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人胚肺成纤维细胞饲养兔角膜上皮和内皮细胞的体外培养 被引量:6
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作者 张胜 陈家祺 +1 位作者 郭琳洁 杨琨 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2001年第5期432-435,共4页
目的 研究人胚肺成纤维饲细胞体外培养兔角膜上皮和内皮细胞。方法 人胚肺成纤维细胞系细胞,经丝裂霉素C处理成饲细胞。兔角膜上皮和内皮细胞组织块原代培养,消化接种于人胚肺饲细胞瓶传代培养。体外培养的角膜上皮和内皮细胞行常规... 目的 研究人胚肺成纤维饲细胞体外培养兔角膜上皮和内皮细胞。方法 人胚肺成纤维细胞系细胞,经丝裂霉素C处理成饲细胞。兔角膜上皮和内皮细胞组织块原代培养,消化接种于人胚肺饲细胞瓶传代培养。体外培养的角膜上皮和内皮细胞行常规病理形态学检查,角膜上皮细胞行角蛋白、内皮细胞行神经烯醇化酶免疫组化染色检测。结果人胚肺成纤维细胞形态均一,易于分辨,经丝裂霉素处理后失去增殖能力。角膜上皮和内皮细胞原代培养5~7天,细胞密集,经人胚肺饲细胞共培养5代,细胞无衰老现象。检测角膜上皮细胞角蛋白、内皮细胞神经烯醇化酶表达阳性,人胚肺饲细胞表达阴性。结论 人胚肺饲细胞能够明显增强角膜上皮和内皮细胞的体外生存能力,提高细胞的增殖能力。 展开更多
关键词 角膜上皮细胞 角膜内皮细胞 人胚肺成纤维细胞 细胞培养
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羟基喜树碱对人胚肺成纤维细胞HFL1生长的影响 被引量:2
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作者 郑洁 姜瑞姣 +3 位作者 李琳 徐淑睿 刘良徛 姚舒婷 《上海中医药杂志》 2011年第11期80-83,共4页
目的观察羟基喜树碱(HCPT)对体外培养的人胚肺成纤维细胞(HFL1)的增殖抑制和促凋亡作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测不同浓度的HCPT对HFL1细胞作用24h、48h、72h的增殖抑制效果,计算细胞生长抑制率和半数抑制量(IC50),确定HCPT... 目的观察羟基喜树碱(HCPT)对体外培养的人胚肺成纤维细胞(HFL1)的增殖抑制和促凋亡作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测不同浓度的HCPT对HFL1细胞作用24h、48h、72h的增殖抑制效果,计算细胞生长抑制率和半数抑制量(IC50),确定HCPT抑制HFL1细胞增殖的最佳给药浓度和最佳作用时间;姬姆萨染色观察细胞形态学变化;流式细胞仪分析细胞周期;琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞的DNA梯度。对所得数据用SPSS 15.0软件进行统计分析。结果 HCPT对HFL1细胞增殖有明显的抑制作用,在0.008-32mg/L范围内呈时间和剂量依赖性;与对照组比较,各实验组24h、48h、72h A值及细胞生长抑制率差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。HCPT作用HFL1细胞48h时的IC50为0.466mg/L,故确定48h、0.5mg/L为最佳作用时间和最佳给药浓度;0.5mg/L HCPT作用HFL1细胞24h后,G0/G1期细胞所占比例为(50.46±3.91)%;作用72h后,G0/G1期细胞所占比例为(88.19±2.13)%,与对照组比较,其余各组各期细胞所占比例差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);姬姆萨染色显示,HFL1细胞形态发生明显变化;琼脂糖凝胶电泳可见明显的DNA梯度带形成。结论 HCPT对体外培养的HFL1细胞具有抑制增殖和诱导凋亡作用,可能是一种潜在的抗肺纤维化的药物。 展开更多
关键词 肺纤维化 羟基喜树碱 人胚肺成纤维细胞 增殖 凋亡
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人胎盘间充质干细胞来源外泌体保护氧化应激损伤肺上皮细胞的机制 被引量:3
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作者 严秀蕊 陶金 梁雪云 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2021年第19期2994-2999,共6页
