人ureb1在大肠杆菌中高效表达及其抗体的制备

目的 :构建人的ureb1(hureb1)原核高效表达重组质粒 ,以此表达的外源蛋白为抗原制备抗ureb1的抗体。方法 :用XhoI/NotI从pGU 2质粒酶切得到hureb1的ORF与pGEX 4T 2的XhoI/NotI大片段连接 ,构建表达GST hureb1融合蛋白的重组载体。转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导表达。以粗制的GST hureb1融合蛋白分别免疫大白兔和小鼠 ,制备抗hureb1的多克隆抗体和单克隆抗体 ,采用WesternBlot进行特异性鉴定。结果 :构建了高效表达GST hureb1融合蛋白的原核表达载体 ,融合蛋白的表达量占菌体蛋白质总量的 33 45 %。以大肠杆菌表达的GST hureb1融合蛋白免疫动物制备了高滴度、高特异性的抗hureb1的抗体。结论 :利用重组GST hureb1融合蛋白免疫动物可获得高滴度的抗hureb1抗体。重组GST

人UREB1基因克隆及其在肿瘤组织中的分布

目的：大鼠 ＵＲＥＢ１基因编码的蛋白质能特异性地结合位于强吗啡基因启动子上游的一段 ＤＮＡ序列（ｕｐｓｔｒｅａｍ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｅｌｅｍｅｎｔ，ＵＲＥ）。早期研究证实 ＵＲＥＢ１对强吗啡基因启动子的转录具有促进作用，而对ｐ５３的转录激活作用具有抑制效应。本实验目的就是克隆人ＵＲＥＢ１基因，探索其与肿瘤发生发展的关系。方法：利用人工合成寡核苷酸探针从人脑ｃＤＮＡ文库中筛选人ＵＲＥＢ１基因，应用大肠杆菌表达的重组蛋白质制备的抗体检测肿瘤组织中ＵＲＥＢ１的表达分布。结果：获得了人ＵＲＥＢ１基因，核苷酸序列在对应区域及氨基酸序列与大鼠ＵＲＥＢ１基因ｃＤＮＡ序列和氨基酸序列皆有９１％的同源性。在各种肿瘤组织中都有ＵＲＥＢ１的表达，但是表达水平及定位不一样。初步发现有这样一个规律，随着肿瘤的恶性程度增加 ＵＲＥＢ在１核内的聚集程度增加。 ＵＲＥＢ１的酪氨酸磷酸化分析结果显示，肿瘤恶性程度高，ＵＲＥＢ１的酪氨酸磷酸化程度高。结论：ＵＲＥＢ１可能参与肿瘤的发生发展，其酪氨酸磷酸化水平可以影响肿瘤的恶性程度。