目的研究肠道病毒A组71型(Enterovirus group A type 71,EV-A71)在人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中的增殖及对细胞骨架造成的影响,初步探讨其与病毒血症发生的关系。方法采用qRT-PCR技术及免疫...目的研究肠道病毒A组71型(Enterovirus group A type 71,EV-A71)在人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中的增殖及对细胞骨架造成的影响,初步探讨其与病毒血症发生的关系。方法采用qRT-PCR技术及免疫荧光技术检测EV-A71在HUVECs中的复制和增殖,用免疫荧光双染色技术观察三种细胞骨架在EV-A71感染后的变化。结果 EV-A71能够有效感染HUVECs,且感染后24 h在细胞内复制达到高峰。病毒感染后微丝骨架完全解聚,微管骨架排列方式发生改变,而中间纤维结构模糊不清;同时检测到微管及中间纤维与病毒抗原共存。结论 EV-A71可以感染HUVECs并在其内有效复制增殖,同时诱导HUVECs三种细胞骨架发生改变,提示细胞骨架可能参与EV-A71感染HUVECs的过程。展开更多
目的对青海省2016-2017年手足口病（hand，foot and mouth disease，HFMD）人肠道病毒A组71型（human enterovirus group A type71，EV—A71）的基因特征进行分析。方法对青海省2016-2017年采集的HFMD标本，用荧光定量逆转录-聚合酶链...目的对青海省2016-2017年手足口病（hand，foot and mouth disease，HFMD）人肠道病毒A组71型（human enterovirus group A type71，EV—A71）的基因特征进行分析。方法对青海省2016-2017年采集的HFMD标本，用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（reverse transcription．polymerase chain reaction，RT—PCR）方法进行筛查，对EV—A71阳性标本进行病毒分离，对分离到的病毒提取核酸，用RT—PCR方法对VPl编码区进行扩增及核苷酸序列测定和分析，并与EV．A71各基因型和基因亚型的代表株序列构建亲缘关系进化树。结果青海省2016-2017年共分离到114株EV-A71，均为C4基因亚型中的C4a进化分支。在亲缘性关系树中显示，又进一步分属2个不同的小分支。2016-2017年青海省流行的不同传播链上EV—A71与我国其他省流行的EV-A71基因亲缘关系较为接近。结论青海省2016-2017年流行的EV—A71以C4a为绝对优势基因亚型，未监测到其他基因型病毒。青海省EV—A71不是独立进化的，而是与我国其他地区流行的EV—A71共同进化。展开更多
目的研究浙江省宁波市手足口病（Hand,Foot and Mouth Disease;HFMD）优势毒株肠道病毒A组71型（Enterovirus Group A Type 71,EVA71）VP1编码区基因分子进化特征。方法收集宁波市2003~2010年HFMD患者标本,2003~2007年标本经过病毒分离...目的研究浙江省宁波市手足口病（Hand,Foot and Mouth Disease;HFMD）优势毒株肠道病毒A组71型（Enterovirus Group A Type 71,EVA71）VP1编码区基因分子进化特征。方法收集宁波市2003~2010年HFMD患者标本,2003~2007年标本经过病毒分离后利用逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）对EV、EVA71和柯萨奇病毒A组16型（Coxsackie virus Group A Type 16,CVA16）进行检测;2008年标本利用RT-PCR直接进行检测;2009~2010年标本利用实时荧光（Real-time）RT-PCR直接进行检测,选择32例EVA71阳性标本进行VP1编码区基因扩增,扩增产物经过测序后利用序列分析软件（Lasergene）进行分析。结果宁波市2003~2010年共检测HFMD标本1335份,其中EV阳性1159份,总检出率为86.82%;EVA71阳性645份,占确证病例数的55.65%;CVA16阳性205份,占确证病例数的17.69%;未分型标本309份,占确证病例数的26.66%;未发现EVA71和CVA16同时阳性标本。32株代表株VP1编码区核苷酸序列的长度均为891碱基对（base pair,bp）,编码297个氨基酸,核苷酸和氨基酸的同源性分别为95.2%~100%和99.3%~100%,与C4a基因亚型代表株的核苷酸和氨基酸的同源性最高,分别为95.4%~99.2%和98%~100%。氨基酸进化位点分析表明,来源于不同病例类型的毒株在氨基酸的组成上无明显差异。在基因进化树上,32株流行株全部处于C4a基因亚型分支上,但位于不同的进化簇中。结论 EVA71是引起宁波市2008~2010年HFMD的优势毒株,也是导致HFMD重症病例和死亡病例的主要病原。来源于不同病例类型的毒株在氨基酸的组成上无明显差异。32株代表株均属于C4a基因亚型,与同期我国其他地区流行株共同进化。展开更多
