Effect of Shenmai Injection on L-type Calcium Current of Diaphragmatic Muscle in Rats

In this study, whole cell patch clamp recording technique was employed to investigate the effect of Shenmai Injection (SMI) on L-type calcium current ofdiaphragmatic muscle in rats. The result showed that when the diaphragmatic muscle cell was held at —80 mV and depolarized to +60 mV, 10 μl/ml, 50 μl/ml and 100 μl/ml SMI enhanced the inner peak L-type calcium current from -(6.8±0.7) pA/pF (n=7) to -(7.3±0.8) pA/pF (P>0.05, n=7), -(8.6±1.0) pA/pF (P<0.05, n=7) and -(9.4±1.2) pA/pF (P<0.05, n=7), respectively. The rates of L-type calcium current were increased by (7.34±2.37) %, (25.72±5.94)% , and (38.16±7.33)% , respectively. However, it had no significant effect on maximal activation potential and reversal potential. Our results suggested that SMI could activate the calcium channel of the diaphragmatic fibers of the rats, increase the influx of Ca 2+, and enhance the contractility of diaphragmatic muscles.

丹皮酚对豚鼠心肌细胞动作电位及钙通道电流的影响

目的 :研究丹皮酚对分离的单个豚鼠心肌细胞动作电位及钙通道电流 (ICa)的影响。方法 :单个细胞膜片钳技术。结果 :①丹皮酚 40 0 μg/ml可使动作电位时程 (APD)明显缩短。APD50 和APD90 分别由给药前的 (35 2±2 7)ms和 (416± 33)ms缩短至 (16 8± 2 0 )ms和 (2 6 5± 2 3)ms(P <0 .0 5 ,n =5 ) ,分别缩短了 5 2 .2 %和 35 .6 % ,而静息电位和动作电位幅值无明显改变 ;② 5 0～ 40 0 μg/ml丹皮酚浓度依赖性阻滞ICa,使其最大峰值由 (916 .7± 197.3)pA分别降至 (5 83 .3± 10 8.8)pA和 (2 5 0 .0± 12 0 .0 )pA(P <0 .0 1) ,抑制率分别为 36 .4%和 72 .7% ,并使ICa的I V曲线上移 ,但不使I V曲线发生偏移。结论

灯盏花素对豚鼠单一心室肌细胞ICa的抑制作用

目的 :观察灯盏花素对豚鼠单一心室肌细胞钙离子电流 (ICa)的影响。方法 :应用全细胞膜片钳制技术。结果 :灯盏花素能明显抑制心室肌细胞的Ca2 +通道 ,使ICa减小。此作用有明显的电压依赖性 ,在峰电流电压下作用最明显 ,而对其反转电位无明显影响。在指令电位 0mV时 ,0 .5mg %灯盏花素使ICa减小 5.4 % ,1mg %灯盏花素使ICa减小 2 2 .9% (P <0 .0 1 ) ,2mg %灯盏花素使ICa减小 4 5.0 % (P <0 .0 1 )。此作用有明显的剂量依赖性和可复性。结论 :ICa灯盏花素能抑制豚鼠单一心室肌细胞钙离子电流ICa。

参麦注射液对大鼠膈肌细胞L型钙通道的影响

目的 :探讨参麦注射液对大鼠膈肌细胞L型钙通道电流 (ICa L)的影响。方法 :采用急性酶消化分离法 ,获取单个大鼠膈肌细胞 ,用标准的全细胞膜片钳技术 ,记录 7只大鼠膈肌细胞ICa L的峰值及电流 -电压关系曲线 ,并观察不同浓度的参麦注射液对其影响。结果 :当维持电位为 - 80mV ,刺激频率为 0 5Hz,钳制时间为 30 0ms,步进电压为 10mV ,去极到 +6 0mV时 ,10 μl/ml的参麦注射液仅使大鼠膈肌细胞的平均内向峰值ICa L由 (- 6 9± 0 6 )pA/ pF增加到 (- 7 5± 0 7) pA/ pF ,增加的幅度为 (9 2± 2 8) % ,用药前后差异无显著性 (P >0 0 5 )。 5 0 μl/ml、10 0 μl/ml的参麦注射液使大鼠膈肌细胞的平均内向峰值ICa L由 (- 6 9±0 6 ) pA/pF分别增加到 (- 8 4± 0 6 ) pA/ pF和 (- 9 2± 0 6 ) pA/ pF ,其增加的幅度分别为 (2 2 4± 1 7) %和(34 6± 4 6 ) % ,与用药前比较 ,差异均有显著性 (均P <0 0 5 )。给药前后ICa L的最大激活电位和翻转电位均不变。结论 :参麦注射液可激活大鼠膈肌细胞膜的钙通道 ,增加Ca2 + 内流 ,而使膈肌细胞的收缩力增强 ,该作用可能是参麦注射液在临床上用于治疗膈肌疲劳的离子通道机制之一。

