人脑髓鞘硷性蛋白的分离纯化

作者从人脑组织先分离出髓鞘,再经热有机溶剂除脂、三乙醇胺硷性液洗涤和稀酸液抽提、最后用Sephadex G-150柱层析纯化制备出人脑髓鞘硷性蛋白。经三种不同类型的聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫电泳证明,该产品为单一组分,并测得其分子量为18.5kd,等电点为10.6,与文献报道相符。本法具有简便快速、产量和纯度均高等优点,为人脑髓鞘硷性蛋白研究提供了可靠的手段。

人脑髓鞘碱性蛋白cDNA重组质粒pRK41转化及全长编码区体外扩增

作者将含人脑髓鞘碱性蛋白(MBP)编码区和3’端非翻译区(1.2kb)的重组质粒pRK41—1.2转化宿主菌E.coli JM109,用非同位素标记鼠MBP cDNA克隆片段作探针,经菌落原位杂交筛选出阳性克隆并以此为模板,采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增出含21.5kd MBP全长编码序列(600bp),又经限制性内切酶BamHⅠ和KpnⅠ消化,电泳结果进一步证实该PCR产物的特异性,为人MBP全长编码序列。

人脑髓鞘碱性蛋白cDNA体外扩增、克隆和鉴定

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）从人脑ｃＤＮＡ文库中扩增出６００ｂｐ的髓鞘碱性蛋白（ＭＢＰ）ｃＤＮＡ片段，与载体ｐＧＥＭ－３Ｚｆ（＋）平端连接．重组质粒ＤＮＡ转化宿主菌ＪＭ１０９，在含Ｘ－ｇａｌ和ＩＰＴＧ的平板上直接筛选阳性克隆．限制性内切酶分析和成套引物扩增鉴定证明，该克隆含有７个外显子的２１．５ｋＤ人脑ＭＢＰ全长编码序列．

电刺激小脑顶核后脑外伤患者脑血流和脑损害变化

目的 探讨小脑顶核电刺激 (FNS)对脑外伤患者脑血流速度 (Vm)和血清髓鞘碱性蛋白 (MBP)的影响。方法 30名健康者为正常对照组 (A)。 6 0例脑外伤患者 ,随机均分为B(外伤对照组 )和C(刺激治疗组 )两组。用FNS对C组实施治疗。应用经颅多普勒超声动态监测A、B和C三组患者ACA、MCA的Vm。分别于外伤后第 1、3、5天检测B、C两组血清MBP。结果 ACA和MCA的Vm正常值分别为 ( 4 5 .4± 6 .1)cm/s和 ( 5 4.3± 5 .7)cm/s ;B组外伤后呈现持续性低Vm ,ACA和MCA的Vm分别为 ( 35 .9± 5 .6 )cm/s和 ( 4 5 .5± 6 .5 )cm/s ;C组FNS后Vm明显升高 ,分别为 ( 4 2 .8± 6 .8)cm/s和 ( 5 1.9± 6 .2 )cm/s。MBP正常值为 ( 1.0 2± 0 .46 ) μg/L。外伤后第 1天 ,B、C两组MBP明显升高 ,B组于第 5天达高峰 ,而C组MBP于第 5天则明显下降。结论 外伤后Vm降低 ,血清MBP升高。FNS可明显提高脑外伤后Vm ,改善脑循环 ,降低MBP 。

健脑益智胶囊对外伤性脑出血患者血清人髓鞘碱性蛋白含量的影响

目的观察健脑益智胶囊对外伤性脑出血患者外周血清人髓鞘碱性蛋白(MBP)含量的影响。方法将54例外伤性脑出血患者随机分为3 d组、7 d组和对照组,在常规治疗的基础之上,3 d组和7 d组分别于受伤后第3天和第7天给予口服或鼻饲健脑益智胶囊。分别于入院后3 d、7 d、10 d、14 d测定患者外周血清MBP的含量并进行比较。结果 3 d组与对照组比较,第7天、第10天外周血清MBP含量明显降低(P均<0.05);7 d组与对照组比较,第10天外周血清MBP含量明显降低(P<0.05)。结论健脑益智胶囊早期使用能降低外周血清MBP含量,说明健脑益智胶囊对外伤性脑出血患者有明显的治疗作用。

