c-Met siRNA对肝细胞生长因子诱导的人胆管癌QBC939细胞增殖的影响

目的:近年来胆管癌的发病率和病死率呈上升的趋势,5年生存期低于5%,因此亟需利用现代生物技术探索新的治疗方法。探讨针对肝细胞生长因子(HGF)受体c-Met的RNA干扰对人胆管癌(CCA)QBC939细胞增殖的影响。方法:构建针对人c-Met基因的小干扰RNA(siRNA),转染体外培养的人CCA QBC939细胞,应用MTT法检测细胞增殖,Western blot检测c-Met、细胞周期素(Cyclin)D1和A表达以及磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)和胞外信号调节激酶(ERK1/2)信号通路活化。结果:c-Met siRNA显著抑制c-Met蛋白表达,且随着其浓度的增加,c-Met蛋白表达逐渐下降,500 nmol/L c-Met siRNA对c-Met蛋白表达的抑制率达65%。HGF刺激24 h,细胞增殖是对照组的4.54倍,100 nmol/L c-Met siRNA预处理即显著抑制HGF诱导的细胞增殖,其抑制率达26%,且随浓度增加,其抑制作用逐渐增强,500 nmol/L c-Met siRNA对HGF诱导的细胞增殖的抑制率达85%。HGF刺激4h,PI3K和Akt的活性即显著增强,分别是对照组的4.09和4.54倍,c-Met siRNA可呈浓度依赖性的抑制HGF诱导的PI3K/Akt活化,500 nmol/L c-Met siRNA几乎完全抑制HGF诱导的PI3K/Akt活化。HGF显著诱导人CCAQBC939细胞ERK1/2活化,50 ng/ml HGF刺激4 h,磷酸化ERK1/2表达是对照组的3.63倍,c-Met siRNA可呈浓度依赖性的抑制HGF诱导的ERK1/2活化。HGF显著诱导人CCA QBC939细胞细胞周期素D1和A表达,分别是对照组的2.83和3.16倍,c-Met siRNA可呈浓度依赖性的抑制HGF诱导的细胞周期素D1和A表达。结论:针对人c-Met基因的RNA干扰可有效阻断人CCA QBC939细胞c-Met表达,并通过阻断PI3K/Akt和ERK1/2信号通路活化而抑制HGF诱导的细胞增殖。

lncRNA MALAT1调控人肝胆管癌细胞侵袭及凋亡影响胆管癌发生发展临床研究

目的:探究肺腺癌转移相关转录物1(metastasis associated in lung denocarcinoma transcript 1,MALAT1)调控肝内胆管细胞癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)体外细胞侵袭、迁移及凋亡和体内细胞增殖,并参与ICC的发生发展的机制。方法:利用GeneCards和LncExpDB数据库发现MALAT1基本信息;qRT-PCR和原位杂交FISH检测MALAT1在27例ICC患者组织中的表达情况;Tranwell、细胞划痕及Tunel细胞凋亡检测MALAT1对人肝胆管癌细胞系(RBE细胞系)侵袭、迁移及凋亡情况;原位杂交FISH和PCNA免疫组织化学及Ki67免疫荧光实验检测MALAT1在皮下肿瘤组织中荧光探针信号与体内细胞增殖情况。结果:MALAT1定位于11p13.1,转录本长8708bp,在各类肿瘤和疾病中有不同程度的表达差异;MALAT1在27例ICC患者组织中均上调;MALAT1促进RBE侵袭、迁移及抑制凋亡,而敲低MALAT1则促进凋亡;MALAT1在皮下肿瘤组织中的阳性表达显著增加;过表达MALAT1促进体内细胞增殖,敲低MALAT1则抑制体内细胞增殖。结论:MALAT1作为ICC一种潜在标志物,通过调控干扰MALAT1的表达可能为ICC的诊断和治疗提供新的研究方向。