背景:前期研究已证实人胎盘间充质干细胞来源培养上清能够通过抑制细胞凋亡保护氧化损伤的肺上皮细胞。目的:探究人胎盘间充质干细胞来源外泌体对氧化应激损伤肺上皮细胞BEAS-2B的保护作用。方法:体外培养BEAS-2B细胞,采用含100,200,300... 背景:前期研究已证实人胎盘间充质干细胞来源培养上清能够通过抑制细胞凋亡保护氧化损伤的肺上皮细胞。目的:探究人胎盘间充质干细胞来源外泌体对氧化应激损伤肺上皮细胞BEAS-2B的保护作用。方法:体外培养BEAS-2B细胞,采用含100,200,300,400,500μmol/L过氧化氢的DME/F-12完全培养基培养细胞4 h,以及用含300μmol/L过氧化氢的DME/F-12完全培养基分别培养细胞2,4,6 h,CCK-8法测定细胞存活率,以确定过氧化氢氧化损伤模型条件。Hoechst33258染色观察细胞凋亡情况,q-PCR及Western blot检测bax、bcl-2基因和蛋白的表达以确定模型的有效性。收集第3代人胎盘间充质干细胞培养上清,按照外泌体提取试剂盒说明进行外泌体提取,将外泌体作用于氧化损伤的BEAS-2B细胞,q-PCR及Western blot检测bax、bcl-2、nrf2及keap1的表达。结果与结论:①采用300μmol/L过氧化氢作用于BEAS-2B细胞4 h,细胞存活率为(51.96±2.17)%,可作为氧化损伤模型的最适条件,且Hoechst33258染色、q-PCR及Western blot证明模型有效;②与损伤组比较,外泌体组bax表达降低而bcl-2表达升高,nrf2表达升高而keap1表达降低,差异有显著性意义(P<0.05);③结果提示,人胎盘间充质干细胞来源外泌体能够抑制氧化损伤BEAS-2B细胞凋亡,其作用机制可能与激活Nrf2-Keap1-ARE信号通路相关。 展开更多
关键词 干细胞 人胎盘间充质干细胞 肺上皮细胞 BEAS-2B 外泌体 氧化损伤 细胞凋亡 信号通路
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数种因子对人胎肺细胞分泌t─PA的影响
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作者 王石泉 张鹤云 +2 位作者 汤国枝 李敏意 金以丰 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期122-125,共4页
原代人胎肺细胞培养20d后,更换1%BS培养基,细胞生长停止,t-PA分泌量低;在1%BS培养基中使Ca2+浓度增加到3.5mmol/L,LH浓度增加到1%,细胞表现较高t-PA分泌活性,与1%BS组差异显著。以此配... 原代人胎肺细胞培养20d后,更换1%BS培养基,细胞生长停止,t-PA分泌量低;在1%BS培养基中使Ca2+浓度增加到3.5mmol/L,LH浓度增加到1%,细胞表现较高t-PA分泌活性,与1%BS组差异显著。以此配方为基础培养基,再分别补充以下因子:5μg/ml转铁蛋白,5mg/ml白蛋白,2.5mg/ml葡萄糖,1mg/ml甘露糖,1μg/ml氢化可的松,2U/ml胰岛素,2mmol/L谷氨酰胺,20nmol/L亚硒酸钠。除谷氨酰胺和甘露糖外,其他因子均显著提高肺细胞的t-PA分泌活性(P<0.05) 展开更多
关键词 人胎肺细胞 细胞培养 T-PA 刺激因子
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纤维连接蛋白诱导人胚胎肺纤维细胞增殖的MAPK信号转导通路研究
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作者 马跃文 柏广涛 张美侠 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期335-337,共3页
目的探讨纤维连接蛋白(FN)诱导人胚胎肺纤维细胞(HFL1)增殖的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路。方法采用不同浓度FN刺激HFL1,观察细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂PD98059、p38蛋白激酶抑制剂SB203580对FN诱导HFL1增殖作用的影响。... 目的探讨纤维连接蛋白(FN)诱导人胚胎肺纤维细胞(HFL1)增殖的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路。方法采用不同浓度FN刺激HFL1,观察细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂PD98059、p38蛋白激酶抑制剂SB203580对FN诱导HFL1增殖作用的影响。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖情况。结果FN对HFL1诱导增殖作用呈剂量依赖性升高趋势,在50ng/ml时作用显著;PD98059和SB203580可抑制FN诱导的HFL1细胞增殖。结论FN诱导HFL1的细胞增殖可以通过MAPK信号转导途径实现。 展开更多
