Cx43基因在人类及小鼠胎心发育中的时空表达规律

目的 检测Cx4 3在人类和小鼠的胚胎心脏的表达 ,了解该基因在心脏发育过程中的表达规律。方法 选取人类 6～ 18孕周正常胚胎或胎儿心脏 6 3例 ,小鼠孕龄 9 5～ 16 5d胚胎心脏 6 4例 ,采用免疫组化法显示Cx4 3基因在心脏的表达。结果 早期人类胚胎心脏中 ,Cx4 3在心室肌中没有表达 ,心房肌表达微弱 ,原始小梁网中表达很高 ,随着胚胎发育 ,在心房和心室的表达逐渐增强 ,小梁网的表达在胚胎 13～ 14周达到高峰。室间隔的肌部表达量较弱 ,膜部室间隔不表达。房室瓣和大动脉根部管壁Cx4 3没有明显表达。除了在大动脉管壁表达不同 ,小鼠胚胎心脏表达规律与人类基本相同。结论 Cx4 3对于胚胎心脏的发育至关重要。

心肌细胞发育及细胞间闰盘样连接形成的扫描电镜观察

本文报告用扫描电镜观察体外培养的人胎儿心肌细胞发育的形态特征。材料来自妊娠10、13、16周人胎儿心脏。首先进行组织块培养,然后观察由培养团块上新生并脱离团块贴璧生长的心肌细胞。培养早期(脱落贴壁生长1周左右),细胞呈球形、短梭形,表面有各种突起。中期(脱落生长约2~4周)细胞呈扁平不规则形。细胞间由突起相连接。晚期(脱落生长超过1个月)部分细胞可发育成带状、柱状,由闰盘样结构连接成分支状。体外培养的胎儿心肌细胞,在发育过程中,可见闰盘样结构形成的过程,通过这种连接,使一群细胞相互连接,平行排列成束,近似于成熟心肌细胞的形态及排列。本文研究提示,体外培养的人胎儿心肌细胞似有分化、发育成熟的趋向。

B19病毒VP1u蛋白对胎鼠心脏的影响

目的探讨B19病毒vplu蛋白是否影响心脏发育及相关机制。方法对不同孕龄母鼠注射B19病毒vplu蛋白,采集胎鼠心脏组织标本,通过光镜、电镜、免疫组织化学、TUNEL和原位杂交技术观察心脏细胞结构变化、细胞凋亡及相关基因或表面标志物变化。结果实验期间有23只小鼠怀孕,vplu蛋白和(或)抗vplu蛋白mAh干预组与对照组均未见胎鼠流产。各组产仔数量及鼠心脏重量进行组间方差分析,差异无显著性(P>0.05)。vplu蛋白和(或)抗VPIu蛋白mAl干预组光镜下均可见心肌细胞间隙增宽,胞质透明淡染,部分心肌细胞脂肪变性。电镜下vplu蛋白(或)和vplu蛋白mAh共同注射组、抗VPIu蛋白mAb注射组均可见线粒体聚集在增宽的心肌细胞间隙中,有空泡化,并TUNEL免疫荧光和免疫组织化学显示心肌细胞发生细胞凋亡。对照组胎鼠均未见异常。结论B19病毒vplu蛋白与胎鼠流产、心脏发育畸形无关,与胎鼠心脏水肿有关。

NT联合血清AFP、β-hGG检测对胎儿先天性心脏病早期筛查价值

目的:探究超声检测孕妇胎儿颈项透明层(NT)厚度联合血清甲胎蛋白(AFP)、人绒毛膜促性腺激素(β-hGG)检测对胎儿先天性心脏病早期筛查价值。方法:选取2015年6月—2018年6月到本院产前检查孕妇2315例,在妊娠11~14周时超声检测胎儿NT厚度,15~21周采集外周静脉血,采用时间分辨荧光法检测血清AFP、β-hGG水平。对不同检测结果进行诊断价值分析。结果:NT、AFP、β-hGG,NT联合AFP,NT联合β-hGG,AFP联合β-hGG及3者联合对胎儿先天性心脏病检出率分别为5.7%、4.8%、6.4%、1.4%、1.4%、1.3%、1.2%,且年龄>35岁孕妇胎儿先天性心脏病检出率(5.8%)高于20~35岁孕妇(0.4%)(P<0.05)。血清β-hGG单独检测特异度、准确度低于NT、AFP单独检测,误诊率高于NT、AFP单独检测(P<0.05)。NT、AFP、β-hGG联合检测特异度(99.7%)、阳性预测值(74.1%)、准确度(99.6%)均高于两两联合或单独检测,误诊率(13.0%)最低(P<0.05)。结论:超声NT厚度检查联合血清AFP、β-hGG水平检测胎儿先天性心脏病提高了检测的特异度、阳性预测值,降低误诊率,对孕期胎儿不良预后诊断有重要意义。

