High expression of human clotting factor IX cDNA in the bone marrow stroma cells of hemophilia B patient

Hemophilia B, a serious bleeding disorder, is an inherited X chromosome-linked diseasecaused by the deficiency or inactiveness of human clotting factor IX (FIX). The conven-tional clinical treatment of plasma infusion is expensive and associated with a high risk

永生化人骨髓基质细胞的表面抗原及多向分化研究

目的研究本所转入人端粒酶逆转录酶基因的人骨髓基质细胞(hMSC-TERT细胞)的生物学特性。方法复苏hMSC-TERT细胞第30代,扩增,流式细胞仪检测细胞表面抗原;进行体外脂肪细胞、成骨细胞定向诱导,并分别进行油红O染色、碱性磷酸酶染色及von Kossa染色。结果hMSC-TERT细胞表面抗原检测CD34、CD45、CD44、CD106、CD166均为阴性;脂肪细胞定向诱导后油红O染色见胞浆内有红色脂肪颗粒,成骨细胞定向诱导后见胞浆内有碱性磷酸酶染色阳性黑褐色颗粒,von Kossa染色见有钙结节形成。结论hMSC-TERT细胞依然保留骨髓基质干细胞的自我更新特性及多向分化潜能。

BMSCs与VEGF 165-HUVEC局部皮下组织层共移植大鼠缺血皮瓣存活率观察

目的 观察骨髓基质干细胞(BMSCs)与血管内皮生长因子165基因修饰的脐静脉内皮细胞(VEGF165-HUVEC)局部皮下组织层共移植大鼠缺血皮瓣存活率。方法 50只雌性SD大鼠均制备缺血皮瓣模型,后随机分为5组各10只,A组移植BMSCs与VEGF165-HUVEC(1∶1),B组移植VEGF165-HUVEC,C组移植BMSCs与HUVEC(1∶1),D组移植HUVEC,E组注射等体积0.9%NaCl溶液,比较各组术后第11天皮瓣存活率、皮瓣微血管密度(MVD)及术后第2、4、7、14d血清VEGF蛋白水平。结果 A、B、C、D、E组皮瓣存活率分别为84.3%±4.7%、61.2%±4.5%、50.1%±3.8%、43.8%±2.9%、30.7%±1.9%,两两比较,P均<0.05。A组术后2、4、7、14d血清VEGF蛋白水平分别为(486.3±7.5)、(583.7±13.4)、(682.5±12.6)、(274.2±7.1)pg/mL,B组分别为(352.3±4.8)、(435.2±6.9)、(550.2±9.7)、(215.5±5.8)pg/mL,C组分别为(34.8±2.9)、(35.6±3.2)、(29.1±2.8)、(26.9±1.9)pg/mL,D组分别为(33.1±2.0)、(31.2±3.7)、(27.9±2.8)、(24.7±2.1)pg/mL,E组分别为(33.2±3.6)、(30.7±2.8)、(33.2±2.7)、(25.7±1.8)pg/mL,A组与其余组比较,P均<0.05。A、B、C、D、E组MVD计数分别为62.1±5.2、53.7±4.8、40.5±3.1、25.9±3.0、17.8±1.1,两两比较,P均<0.05。结论 BMSCs与VEGF165-HUVEC共移植可能提高皮瓣存活率、上调血清VEGF蛋白表达、提高局部MVD,进而提升大鼠缺血皮瓣存活能力。

高压氧联合儿茶素通过调控TRAF6/NF-κB信号通路抑制人骨髓基质HS-5细胞的炎症反应

目的探讨高压氧(HBO)联合儿茶素(Can)对脂多糖(LPS)诱导的人骨髓基质HS-5细胞炎症反应的影响及其作用机制。方法将一部分状态良好的正常HS-5细胞分为对照组(DMEM培养基),另一部分HS-5细胞随后通过LPS构建骨髓炎症细胞模型后再分为4组:模型组(培养基中加入1.0μg/ml LPS)、HBO组(培养基中加入1μg/ml LPS+0.2 MPa HBO处理)、Can组(培养基中加入1.0μg/ml LPS+150μmol/L Can)及联合组(培养基中加入1μg/ml LPS+150μmol/L Can+0.2 MPa HBO处理)。采用CCK-8法检测各组HS-5细胞的增殖情况,通过ELISA法测定HS-5炎症细胞液中IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-10的表达水平,流式细胞术检测各组HS-5炎症细胞的凋亡情况,Western blotting实验检测HS-5炎症细胞TLR6/NF-κB信号通路蛋白的表达水平。结果CCK-8法检测结果显示,浓度150μmol/L Can对1.0μg/ml LPS诱导的HS-5细胞增殖产生抑制作用,并以此为参照建立骨髓HS-5炎症细胞模型。流式细胞术检测结果显示,联合组HS-5炎症细胞存活率[(13.99±1.25)%]明显低于模型组[(46.69±4.27)%]、HBO组[(39.28±3.74)%]和Can组[(23.14±2.20)%],差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与模型组、HBO组和Can组比较,联合组HS-5炎症细胞内TLR6和p-NF-κB蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论Can联合HBO对HS-5炎症细胞具有很强的抗炎作用,其作用机制可能是通过调节TLR6/NF-κB信号通路来抑制LPS诱导产生的骨髓炎症反应,这将为骨伤患者的治疗提供新的思路。