目的对青海省2013年手足口病（Hand,Foot and Mouth Disease;HFMD）的病原谱和人肠道病毒A组71型（Human Enterovirus Group A Type 71,HEV_（A71））的基因特征进行分析。方法对青海省2013年送检的HFMD标本,用荧光定量逆转录-聚合酶链...目的对青海省2013年手足口病（Hand,Foot and Mouth Disease;HFMD）的病原谱和人肠道病毒A组71型（Human Enterovirus Group A Type 71,HEV_（A71））的基因特征进行分析。方法对青海省2013年送检的HFMD标本,用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）方法进行筛查,对HEV_（A71）阳性标本进行病毒分离,对分离到的病毒提取核酸,用RT-PCR方法对VP1编码区进行扩增及核苷酸序列测定和整理分析,并与HEV_（A71）各基因型和基因亚型的代表株序列构建亲缘关系进化树。结果对青海省2013年分离的62株HEV_（A71）进行VP1编码区核苷酸序列测定后,分析发现它们在VP1编码区核苷酸水平和氨基酸水平的同源性分别为95.5%-100.0%和99.0%-100.0%。与其他各基因型和基因亚型的HEV_（A71）代表株构建的亲缘进化树中显示,青海省HEV_（A71）分离株与C4亚型代表株聚为一簇,属于C4基因亚型C_（4a）进化分支。与2008年、2012年在青海省分离的HEV_（A71）在核苷酸和氨基酸水平的同源性分别为95.8%-97.5%和99.0%-99.7%。结论2013年,C_（4a）亚型HEV_（A71）在青海省持续传播并占有绝对优势,且存在两条传播链的流行。展开更多
目的了解新生儿和新生儿母亲的肠道病毒71型(Enterovirus Type71,EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus Group AType16,CVAl6)中和抗体(Neutralizing Antibody,NA)水平。方法选取广西壮族自治区和江苏省的3个手足口病(Hand,Footand ...目的了解新生儿和新生儿母亲的肠道病毒71型(Enterovirus Type71,EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus Group AType16,CVAl6)中和抗体(Neutralizing Antibody,NA)水平。方法选取广西壮族自治区和江苏省的3个手足口病(Hand,Footand Mouth Disease;HFMD)高发县和3个低发县作为研究现场,在每个县选取一个HFMD高发乡和一个低发乡,每个乡选择10对新生儿及新生儿母亲,对所有调查对象采集静脉血,并对新生儿母亲进行问卷调查。结果母亲EV71和CVA16的NA阳性率和几何平均滴度(Geometric Mean Titer,GMT)分别为83.5%、33.1%和1∶26.61、1∶6.1l,新生儿EV7l和CVA16的NA阳性率和GMT分别为75.2%、35.5%和1∶22.05、1∶6.97,母婴EV71、CVA16的NA阳性率及GMT差异均无统计学意义(2EV71=2.52,P=0.1124;2CVA16=0.1650,P=0.6846;tEV7l=1.05,P=0.2953;tCVA16=1.30,P=0.1946)。EV71、CVA16的NA阳性率和GMT在HFMD高、低发县差异亦无统计学意义(2EV71=1.45,P=0.2288;2CVA16=1.28,P=0.2583;tEV7l=1.86,P=0.0643;tCVA16=0.2,P=0.8399)。母婴EV71和CVA16的NAGMT均存在相关性(rEV71=0.69,P<0.0001;rCVA16=0.4769,P<0.0001)。结论母亲EV71和CVA16的NA阳性率和GMT高,新生儿EV71和CVA16的NA相应也高,可为新生儿提供有效保护。展开更多
目的研究北京市丰台区手足口病（Hand-Foot-Mouth Disease,HFMD）患者肠道病毒A组71型（Enterovirus Group A Type 71,EVA71）分离株的基因特征。方法使用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（Real-time Reverse Transcript-Polymerase Chain ...目的研究北京市丰台区手足口病（Hand-Foot-Mouth Disease,HFMD）患者肠道病毒A组71型（Enterovirus Group A Type 71,EVA71）分离株的基因特征。