关键词 人胚胎肺纤维细胞 纤维连接蛋白 丝裂原活化蛋白激酶
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人胎儿肺间质干细胞染色体制备方法研究
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作者 孙亚东 华进联 窦忠英 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2006年第5期27-30,共4页
研究了人胎儿肺间质干细胞染色体的制备方法,并对其染色体进行分析。结果表明,第5代细胞培养44 h,第15代细胞培养42 h,经终浓度0.025μg/mL秋水仙素作用2 h,0.075 mol/L KCl低渗25 min,正常核型比率最高,分别达到85.1%(171/201)和80... 研究了人胎儿肺间质干细胞染色体的制备方法,并对其染色体进行分析。结果表明,第5代细胞培养44 h,第15代细胞培养42 h,经终浓度0.025μg/mL秋水仙素作用2 h,0.075 mol/L KCl低渗25 min,正常核型比率最高,分别达到85.1%(171/201)和80.0%(172/215)。 展开更多
关键词 人胎儿肺间质干细胞 核型分析 染色体制备
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人胚肺细胞制备甲型肝炎抗原的研究
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作者 尚守礼 丛树梅 +2 位作者 陈虹 张玉梅 徐伟 《山东医科大学学报》 1991年第1期62-65,共4页
为生产甲型肝炎抗原,作者提出了一种新方法。采用人胚肺细胞代替2BS,接种HAV后进行离心培养和旋转培养。结果表明本法生产HAAg优于常规法:1.此种细胞价廉易得,对HAV敏感;2.HAV的增殖周期由2~3周缩短至7~10d;3.HAAg的产量增加近1倍。
关键词 人胚肺细胞 甲型肝炎病毒 甲型肝炎抗原
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羟基喜树碱对人胚肺成纤维细胞增殖与凋亡的影响 被引量:1
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作者 姜瑞姣 郑洁 +2 位作者 刘良徛 李琳 徐淑睿 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第24期4364-4366,共3页
目的:探讨羟基喜树碱(HCPT)对体外培养的人胚肺成纤维细胞(HFL1)增殖与凋亡的影响。方法:常规培养HFL1细胞,以未加HCPT的HFL1为对照组,以不同浓度梯度(0.008~32 mg/L)HCPT处理的HFL1作为实验组,采用MTT法检测HCPT干预24、48、72 h后HFL... 目的:探讨羟基喜树碱(HCPT)对体外培养的人胚肺成纤维细胞(HFL1)增殖与凋亡的影响。方法:常规培养HFL1细胞,以未加HCPT的HFL1为对照组,以不同浓度梯度(0.008~32 mg/L)HCPT处理的HFL1作为实验组,采用MTT法检测HCPT干预24、48、72 h后HFL1的增殖情况;光学显微镜观察干预后细胞的形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;透射电镜下观察细胞凋亡的改变。结果:HCPT对HFL1有明显的抑制作用,在一定程度上呈现剂量-时间依赖性;HCPT处理组HFL1凋亡率较阴性对照组显著升高(F=399.51,P<0.01),并呈药物浓度依赖性。HCPT 0.5 mg/L作用HFL1 48 h,透射电镜下可见细胞缩小,核仁消失,染色质浓聚的凋亡状态。结论:HCPT在体外通过抑制细胞增殖和促进细胞凋亡来抑制HFL1的生长。 展开更多
关键词 细胞凋亡 羟基喜树碱 人胚肺成纤维细胞 细胞增殖
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人胎肺细胞的条件化培养液中两种类型纤溶酶原活化物的分离
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作者 范清春 汤国枝 +4 位作者 王石泉 张鹤云 李敏意 张太平 金以丰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第5期588-593,共6页
