圣草酚通过miR-128-3p/MAPK轴对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响

目的圣草酚是一种重要的类黄酮,普遍存在于植物界,但少有对圣草酚的抗癌活性的报道。该研究旨在探究其对人乳腺癌(breast cancer,BC)的抗癌潜力及可能的机制。方法体外培养人乳腺癌细胞MCF-7和人乳腺上皮细胞FR2,通过MTT法检测圣草酚诱导的初始细胞毒性。再次培养MCF-7细胞,MTT法和集落形成实验评估圣草酚对MCF-7细胞增殖的影响;流式细胞术评估圣草酚对MCF-7细胞凋亡和线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)的作用;RT-qPCR和Western Blot法检测miR-128-3p和MAPK相关基因(p38 MAPK和HSP27)在圣草酚发挥抗癌功能中的作用。裸鼠体内异种移植模型中分析圣草酚对肿瘤生长的作用,TUNEL法检测圣草酚对细胞凋亡的影响。结果当圣草酚浓度超过12.5μmol·L^(-1)时,MCF-7细胞活力随着圣草酚浓度的增高而逐渐降低(P<0.05);圣草酚干预后,MCF-7细胞活力、集落形成数量和MMP均下调,细胞凋亡率增高(P<0.05);细胞中miR-128-3p水平增高,p38 MAPK和HSP27磷酸化水平均降低(P<0.05)。转染miR-128-3p抑制物在一定程度上可以逆转圣草酚对MCF-7细胞的影响(P<0.05);在转染miR-128-3p抑制物的基础上添加MAPK通路抑制剂可以削弱这种逆转作用(P<0.05)。此外,裸鼠体内异种移植模型实验证明了圣草酚可呈剂量依赖性降低裸鼠肿瘤组织生长,促进细胞凋亡(P<0.05)。结论圣草酚可有效抑制人乳腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡,这可能与其调控miR-128-3p/MAPK轴有关。

hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA联合检测对乳腺癌的临床诊断价值

目的探讨人乳腺珠蛋白(hMAM)、乳腺上皮小黏蛋白(SBEM)和癌胚抗原相关细胞黏附分子19(CEACAM19)mRNA联合检测对乳腺癌的临床诊断价值。方法选择该院2019年1月至2021年1月收治的73例乳腺癌患者作为乳腺癌组,另选取同期70例乳腺良性病变患者作为良性病变组,同期70例健康志愿者作为健康对照组。检测并比较3组hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表达水平;分析乳腺癌患者临床分期及淋巴结转移情况与hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表达水平的关系;通过受试者工作特征(ROC)曲线分析hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA单独及联合检测对乳腺癌的诊断效能。结果乳腺癌组hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表达水平均高于良性病变组及健康对照组,且良性病变组上述指标表达水平均高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅲ~Ⅳ期乳腺癌患者hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表达水平均高于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异有统计学意义(P<0.05)。有淋巴结转移的乳腺癌患者hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA表达水平均高于无淋巴结转移的患者,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析显示,hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA联合检测诊断乳腺癌的灵敏度为89.52%,特异度为65.12%,曲线下面积为0.874,高于各项指标单独检测(P<0.05)。结论hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA联合检测诊断乳腺癌的效能较佳,且其表达水平与临床分期及淋巴结转移有关。

腺性肥大乳房乳腺上皮细胞的体外培养

目的探讨腺性肥大乳房乳腺上皮细胞(hMEC-GAHB)的原代培养方法,观察该原代细胞的形态学及生物学特点。方法采用0.25%胰蛋白酶和Ⅰ型胶原酶混合液,结合长时间4℃和短时间37℃消化,配合低转速离心的方法,从2010年4月至2011年4月华中科技大学同济医学院附属协和医院整形外科手术治疗的10例腺性乳房肥大症患者(M组,实验组)和10例正常体积乳房患者(N组,对照组)的乳腺组织中消化获取乳腺上皮细胞并进行原代培养,评价获取原代细胞的效果,观察各组细胞的形态学特点,采用多抗体免疫细胞化学法(MICC)鉴定原代细胞种属,并采用碘化丙锭(PI)染色法、四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞术等方法对各组细胞的细胞周期和体外增殖及凋亡等生物学特点等进行分析。结果腺性肥大乳房每克乳腺组织可获取细胞数为5×106个,细胞存活率为70%,接种后48 h细胞贴壁率为60%,贴壁细胞活性良好,接种后约72 h胞质展开,约120 h相互融合。细胞增殖明显,未见明显凋亡。hMEC-GAHB与正常体积乳房乳腺上皮细胞在细胞形态学上差异无统计学意义,且正常表达典型的上皮细胞骨架蛋白[CK8、CK14、CK18、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)等]。在含有相同浓度的17β-雌二醇的体外环境中,处于同一时期细胞对数生长期时,hMEC-GAHB组的群体倍增率(PDR)为0.548、1.634、2.062、3.946、5.210、8.700,正常体积乳房组的群体倍增率(PDR)为0.394、1.455、1.820、3.822、4.467、5.213,两者间差异有统计学意义(P<0.05);hMEC-GAHB组和正常体积乳房组的G2/M期与G0/G1期细胞数比值分别为0.45±0.01和0.34±0.01,两者间差异有统计学意义(P<0.05)。结论采用改良的酶消化法可获得较满意的细胞数和细胞活性。hMEC-GAHB具有典型上皮细胞的形态学及生物学特点,在含有雌激素的体外环境中,hMEC-GAHB比较正常体积乳房乳腺上皮细胞具有更强的增殖活力,并具有正常的细胞衰退期。