人牙胚cDNA文库的筛选和Hevin cDNA的克隆

目的 :筛选人牙胚cDNA文库 ,考察Hevin在牙齿发育过程中是否表达。方法 :以Hevin的一段编码序列作为探针筛选人牙胚cDNA文库 ,挑取阳性噬菌斑 ,将其转化为质粒DNA ,再通过限制性酶切和部分核苷酸序列分析的方法鉴定阳性克隆。结果 :从人牙胚cDNA文库中筛选到一个阳性克隆 ,序列分析结果证实为Hevin的cDNA。结论 :克隆到Hevin基因的部分cDNA序列 。

牙本质基质蛋白1在人牙胚发育过程中的表达和意义

目的 :观察牙本质基质蛋白 1(dentalmatrixprotein ,DMP1)在人牙胚发育过程中的表达和分布变化 ,探讨DMP1在人牙齿发育过程中的作用。方法 :制备人牙胚发育各期组织标本 ,采用免疫组织化学方法观察DMP1在人牙胚不同阶段的表达情况。结果 :DMP1主要表达于钟状晚期分泌型成牙本质细胞 ,在前成牙本质细胞、前成釉细胞和牙乳头细胞中表达弱阳性 ,在成釉细胞中有一过性表达 ,即在釉基质开始形成但没有形成硬组织时的分泌型成釉细胞中有表达 ,但在随后的分泌型成釉细胞中表达渐弱至阴性。结论 :观察到DMP1在人牙胚发育不同时期的表达和表达变化 。

碱性成纤维细胞生长因子在人牙胚生长发育中的作用

目的 :研究碱性成纤维细胞生长因子在人牙胚生长发育中的作用。方法 :选择胎龄分别为 7、8、10、14周自愿终止妊娠的新鲜人胚胎各 4例 ,制作牙胚切片 ,将蕾状期、帽状期和钟状期牙胚切片 ,做免疫组化检测。结果 :bFGF在蕾状期上皮细胞强染 ,外胚间充质细胞少量弱染色 ;帽状期 ,bFGF在上皮细胞呈整体弱染色 ,牙乳头细胞染色更弱 ;钟状期 ,bFGF在内釉细胞呈强染色 ,牙乳头近切缘的外层细胞亦呈阳性染色 ,星网状层少量细胞弱染色。结论 :bFGF对人牙胚上皮细胞的增殖和分化起着促进作用 ;在人牙胚的钟状期 ,bFGF在促进内釉上皮细胞向成釉细胞转化以及牙乳头细胞向成牙本质细胞转化中起重要作用 。

人牙胚cDNA文库的构建

目的 :构建具足够库容量的人牙胚cDNA文库。方法 :提取人牙胚mRNA并反转录成cDNA ,经LDPCR扩增后 ,将双链cDNA克隆到λTripleX2中 ,包装噬菌体 ,以XL - 1-Blue为受体菌滴定、扩增文库 ,用两端引物做PCR鉴定。结果 :5 0 0 μl文库的库容量为 0 .8× 10 6pfu ,重组率为 83% ,10个克隆有 9个可扩增出cDNA片段 ,长度为 5 0 0～ 2 0 0 0bp。结论 :构建的文库具较好的库容量、重组率以及较大的插入片段。

地氟病区人牙胚成釉细胞的结构改变

目的:观察地氟病区和非地氟病区人牙胚成釉细胞形态及结构的改变,探讨其在氟牙症形成过程中的作用。方法:观察地氟病区引产胎儿牙胚成釉细胞形态学和超微结构的改变,并与非地氟病区引产胎儿牙胚作对比。同时测定母体尿氟含量。结果:HE染色结果表明实验组胎儿成釉细胞排列极不规则,高度变矮,一些细胞发生扭曲,细胞内出现颗粒和空泡。透射电镜观察显示实验组成釉细胞细胞器减少,粗面内质网明显扩张,线粒体肿胀、变形,胞浆内有空泡产生,一些细胞呈现凋亡迹象。结论:过量氟影响成釉细胞超微结构,继而导致其功能异常,与氟牙症形成有相关性。