象,检测各组高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染情况,行HE染色、免疫组化检测P-JAK2、P-STAT3及突变型p53蛋白表达情况。结果 (1)SCC组的HR-HPV感染率、P-JAK2阳性表达率高于HSIL组、LSIL组及NC组(P<0.05)。(2)SCC组的P-STAT3、突变型p53阳性表达率高于LSIL组、NC组(P<0.05),与HSIL组比较差异无统计学意义。(3)SCC组的P-JAK2和P-STAT3的阳性表达率在不同的FIGO分期、组织分化、淋巴结转移、HR-HPV感染亚组中有明显差异(均P<0.05);突变型p53的阳性表达率在不同的FIGO分期、HR-HPV感染亚组中具有显著差异(P<0.05)。(4)SCC组中P-JAK2与P-STAT3、突变型p53的阳性表达率、HR-HPV感染率均呈正相关(P<0.05),P-STAT3与突变型p53的表达率、HR-HPV感染率呈正相关(P<0.05);突变型p53表达与HR-HPV感染呈正相关(P<0.05)。结论 P-JAK2、P-STAT3与突变型p53蛋白在SCC组中的表达水平高于正常组及上皮内瘤变组,三者可能与HR-HPV感染、宫颈鳞癌发生、进展有关。

Runt相关转录因子3在人结肠癌HCT-116/5-FU耐药细胞株中的表达及其与耐药的相关性

目的建立耐5-氟尿嘧啶(5-FU)的人结肠癌细胞株HCT-116/5-FU,初步探讨Runt相关转录因子3(RUNX3)与结直肠癌耐药的关系。方法采用低浓度梯度递增联合大剂量间断冲击法建立人结肠癌耐药细胞株HCT-116/5-FU,CCK-8法检测5-FU对亲本株HCT-116及耐药株HCT-116/5-FU的半数抑制浓度(IC_(50)值),绘制细胞生长曲线,计算细胞群体倍增时间(TD);qRT-PCR和Western blot法检测亲本株HCT-116细胞及耐药株HCT-116/5-FU细胞中RUNX3、P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和肺耐药蛋白(LRP)的mRNA和蛋白表达。采用siRNA技术敲低HCT-116细胞中RUNX3的表达,分为RUNX3敲低组(si-RUNX3-1组、si-RUNX3-2组)和阴性对照组(si-NC组),qRT-PCR和Western blot法分别在mRNA水平和蛋白水平验证RUNX3的敲低效率;CCK-8法测定si-RUNX3组和si-NC组的IC_(50)值,Western blot法测定两组中P-gp、MRP1和LRP的表达情况。结果成功构建稳定的人结肠癌耐药细胞株HCT-116/5-FU,耐药倍数为7.7倍;HCT-116/5-FU耐药细胞株群体TD较HCT-116亲本株明显延长(P<0.001),耐药细胞群体TD是亲本细胞的1.38倍(P=0.002),耐药株细胞形态发生变化。耐药细胞HCT-116/5-FU的RUNX3 mRNA表达水平较亲本细胞株HCT-116明显降低(P=0.048),P-gp(P=0.008)、MRP1(P=0.001)和LRP mRNA(P=0.001)表达水平较亲本细胞株HCT-116明显升高;耐药细胞HCT-116/5-FU的RUNX3蛋白质相对表达量较亲本细胞株HCT-116明显降低(P<0.001),P-gp、MRP1、LRP蛋白的相对表达量较亲本细胞株明显升高(P均<0.001)。成功构建了RUNX3低表达的HCT-116细胞模型,si-RUNX3-1组RUNX3 mRNA的表达与si-NC组相比差异无统计学意义(P=0.064),si-RUNX3-2组明显低于si-NC组(P=0.034);si-RUNX3-1组和si-RUNX3-2组RUNX3蛋白的表达量均明显低于si-NC组(P均<0.001),si-RUNX3-2组的敲低效率更高。选用si-RUNX3-2组完成后续实验,si-RUNX3组的IC_(50)值较si-NC组明显升高,下调RUNX3的表达能明显降低HCT-116细胞对5-FU的敏感性(P<0.001);si-RUNX3组的P-gp、MRP1和LRP蛋白相对表达量均明显高于si-NC组(P均<0.001)。结论RUNX3表达下调能降低人结肠癌HCT-116细胞对5-FU的敏感性,可能与RUNX3表达的降低上调P-gp、MRP1和LRP等耐药蛋白表达,从而增加细胞的耐药性有关。