方法使用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（Real-time Reverse Transcript-Polymerase Chain Reaction,r RT-PCR）方法对北京市丰台区2013年3-9月采集于HFMD患者的咽拭子标本进行EVA71核酸检测,对检测结果为EVA71阳性的标本,用人横纹肌肉瘤细胞进行病毒分离,对分离到的EVA71毒株进行VP1编码区基因扩增,并对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析。结果在81份咽拭子标本中,有26份经r RT-PCR方法检测为EVA71核酸阳性,分离到6株EVA71,VP1编码区有6个散在位点（43、58、164、184、240、249）存在共变异,氨基酸组合模式为赖氨酸-丙氨酸（Alanine,Ala）-天冬氨酸-丝氨酸-苏氨酸-缬氨酸,在170位氨基酸均为Ala,在145位氨基酸均为谷氨酸。核苷酸序列分析结果表明,6株EVA71的VP1编码区核苷酸同源性为94.3%-100.0%,与C4a亚型代表株的VP1编码区核苷酸同源性最高（90.0%-97.6%）。进化树图分析结果显示,北京市丰台区EVA71分离株与C4亚型代表株处于同一分支,并在C4a进化分支的不同簇中。结论北京市丰台区EVA71分离株为C4亚型C4a进化分支。展开更多
文摘目的研究肠道病毒A组71型(Enterovirus group A type 71,EV-A71)在人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中的增殖及对细胞骨架造成的影响,初步探讨其与病毒血症发生的关系。方法采用qRT-PCR技术及免疫荧光技术检测EV-A71在HUVECs中的复制和增殖,用免疫荧光双染色技术观察三种细胞骨架在EV-A71感染后的变化。结果 EV-A71能够有效感染HUVECs,且感染后24 h在细胞内复制达到高峰。病毒感染后微丝骨架完全解聚,微管骨架排列方式发生改变,而中间纤维结构模糊不清;同时检测到微管及中间纤维与病毒抗原共存。结论 EV-A71可以感染HUVECs并在其内有效复制增殖,同时诱导HUVECs三种细胞骨架发生改变,提示细胞骨架可能参与EV-A71感染HUVECs的过程。
文摘目的对青海省2016-2017年手足口病（hand，foot and mouth disease，HFMD）人肠道病毒A组71型（human enterovirus group A type71，EV—A71）的基因特征进行分析。方法对青海省2016-2017年采集的HFMD标本，用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（reverse transcription．polymerase chain reaction，RT—PCR）方法进行筛查，对EV—A71阳性标本进行病毒分离，对分离到的病毒提取核酸，用RT—PCR方法对VPl编码区进行扩增及核苷酸序列测定和分析，并与EV．A71各基因型和基因亚型的代表株序列构建亲缘关系进化树。结果青海省2016-2017年共分离到114株EV-A71，均为C4基因亚型中的C4a进化分支。在亲缘性关系树中显示，又进一步分属2个不同的小分支。2016-2017年青海省流行的不同传播链上EV—A71与我国其他省流行的EV-A71基因亲缘关系较为接近。结论青海省2016-2017年流行的EV—A71以C4a为绝对优势基因亚型，未监测到其他基因型病毒。青海省EV—A71不是独立进化的，而是与我国其他地区流行的EV—A71共同进化。
文摘目的研究浙江省宁波市手足口病（Hand,Foot and Mouth Disease;HFMD）优势毒株肠道病毒A组71型（Enterovirus Group A Type 71,EVA71）VP1编码区基因分子进化特征。方法收集宁波市2003~2010年HFMD患者标本,2003~2007年标本经过病毒分离后利用逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）对EV、EVA71和柯萨奇病毒A组16型（Coxsackie virus Group A Type 16,CVA16）进行检测;2008年标本利用RT-PCR直接进行检测;2009~2010年标本利用实时荧光（Real-time）RT-PCR直接进行检测,选择32例EVA71阳性标本进行VP1编码区基因扩增,扩增产物经过测序后利用序列分析软件（Lasergene）进行分析。结果宁波市2003~2010年共检测HFMD标本1335份,其中EV阳性1159份,总检出率为86.82%;EVA71阳性645份,占确证病例数的55.65%;CVA16阳性205份,占确证病例数的17.69%;未分型标本309份,占确证病例数的26.66%;未发现EVA71和CVA16同时阳性标本。32株代表株VP1编码区核苷酸序列的长度均为891碱基对（base pair,bp）,编码297个氨基酸,核苷酸和氨基酸的同源性分别为95.2%~100%和99.3%~100%,与C4a基因亚型代表株的核苷酸和氨基酸的同源性最高,分别为95.4%~99.2%和98%~100%。氨基酸进化位点分析表明,来源于不同病例类型的毒株在氨基酸的组成上无明显差异。在基因进化树上,32株流行株全部处于C4a基因亚型分支上,但位于不同的进化簇中。结论 EVA71是引起宁波市2008~2010年HFMD的优势毒株,也是导致HFMD重症病例和死亡病例的主要病原。来源于不同病例类型的毒株在氨基酸的组成上无明显差异。32株代表株均属于C4a基因亚型,与同期我国其他地区流行株共同进化。
