苦参碱对体外人髓母细胞瘤D341细胞凋亡、增殖及凋亡相关蛋白的影响

目的:探讨苦参碱在体外对人髓母细胞瘤D341细胞的凋亡、增殖作用及相关蛋白Caspase 3、Caspase 9表达的影响。方法:D341细胞体外成功培养后,按所加苦参碱的浓度进行分组(0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、1.5 mg/ml、2.0 mg/ml,0 mg/ml为对照组),各实验重复3次。光学显微镜、透射电镜观察细胞形态、结构的改变,CCK-8法检测D341细胞增殖的影响,Annexin-V FITC/PI双染法检测细胞凋亡。Western blot检测苦参碱作用D341细胞后Caspase 3、Caspase 9蛋白表达水平的改变。结果:在苦参碱作用下,细胞增殖的抑制率随药物浓度的增加而逐渐升高,抑制率有统计学差别(P<0.01);药物作用时间不同对细胞增殖的抑制程度不同,24 h与72 h组的抑制率有统计学差别(P<0.01)。瘤细胞的凋亡率随着药物浓度的增加而逐渐升高,0.5 mg/ml、1.0 mg/ml与1.5 mg/ml、2.0mg/ml组间的差别均有统计学意义(P<0.05);瘤细胞的凋亡率随着作用时间延长而升高,24 h与72 h、48 h与72 h组间的凋亡率的差别有统计学意义(P<0.05)。随着苦参碱浓度的增加,细胞Caspase 3和Caspase 9的表达均逐渐增强(P<0.01)。结论:苦参碱在体外对D341细胞是通过上调Caspase 3和Caspase 9蛋白来发挥其促凋亡、抑制增殖作用。

4-HPR促髓母细胞瘤细胞凋亡的机制

目的探讨4-羟苯维胺酯对髓母细胞瘤细胞株的促凋亡的效应,及其对抗凋亡相关基因BclxL表达的影响。方法将2.5μM的4-羟苯维胺酯作用于髓母细胞瘤D283MED细胞株,用MTT实验,克隆形成实验检测4-羟苯维胺酯对细胞增殖的抑制作用,TUNEL法检测瘤细胞的凋亡率。采用RT-PCR及Western blot方法检测Bcl-xL的mRNA和蛋白的表达。结果4-羟苯维胺酯可显著抑制D283MED瘤细胞的增殖,明显促进瘤细胞凋亡(P<0.05);RT-PCR及Western blot结果显示Bcl-xL的mRNA和蛋白均明显减少。结论4-羟苯维胺酯通过下调Bcl-xL基因及其蛋白的表达,从而抑制髓母细胞瘤D283细胞的增殖,促进瘤细胞凋亡。

miR383调控PRDX3表达及对人髓母细胞瘤增殖和凋亡影响的研究

目的探讨muR383调控PRDX3表达及对人髓母细胞瘤增殖和凋亡的影响。方法新鲜组织样品来自于某医院2015年12月至2017年12月就诊的人髓母细胞瘤患者35例;另10例非肿瘤脑组织来自于该院病理科,作为对照组。人髓母瘤细胞系Daoy购自中国科学院细胞资源中心。采用Western blot法分别检测PRDX3在人髓母细胞瘤组织、Daoy细胞系、对照组脑组织三者中的表达情况。MTT法检测miR383转染细胞与对照组细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测miR383转染细胞与对照组细胞凋亡情况。结果人髓母细胞瘤组织、Daoy细胞系、对照组脑组织三者中PRDX3的灰度值与β内参照计算比值,差异有统计学意义(P <0.05),表示三组细胞中PRDX3的表达水平有差异。人髓母细胞瘤组织中PRDX3的表达水平高于对照组脑组织,差异有统计学意义(P<0.05);Daoy细胞系中PRDX3的表达水平高于对照组脑组织,差异有统计学意义(P <0.05)。miR383转染组在转染48 h及72h后,PRDX3的表达水平低于Control组,差异有统计学意义(P <0.05);miR383转染组的Daoy细胞系增殖能力低于Control组水平,差异有统计学意义(P <0. 05);在第3天时,差异最为显著。miR383转染组细胞凋亡比例高于Control组,差异有统计学意义(P <0.05)。结论 PRDX3在人髓母细胞瘤组织、Daoy细胞系中存在过表达情况,而miR383可能通过下调PRDX3的表达水平来抑制Daoy细胞系的增殖,并促进其凋亡。