用正常人胎肺细胞体外培养,从其培养液中分离纤溶酶原活化物(PA),通过CM-SephadexC-50层析,硫酸铵沉淀和Fibrin-Sepharose,Lysine-Sepharose亲和层析及SephadexG-5... 用正常人胎肺细胞体外培养,从其培养液中分离纤溶酶原活化物(PA),通过CM-SephadexC-50层析,硫酸铵沉淀和Fibrin-Sepharose,Lysine-Sepharose亲和层析及SephadexG-50凝胶过滤等步骤,从10.5l条件培养液中分离纯化得到两种类型的纤溶酶原活化物,t-PA90μg,u-PA800μg.在还原条件下SDS-PAGE均显示单带,分子量t-PA为72kD,u-PA为54kD,纤溶比活分别为156000IU/mg蛋白和106000IU/mg蛋白. 展开更多
关键词 纤溶酶原活化物 人胎肺细胞 细胞培养
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白藜芦醇对人肺细胞株放射损伤的保护作用及其机制研究 被引量:2
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作者 伏晓月 薛建新 +4 位作者 周麟 王永生 黄媚娟 李潞 卢铀 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期319-324,共6页
目的探讨白藜芦醇对X射线照射后人支气管上皮细胞HBE和人胚肺成纤维细胞MRC5损伤的保护作用及可能机制。方法培养HBE和MRC5细胞,分为4个组:对照组(Vehicle)、白藜芦醇组(resveratrol,Res)、X射线照射组(RT+Vehicle)、白藜芦醇和X射线联... 目的探讨白藜芦醇对X射线照射后人支气管上皮细胞HBE和人胚肺成纤维细胞MRC5损伤的保护作用及可能机制。方法培养HBE和MRC5细胞,分为4个组:对照组(Vehicle)、白藜芦醇组(resveratrol,Res)、X射线照射组(RT+Vehicle)、白藜芦醇和X射线联合组(RT+Res)。Res(终浓度5μmol/L)为X射线前2h给药,X射线(20Gy,8.33Gy/min,照射144s)照射后,分别对各组细胞的形态、超微结构、生长活力、DNA损伤、凋亡情况进行观察;同时检测胞内的活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量、总超氧化物歧化酶(SOD)活性、总谷胱甘肽(GSH)含量。结果 X射线能对HBE和MRC5细胞造成明显的损伤。白藜芦醇能有效地减轻X射线对细胞形态和超微结构的破坏,缓解X射线对细胞活力的影响和DNA的损伤,降低X射线照射后细胞的凋亡、降低细胞ROS的水平和MDA的含量,增加细胞总GSH的含量和总SOD的活性。结论白藜芦醇对HBE和MRC5细胞的放射损伤具有保护作用,其机制与减轻氧化应激损伤有关。 展开更多
关键词 人支气管上皮细胞(HBE) 人胚肺成纤维细胞(MRC5) 放射损伤 白藜芦醇 氧化应激损伤
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低功率激光对细胞端粒DNA长度影响的实验研究 被引量:2
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作者 黄玲 吴智辉 莫华 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第3期592-596,共5页
本研究目的是探讨低功率氦氖激光对人胚肺二倍体成纤维(2BS)细胞端粒DNA长度的影响。低功率氦氖激光(波长632.8nm,功率2mW可调)对年轻2BS细胞进行照射处理,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测细胞生长和增殖的变化,采用实时... 本研究目的是探讨低功率氦氖激光对人胚肺二倍体成纤维(2BS)细胞端粒DNA长度的影响。低功率氦氖激光(波长632.8nm,功率2mW可调)对年轻2BS细胞进行照射处理,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测细胞生长和增殖的变化,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(q-PCR)方法检测细胞端粒DNA相对长度。结果表明,激光照射组细胞生长趋势均优于非激光照射组(P<0.05);2BS细胞在年轻时经激光照射后传代至老年时的端粒长度较对照组的老年细胞端粒长度长(P<0.05)。研究结果提示,经适当激光照射后,细胞端粒DNA因衰老而变短的趋势得到减缓。本研究从基因水平为探讨低功率激光延缓细胞衰老的激光生物效应提供实验依据。 展开更多
关键词 氦氖激光 人胚肺二倍体成纤维细胞 端粒长度 实时荧光定量PCR
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