人中性粒细胞载脂蛋白、降钙素原、白介素-6对危重患者发生导管相关性血流感染的早期诊断价值

目的探讨人中性粒细胞载脂蛋白(HNL)、降钙素原(PCT)、白介素-6(IL-6)对长期留置中心静脉导管的危重患者发生导管相关性血流感染(CRBSI)的早期诊断价值。方法选取2022年1月至2023年9月山东第一医科大学第二附属医院重症医学科收治的189例留置中心静脉导管患者为研究对象,按照是否发生CRBSI分为CRBSI组(n=63)和非CRBSI组(n=126)。收集患者临床特征资料及留取血培养当天的HNL、PCT、IL-6结果。采用logistic回归分析建立HNL、PCT和IL-6的联合检测模型。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价各项指标对危重患者发生CRBSI的早期诊断价值。结果CRBSI组HNL、PCT、IL-6水平均高于非CRBSI组,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,HNL、PCT、IL-6及联合检测模型诊断CRBSI的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.950、0.901、0.828、0.964,差异有统计学意义(P<0.05)。HNL、PCT、IL-6诊断CRBSI的最佳临界值分别为248.51 ng/ml、0.62 ng/ml、32.68 pg/ml,灵敏度分别为81.0%、79.4%、84.1%,特异度分别为99.2%、86.4%、69.6%。一致性检测结果显示,联合检测模型结果与预测诊断CRBSI存在较好的一致性(Kappa=0.810,P<0.05),HNL≥248.51 ng/ml与预测诊断CRBSI存在较好的一致性(Kappa=0.804,P<0.05)。结论相比于PCT、IL-6,HNL对危重患者发生导管相关性血流感染有较好的早期诊断价值。

抗人载脂蛋白6单链抗体的筛选、制备及活性鉴定

目的:筛选特异性抗人载脂蛋白6单链抗体(anti-hLCN6 scFv),并进行表达纯化和活性鉴定。方法:采用RT-PCR技术,用抗体可变区简并引物,从hLCN6免疫小鼠的淋巴细胞中扩增全套V_H和V_L基因,装配成scFv基因后将其克隆到噬菌体载体pFAB5C中,构建scFv噬菌体抗体库。对抗体库进行4轮富集,筛选抗hLCN6阳性scFv。经原核表达纯化后,用Western blot和间接ELISA对其活性进行鉴定。结果:筛选到2株亲和力较高的阳性克隆,测序表明其序列一致。获得了高纯度的scFv抗体,其对抗原具有良好的亲和力和特异性。结论:成功筛选到特异性抗hLCN6 scFv,为利用该抗体进行混合斑中的精子分离奠定了基础。

人载脂蛋白6特异性核酸适配体的筛选与鉴定

建立一种简单、高效的从混合斑中鉴定和分离精子的方法是法医学急需解决的难题之一。针对精细胞膜表面特定蛋白质开发的核酸适配体系统,可用于混合斑中精子的分离纯化。人载脂蛋白6(hLCN6)是一种附睾分泌蛋白质,它能结合到精子的头部和尾部,与精子成熟有关。利用指数富集配基的系统进化技术,以hLCN6蛋白为靶标,从96 nt单链DNA随机文库中筛选出与hLCN6高亲和力和特异性结合的适配体。经15轮正向筛选和3轮反向筛选。通过测序分析,采用酶联寡核苷酸吸附实验、斑点印迹和细胞免疫荧光染色等方法检测,获得的核酸适配体H2可特异性识别并结合hLCN6蛋白。hLCN6解离常数(Kd)为(3.21±0.75)nmol/L,且适配体H2在体外表现出与人精子较高的亲和力与特异性。这为依据核酸-蛋白质相互作用分离混合斑中的精细胞奠定了理论基础,提供了新思路。

连续血液净化腹腔感染患者血清HNL与IL-6和PCT水平及其对预后的预测价值

目的探讨连续性血液净化(CBP)腹腔感染(IAI)患者血清中性粒细胞载脂蛋白(HNL)、白细胞介素-6(IL-6)、降钙素原(PCT)水平及其对预后的预测价值。方法选取2020年1月-2022年6月ICU收治的需行CBP治疗的IAI患者87例为研究对象,根据急性生理学及慢性健康状况Ⅱ(APACHEⅡ)评分分为轻中度组(APACHEⅡ≤10评分,50例)和重度组(APACHEⅡ评分>10,37例)。收集汇总纳入研究对象的临床资料,于患者入院时、治疗后3 d检测血清HNL、IL-6、PCT水平,随访28 d预后情况,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清HNL、IL-6、PCT对预后的预测价值。结果患者治疗后3 d时的血清HNL、IL-6、PCT均较入院时下降(P<0.05);轻中度组治疗前后血清HNL、IL-6、PCT低于重度组(P<0.05);87例患者均获随访,预后不良患者16例,预后良好患者71例;预后良好组治疗前后血清HNL、IL-6、PCT均低于预后不良组(P<0.05);治疗后3 d时血清HNL、IL-6、PCT用于IAI患者28 d预后预测的AUC分别达0.730、0.706、0.685。结论IAI患者CBP治疗后血清HNL、IL-6、PCT均下降,监测上述指标水平对于病情及预后评估有积极意义。