人脐带间充质干细胞来源外泌体抑制髓母细胞瘤Daoy细胞增殖并促其凋亡

背景:间充质干细胞能够产生大量的与其生物学功能相似的外泌体,但间充质干细胞来源外泌体对髓母细胞瘤Daoy细胞的影响仍不清楚。目的:探讨人脐带间充质干细胞来源外泌体对髓母细胞瘤Daoy细胞增殖、凋亡的影响以及可能机制。方法:分离、培养人脐带间充质干细胞,提取第4代人脐带间充质干细胞来源外泌体,Western blot检测外泌体标志蛋白CD9和CD81的表达。将人脐带间充质干细胞来源外泌体与Daoy细胞共培养96 h,采用流式细胞术、克隆形成实验检测Daoy细胞的增殖情况;流式细胞术检测Daoy细胞的凋亡情况;Western blot检测凋亡相关蛋白的表达水平。结果与结论:Western blot检测人脐带间充质干细胞来源外泌体CD9和CD81呈阳性表达。与对照组比较,人脐带间充质干细胞来源外泌体抑制Daoy细胞增殖和克隆形成(P<0.05,P<0.01);促进Daoy细胞凋亡(P<0.01);凋亡相关蛋白Cyclin D1和Bcl-2表达下调(P<0.05),Caspase-3表达上调(P<0.01)。结果表明,人脐带间充质干细胞来源外泌体可能通过调节细胞周期以及凋亡相关蛋白表达来抑制髓母细胞瘤Daoy细胞的增殖,并促进其凋亡。

白藜芦醇对人髓母细胞瘤细胞Daoy增殖的影响及其作用机制

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对人髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)Daoy细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方法体外培养Daoy细胞,用不同浓度的Res(10、20、40、80μmol/L)作用不同时间(24、48和72 h),CCK-8法检测Res对Daoy细胞的增殖抑制率;电镜观察Res对细胞内自噬溶酶体的形成情况;Cathepsin D活性检测试剂盒检测Cathepsin D活性;Western blot法检测Daoy细胞中Beclin 1、LC3、p62和溶酶体相关膜蛋白2(lysosomeassociated membrane proteins 2,LAMP2)的表达及3-甲基腺嘌呤(3-MA)和巴弗洛霉素A1(Bafilomycin A1)对Res作用的影响。结果 Res作用后,Daoy细胞的增殖抑制率随Res浓度的升高及作用时间的延长呈升高趋势;随着Res浓度的升高,Daoy细胞内自噬溶酶体形成数量、Cathepsin D酶活性、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值、Beclin 1、LAMP2蛋白的表达均呈上升趋势,p62蛋白表达下降。3-MA作用后,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值、Beclin 1、LAMP2的蛋白表达水平明显下降(P <0. 05),p62的表达水平明显上调(P <0. 05);Bafilomycin A1处理后,Beclin 1、p62及LAMP2表达明显降低(P <0. 05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值明显增高(P <0. 05)。结论 Res可抑制髓母细胞瘤细胞Daoy的增殖,其机制可能与Res促进自噬形成与成熟过程有关。

miR-21对人髓母细胞瘤DAOY细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-21对人髓母细胞瘤DAOY细胞增殖和凋亡的影响。方法人髓母细胞瘤DAOY细胞分为实验组、对照组和空白组。空白组不进行转染,加入等量DMEM培养基;对照组加入无义序列/脂质体复合物;实验组加入miR-21inhibitor脂质体复合物。3组细胞采用实时荧光定量PCR法检测miR-21和PRDX3mRNA表达水平,采用Westernblot法检测miR-21和PRDX3蛋白相对表达量,采用CCK-8法检测细胞增殖率,采用AnnexinV-FITC法检测细胞凋亡率,应用流式细胞仪检测细胞内活性氧水平。结果转染24、48h后,实验组细胞miR-21、PRDX3mRNA和蛋白表达水平明显低于对照组和空白组(P<0.05),对照组与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05);转染24、48h后,实验组细胞增殖率[(4.20±0.29)%、(8.20±4.39)%]明显低于空白组[(48.19±0.42)%、(80.09±0.55)%]和对照组[(45.22±1.02)%、(78.28±1.04)%](P<0.05),细胞凋亡率[(7.17±0.21)%、(11.40±0.26)%]、细胞平均荧光强度(189.33±45.39、192.40±50.88)明显高于空白组[((3.20±0.26)%、(3.07±0.31)%,168.09±39.42、160.87±41.44)]和对照组[(3.47±0.32)%、(4.20±0.44)%,172.49±44.92、165.20±40.61](P<0.05),空白组细胞增殖率、细胞凋亡率及细胞平均荧光强度与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论抑制miR-21的表达可降低人髓母细胞瘤PRDX3的表达水平,促使细胞内活性氧水平增加,从而抑制细胞增殖与促进细胞凋亡。