人脑发育过程中髓鞘碱性蛋白基因的表达

为探索人脑髓鞘碱性蛋白（ＭＢＰ）基因表达的时空秩序与髓鞘发生和形成之间关系，采用３２Ｐ－和生物素标记鼠ＭＢＰｃＤＮＡ和地高辛标记人ＭＢＰｃＲＮＡ探针，对发育过程中人脑进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ斑点杂交和原位杂交研究。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ斑点分析结果显示：１６周胎龄脑ＭＢＰｍＲＮＡ表达已明显，Ａ５９０值近２．０／μｇＲＮＡ，随发育逐渐增加，至成年其表达增至９倍（Ａ５９０值为１８／μｇＲＮＡ）。８～２５周胎龄脊髓和延脑切片以及２０、２２和２５周胎龄桥脑、中脑、丘脑、小脑和大脑切片原位杂交结果表明：在８～９周胎龄人脑脊髓前角和近延脑第四脑室底区域中，其散在细胞的核周胞浆内有ＭＢＰｍＲＮＡ表达信号，该阳性细胞比少突细胞大，而且胞浆丰富，它们究竟是神经元或胶质前体仍待鉴定。在２０周胎龄期，ＭＢＰｍＲＮＡ表达在脊髓和延脑区骤增，并沿少突细胞突起延伸呈网状；此期桥脑该基因表达已明显。

颅脑外伤术后血清神经生化标志物及其脑脊液中P73、P38蛋白表达的意义

目的探讨颅脑外伤术后血清神经生化标志物及其脑脊液中肿瘤蛋白P73(P73)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38)蛋白表达的意义。方法选取2017年5月至2019年7月郑州大学附属郑州中心医院收治的101例颅脑外伤术后病人作为观察组,选取同期体检中心101例健康体检者作为对照组。比较两组、不同预后病人血清中枢神经特异性蛋白(S100β)、人脑髓鞘碱性蛋白(MBP)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平及脑脊液中P73、P38蛋白表达情况。采用Pearson分析各指标与格拉斯哥预后评分(GOS)的相关性,采用接收者操作特征(ROC)曲线分析血清神经生化标志物、脑脊液中P73、P38蛋白预测不良预后的价值。比较不同认知功能病人血清神经生化标志物水平及脑脊液中P73、P38蛋白表达情况,分析各指标与MMSE评分相关性。结果观察组血清S100β[(0.91±0.36)μg/L]、MBP[(5.76±2.43)mg/L]、NSE[(9.74±5.02)μg/L]较对照组[(0.58±0.24)μg/L、(2.93±0.71)mg/L、(6.03±1.85)μg/L]高(P<0.05);预后良好、重残、不良病人血清S100β[(0.62±0.35)μg/L、(1.02±0.36)μg/L、(1.55±0.39)μg/L]、MBP[(3.81±2.15)mg/L、(6.44±2.64)mg/L、(10.20±2.82)mg/L]、NSE[(7.17±4.54)μg/L、(10.78±5.08)μg/L、(15.24±6.81)μg/L]表达依次递增,脑脊液中P73[(0.33±0.06)、(0.29±0.07)、(0.24±0.05)]、P38蛋白[(0.30±0.03)、(0.25±0.05)、(0.19±0.04)]表达依次递减(P<0.05);术后第3 d血清S100β、NSE与术后1个月GOS评分呈负相关,脑脊液中P73、P38蛋白与GOS评分呈正相关(P<0.05);各指标预测不良预后的AUC由大到小依次为S100β、P38蛋白、P73蛋白、NSE、MBP,最佳截断值分别为1.48μg/L、0.25、0.21、14.18μg/L、7.72 mg/L;认知功能损害为轻度、中度、重度的病人血清S100β、NSE依次升高,脑脊液中P73、P38蛋白依次降低(P<0.05);术后第3 d血清S100β、NSE与术后1个月MMSE评分呈负相关,脑脊液中P73、P38蛋白与MMSE评分呈正相关(P<0.001)。结论检测颅脑外伤病人血清S100β、NSE及脑脊液中P73、P38蛋白表达可在术后早期预测病人预后与认知功能,为临床干预提供重要参考。