基质干细胞及明胶微载体植入大鼠心脏的研究

目的 探讨将来源于人类胚胎肝脏的基质干细胞（human fetal liver-delivered mesenchymal stem cells，HFMSCs）及明胶多孔微载体植入正常心肌组织促使心肌及微循环再生的可行性。方法 将SD大鼠分为细胞植入组（n=9）、微载体植入组（n=9）和对照组（n=4），分别在左心室室壁内注射80—100μl含HFMSCs的perfadex溶液、含微载体的perfadex溶液或单纯perfadex溶液。用超声心动图评定移植前后大鼠心脏功能，并分别于术后7、14d取出心肌组织作原位杂交、HE染色、免疫组化染色及混合淋巴细胞培养（MLC）。结果 细胞植入7d后，心脏功能有显著的增加，原位杂交显示，有较多细胞在心肌组织中存活，但免疫组化染色未发现植入细胞向心肌细胞方向的分化；至移植后第14天，移植细胞从心肌组织中消失，在注射局部发现大量巨噬细胞浸润，而体外MLC证实，此时HFMSCs有诱导sD大鼠内淋巴细胞增殖的效应。微载体植入7、14d后，心脏功能无明显增加，微载体仍集中在注射部位，并保持原有形状，其上有较多细胞生长贴附，免疫组化染色显示，这些细胞既不是心肌细胞，也不是毛细血管。结论 HFMSCs植入正常大鼠心脏组织中能短期存活并促进心脏功能增加，但因慢性免疫排斥反应，移植细胞在发生心肌分化之前在体内逐渐消失；明胶多孔微载体植入正常心肌组织后，不能促进心脏功能增加，也不能促使心肌及其微循环生长于其中。

早期宫内活胎伴阴道流血的妊娠结局的探讨

目的探讨先兆流产时胎心率的特点，并结合血清β-人绒毛膜促性腺激素和孕酮评估先兆流产妊娠结局。方法选择140例孕7～10周的先兆流产者，其中继续妊娠组（A组）91例，难免流产组（B组）49例，观察其胎心率特点，就诊当日检测血清β-人绒毛膜促性腺激素和孕酮，1周后复查血清β-人绒毛膜促性腺激素和孕酮，对其检测结果进行分析。结果A组胎心率为153．54±21．18次／分钟，B组胎心率较慢，为100．21±11．30次／分钟，以120次／分为胎心率分界点，特异性为86．8％，敏感性为71．4％。就诊当日两组血清β-人绒毛膜促性腺激素水平比较差异无统计学意义（t=0．519，P〉0．05），两组孕酮水平比较差异亦无统计学意义（t=1．710，P〉0．05）；1周后两组血清β-人绒毛膜促性腺激素和孕酮比较均有统计学意义（t值分别为6．730、10．439，均P〈0．05）。结论妊娠早期血清β-人绒毛膜促性腺激素和孕酮滴度变化结合阴道B超可预测早期有胎心博动先兆流产的结局，对临床诊断及治疗有一定的价值。

初步筛选心血管相关基因——表达序列片段测定法

目的从正常人胎儿心脏ｃＤＮＡ文库中，用ＤＮＡ自动测序的方法筛选心血管相关基因。方法（１）人胚胎心ｃＤＮＡ文库的构建；（２）挑取有目的基因片段插入的噬菌斑，选用正向Ｔ３和反向Ｔ７引物做ＰＣＲ扩增；（３）直接使用其ＰＣＲ产物做ＤＮＡ测序模板，用荧光标记的Ｔ３Ｂ引物做再次ＰＣＲ扩增；（４）用ＤＮＡ测序仪（ｐｈａｒｍａｃｉａ）测定基因表达序列片段（ＥＳＴｓ）；（５）将所获得的ＥＳＴｓ输入Ｇｅｎｅｂａｎｋ数据库做同源序列分析。结果（１）所构建的人胎儿心脏ｃＤＮＡ文库的库容量为１×１０９克隆，平均目的基因片段１．２～１．５ｋｂ，ＰＣＲ产物阳性克隆检出率高达７０％以上，用６％尿素－聚丙烯酰胺凝胶电泳５ｈ，可测ｃＤＮＡ序列片段２１０～５５０ｂｐ，平均３００ｂｐ；（２）在所测３１３２个克隆的ＥＳＴｓ中，新ＥＳＴｓ为４７．４％，已知序列片段为４４．１％。结论利用人胎儿心脏ｃＤＮＡ文库测定ＥＳＴｓ是筛选心血管基因的有效方法；构建高质量的ｃＤＮＡ文库是成功测定ＥＳＴｓ的保证。