白藜芦醇对豚鼠心室肌细胞L型钙通道的影响

目的研究白藜芦醇(resveratrol,RES)对豚鼠心室肌细胞L型钙通道的影响。方法酶解法分离单个豚鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录白藜芦醇对豚鼠单个心室细胞L型钙通道电流(ICa-L)的影响。结果不同浓度的RES明显抑制ICa-L,1、10、100μmol.L-1L的RES使其峰电流密度从(12.96±1.48)pA/pF减少到(11.36±1.59)、(9.96±1.51)和(7.77±0.68)pA/pF(n=6,P<0.01),冲洗后可恢复至(11.85±0.83)pA/pF。RES可使ICa-L的I-U关系曲线上移,其形状和峰值电压保持不变;RES还可使通道的激活曲线右移,但失活曲线和失活恢复时间无改变。结论白藜芦醇通过延长L型钙通道激活过程而明显抑制ICa-L,减少细胞外的钙离子内流,延长有效不应期,从而发挥抗心律失常作用。

中药甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜L型钙通道的影响

目的研究甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜L型钙通道的影响,探讨甘松挥发油在离子通道水平抗心律失常的作用机制。方法用急性酶解法分离大鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳记录技术,观察不同浓度的甘松挥发油对L型钙通道的影响。结果浓度为3,5,10,20,50μg/g甘松挥发油可浓度依赖性地抑制L型钙电流,在浓度为10μg/g时,给药后电流密度抑制约为(45.7±3.5)%(n=5,P<0.01),可使心肌细胞L型钙电流-电压曲线上移,但激活电位、峰电位及反转电位无改变;使激活曲线向正电位方向变化,V1/2从(-5.47±0.50)mV右移至(-2.77±0.49)mV(n=5,P<0.05);使失活曲线向负电位方向变化,V1/2从(-20.82±0.48)mV左移至(-29.44±1.03)mV(n=5,P<0.05)。结论甘松挥发油可通过浓度依赖性地抑制大鼠心肌细胞膜L型钙通道电流,使I-V曲线上移;使激活曲线右移,使失活曲线左移。

银杏苦内酯B对豚鼠心室肌细胞动作电位及L-型钙通道的影响

目的 研究银杏苦内酯B(BN 5 2 0 2 1)对豚鼠心室肌细胞动作电位 (AP)和L 型钙通道的影响。方法 全细胞膜片箝技术。AP记录采用电流箝方式 ,电流记录采用电压箝方式。结果 BN 5 2 0 2 1明显缩短动作电位时程 (APD) ,在10 -6mol·L-1浓度 ,APD90 缩短 9% (P <0 0 5 )。在 10 -5mol·L-1浓度 ,APD90 缩短 12 % (P <0 0 1)。 10 -6mol·L-1以上浓度BN 5 2 0 2 1还明显缩短APD50 ,最大缩短达 14% (P <0 0 5 )。较高浓度 (10 -5mol·L-1)的BN 5 2 0 2 1可使静息电位增加 (P <0 0 5 )。BN 5 2 0 2 1浓度依赖性减少L 型钙电流(L ICa)。 10 -6mol·L-1浓度下 ,峰值L ICa降低 2 4 7% (P<0 0 1) ,10 -5mol·L-1浓度下 ,峰值L ICa降低 36 9% (P <0 0 1)。随着药物浓度的增加 ,I U关系曲线逐渐上移 ,但其峰值电压保持不变。结论 BN 5 2 0 2 1明显缩短APD ,抑制L ICa,且具有明显的浓度依赖关系。

