羟基脲对人红白血病细胞株中珠蛋白基因表达和细胞分化的影响

人红白血病细胞株(HEL细胞)中珠蛋白基因表达具有自己的特点。即只表达胚胎型的γ-珠蛋白基因而不表达成人型的β-珠蛋白基因。羟基脲(Hydroxyurea)是一种抑制DNA合成的小分子有机化合物。它在临床上被用来治疗地中海贫血和镰刀型贫血。我们的实验结果表明:随羟基脲浓度增加HEL细胞的增殖速度减慢。用常规RT-PCR方法和定量PCR分析证明;用羟基脲诱导HEL细胞后,β-珠蛋白基因表达增加,α-珠蛋白基因表达减少,而γ-珠蛋白基因表达变化不明显。对参与珠蛋白表达的转录因子GATA-1和NF-E2的定量PCR分析发现:这两种转录因子的表达均增加3倍以上。因此,羟基脲可能通过某些信号传递途径促进β-珠蛋白基因表达,从而使HEL细胞趋向终末分化。

红细胞终末分化期出现与珠蛋白基因表达增强子HS2序列特异结合的蛋白质因子

利用Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ印迹和电泳迁移率改变分析法，研究了处于终末分化阶段的人胚肝中、晚幼红细胞和经ｈｅｍｉｎ诱导分化前后的Ｋ５６２细胞核抽提物中与地高辛标记的ＨＳ２探针特异结合的蛋白质。发现经ｈｅｍｉｎ诱导后的Ｋ５６２细胞样品中出现一些为诱导前缺如的，分子量为１２，１４，１８，４５和５０ｋＤ的ＨＳ２结合蛋白。这些结合蛋白在印迹图谱中的位置（分子量大小）与存在于正常终末分化期红细胞中ＨＳ２结合蛋白的相近。同样，诱导后Ｋ５６２细胞核蛋白质与ＨＳ２形成复合物的电泳迁移图谱与正常分化的人胚肝红细胞核蛋白质－ＨＳ２复合物的相似，而与未经诱导的Ｋ５６２细胞核蛋白质－ＨＳ２复合物的迁移图谱存在差异。提示诱导分化和正常分化的红细胞表达一些新的ＨＳ２结合蛋白，这些仅在终末分化期红细胞中出现的ＨＳ２结合蛋白，可能是参与红细胞分化和珠蛋白基因表达调控的重要因素。

反转录病毒载体介导含增强子的人β－珠蛋白基因在小鼠胎肝细胞中的表达

将人β－珠蛋白基因（３．１ｋｂ）反向克隆入反转录病毒载体Ｎ２Ａ，并在Ｎ２Ａ的ＬＴＲ插入３６ｂｐ的增强子ＨＳ２（简称Ｎ２Ａ．β．Ｅ３６）。将此反转录病毒重组体转染ψ－２和ＰＡ３１７包装细胞系，经Ｇ４１８筛选后，分离出完整整合的并能产生较高病毒滴度的产病毒细胞系。利用产病毒细胞系，将含增强子人β－珠蛋白基因转入小鼠胎肝细胞，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交表明人β－珠蛋白基因可以完整地整合到靶细胞的基因组上，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交显示人β－珠蛋白基因可在小鼠胎肝细胞中表达。

IL-3和羟基脲协同诱导K562细胞凋亡

本文应用流式细胞分选仪和电子显微镜研究了IL-3和羟基脲对人红白血病细胞株(K562细胞)凋亡的影响。结果显示:IL-3和羟基脲分别诱导K562细胞,不能引起细胞凋亡;而IL-3和羟基脲协同诱导K562细胞,可以引起细胞凋亡。用流式细胞仪检测到IL-3和羟基脲协同诱导K562细胞后,DNA含量低于二倍体的细胞数达31.90%,并产生明显的凋亡小峰。同时,IL-3和羟基脲协同诱导K562细胞, 可抑制细胞周期中的S期,阻止细胞从S期进入G_2/M期,使细胞周期延长,对K562细胞的生长和增殖具有抑制作用。在电镜下可观察到IL-3和羟基脲协同诱导的K562细胞,出现典型的凋亡细胞形态,细胞核内染色质浓缩、凝聚,紧靠在核膜边沿,形成新月形或环状的染色质结构,产生凋亡小体。提示:IL-3和羟基脲具有协同效应,IL-3可提高K562细胞对羟基脲的敏感性,并可协同羟基脲诱导K562细胞凋亡。