单极纺锤体1结合蛋白2基因敲除对人肝癌SMMC-7721细胞迁移的影响

目的运用规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)/Cas9基因编辑技术构建敲除人单极纺锤体1结合蛋白2 (hMOB2)的肝癌SMMC-7721细胞,观察hMOB2基因敲除对其迁移的影响.方法首先将靶向hMOB2基因的导向RNA (sgRNA)的CRISPR序列克隆到慢病毒载体lentiCRISPRv2中,并将制备的慢病毒颗粒感染肝癌SMMC-7721细胞,然后使用嘌呤霉素筛选并挑取单克隆进行培养,用蛋白质印迹法(Western blot)方法检测hMOB2基因敲除效果,利用Transwell、细胞划痕迁移实验检测敲除hMOB2基因对SMMC-7721细胞迁移的影响,运用GraphPad Prism 8.0统计软件分析,计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用t检验.结果成功构建了靶向hMOB2基因的慢病毒介导的CRISPR-Cas9编辑/敲除系统,筛选、建立了hMOB2基因稳定敲除的SMMC-7721细胞株,Transwell迁移实验显示,与对照组比较,敲除组中挑选的单克隆sgR-1细胞的迁移数为(224.3±6.3)个,sgR-2细胞的迁移数为(166.3±6.5)个,明显高于对照组[(114.3±10.5)个,t=16.680、9.714,P<0.01],细胞划痕实验结果显示,与对照组比较,sgR-1相对愈合面积为1.61±0.03(t =24.610,P<0.01),sgR-2为1.26 ±0.04(t=8.081,P<0.01).结论敲除hMOB2基因可促进人肝癌SMMC-7721细胞迁移.