人巨细胞病毒cDNA文库的构建、鉴定及pp65阳性克隆筛选

为进一步进行人巨细胞病毒 (HCMV)后基因组功能的研究 ,以及为疫苗分子和早期诊断试剂的研制提供有效工具 ,从HCMVAD1 69株感染 96h的HF细胞中提取HCMV的mRNA ,逆转录合成cDNA片段 ,重组入λgt1 1EcoRI酶切位点之间 ,包装蛋白包装 ,构建HCMVAD1 69株基因组cDNA表达文库。结果表明 ,初始HCMVcDNA文库容量为 3 6× 1 0 6,重组率为 96% ;HCMV鼠多克隆抗血清筛选出 1 68个HCMV阳性克隆 ;地高辛标记pp65特异性寡核苷酸探针原位噬斑杂交筛选出 3 4个pp65阳性克隆 ,再经PCR扩增 ,筛选出 2个pp65阳性克隆 ;pp65PCR扩增产物进一步被Southernblotting证实 ;3 端测序比较 ,同源性为 98%。为进一步克隆。