文摘目的对青海省2013年手足口病（Hand,Foot and Mouth Disease;HFMD）的病原谱和人肠道病毒A组71型（Human Enterovirus Group A Type 71,HEV_（A71））的基因特征进行分析。方法对青海省2013年送检的HFMD标本,用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）方法进行筛查,对HEV_（A71）阳性标本进行病毒分离,对分离到的病毒提取核酸,用RT-PCR方法对VP1编码区进行扩增及核苷酸序列测定和整理分析,并与HEV_（A71）各基因型和基因亚型的代表株序列构建亲缘关系进化树。结果对青海省2013年分离的62株HEV_（A71）进行VP1编码区核苷酸序列测定后,分析发现它们在VP1编码区核苷酸水平和氨基酸水平的同源性分别为95.5%-100.0%和99.0%-100.0%。与其他各基因型和基因亚型的HEV_（A71）代表株构建的亲缘进化树中显示,青海省HEV_（A71）分离株与C4亚型代表株聚为一簇,属于C4基因亚型C_（4a）进化分支。与2008年、2012年在青海省分离的HEV_（A71）在核苷酸和氨基酸水平的同源性分别为95.8%-97.5%和99.0%-99.7%。结论2013年,C_（4a）亚型HEV_（A71）在青海省持续传播并占有绝对优势,且存在两条传播链的流行。
文摘目的了解新生儿和新生儿母亲的肠道病毒71型(Enterovirus Type71,EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus Group AType16,CVAl6)中和抗体(Neutralizing Antibody,NA)水平。方法选取广西壮族自治区和江苏省的3个手足口病(Hand,Footand Mouth Disease;HFMD)高发县和3个低发县作为研究现场,在每个县选取一个HFMD高发乡和一个低发乡,每个乡选择10对新生儿及新生儿母亲,对所有调查对象采集静脉血,并对新生儿母亲进行问卷调查。结果母亲EV71和CVA16的NA阳性率和几何平均滴度(Geometric Mean Titer,GMT)分别为83.5%、33.1%和1∶26.61、1∶6.1l,新生儿EV7l和CVA16的NA阳性率和GMT分别为75.2%、35.5%和1∶22.05、1∶6.97,母婴EV71、CVA16的NA阳性率及GMT差异均无统计学意义(2EV71=2.52,P=0.1124;2CVA16=0.1650,P=0.6846;tEV7l=1.05,P=0.2953;tCVA16=1.30,P=0.1946)。EV71、CVA16的NA阳性率和GMT在HFMD高、低发县差异亦无统计学意义(2EV71=1.45,P=0.2288;2CVA16=1.28,P=0.2583;tEV7l=1.86,P=0.0643;tCVA16=0.2,P=0.8399)。母婴EV71和CVA16的NAGMT均存在相关性(rEV71=0.69,P<0.0001;rCVA16=0.4769,P<0.0001)。结论母亲EV71和CVA16的NA阳性率和GMT高,新生儿EV71和CVA16的NA相应也高,可为新生儿提供有效保护。
文摘目的研究北京市丰台区手足口病（Hand-Foot-Mouth Disease,HFMD）患者肠道病毒A组71型（Enterovirus Group A Type 71,EVA71）分离株的基因特征。方法使用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（Real-time Reverse Transcript-Polymerase Chain Reaction,r RT-PCR）方法对北京市丰台区2013年3-9月采集于HFMD患者的咽拭子标本进行EVA71核酸检测,对检测结果为EVA71阳性的标本,用人横纹肌肉瘤细胞进行病毒分离,对分离到的EVA71毒株进行VP1编码区基因扩增,并对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析。结果在81份咽拭子标本中,有26份经r RT-PCR方法检测为EVA71核酸阳性,分离到6株EVA71,VP1编码区有6个散在位点（43、58、164、184、240、249）存在共变异,氨基酸组合模式为赖氨酸-丙氨酸（Alanine,Ala）-天冬氨酸-丝氨酸-苏氨酸-缬氨酸,在170位氨基酸均为Ala,在145位氨基酸均为谷氨酸。核苷酸序列分析结果表明,6株EVA71的VP1编码区核苷酸同源性为94.3%-100.0%,与C4a亚型代表株的VP1编码区核苷酸同源性最高（90.0%-97.6%）。进化树图分析结果显示,北京市丰台区EVA71分离株与C4亚型代表株处于同一分支,并在C4a进化分支的不同簇中。结论北京市丰台区EVA71分离株为C4亚型C4a进化分支。