猪冠状动脉平滑肌细胞的自发瞬时外向电流的特性(英文)

自发瞬时外向电流(spontaneous transient outward currents,STOCs)在小动脉的肌源性调节中起着非常重要的作用。本文应用穿孔膜片钳技术记录了猪冠状动脉平滑肌细胞上的STOCs,研究了其基本特性以及调节。结果显示:STOCs有明显的电压依赖性和钙依赖性,其频率和幅度具有变异性。STOCs可以随机叠加在阶跃刺激方案和斜坡刺激方案引出的全细胞钾电流上。STOCs可被大电导钙激活钾(large-conductance Ca2+-activated potassium,BKCa)通道的特异性阻断剂ChTX、螯合胞外钙离子和50μmol／L ryanodine完全抑制。钙离子载体A23187可以明显增加STOCs的幅度和频率;而L型钙通道阻断剂verapamil和CdCl2对STOCs的影响很小。咖啡因使STOCs瞬时爆发性增加,然后抑制。钠离子载体可明显增加STOCs的频率;钠钙交换体选择性抑制剂KB-R7943可明显抑制STOCs。由此可以认为STOCs是BKCa通道介导的。STOCs的产生和激活依赖于经钠钙交换的钙内流和经肌浆网ryanodine受体介导的钙释放,钠钙交换可能决定钙库重载,而细胞膜下肌浆网的胞内钙释放(钙火花)所致的局部钙浓度瞬时增加激活与其相邻的BKCa通道,产生STOCs。

川芎嗪对神经母细胞株SH-SY5Y细胞L型钙通道电流的影响

目的 研究川芎嗪对神经母细胞株 SH-SY5 Y细胞 L型钙通道的影响。方法 在 SH-SY5 Y细胞体外培养的基础上 ,采用全细胞膜片钳技术观察川芎嗪对 SH-SY5 Y细胞 L型钙电流 (ICa,L)的作用。结果 (1 )川芎嗪能够明显抑制峰值 ICa,L,且该作用具有浓度依赖性。(2 )川芎嗪使 ICa,L的 I-V曲线上移 ,但对其形状无明显影响 ,并且最大激活电位亦基本保持不变。结论 川芎嗪对 SH-SY5 Y细胞 L型钙通道具有明显的抑制作用。

白花前胡甲素对豚鼠单一心室肌细胞钙电流的频率依赖性阻断作用

本文利用全细胞膜片钳制技术，观察了白花前胡有效成分Ｐｒａ－Ａ对豚鼠单一心室肌细胞钙电流的影响．结果表明：１，１０，１００μｍｏｌ·Ｌ－１Ｐｒａ－Ａ可使钙电流峰值变小，随浓度增加，作用加强；１０μｍｏｌ·Ｌ－１Ｐｒａ－Ａ对钙电流的抑制具使用依赖性和频率依赖性．结果提示Ｐｒａ－Ａ对钙电流的阻断作用可能是白花前胡抗心律失常作用的机理之一；Ｐｒａ－Ａ可能对快速型心律失常有防治作用．

活性氧对神经母细胞株SH-SY5Y细胞L型钙通道电流的影响

目的 探讨氧自由基导致神经元钙超载的发生机制。方法 在神经母细胞株 SH- SY5 Y细胞体外培养的基础上 ,采用全细胞膜片钳技术 ,观察 H2 O2 对 SH- SY5 Y细胞 L 型钙电流 (ICa,L)的影响。结果 (1) H2 O2 能够明显增加峰值 ICa,L,且该作用具有浓度依赖性。 (2 ) H2 O2 使 ICa,L的 I- V相关曲线下移 ,但对其形状和最大激活电位无明显影响。结论 H2 O2 对 L 型钙通道有明显的增强作用 ,此可能是其导致神经元钙超载的机制之一。

碘化N-正丁基氟哌啶醇对大鼠心室肌细胞L型钙通道的阻断作用

目的研究碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)对大鼠心室肌细胞L-型钙通道(ICa)的影响。方法采用酶急性分离的单个大鼠心室肌细胞,应用膜片钳全细胞记录技术,观察F2对ICa的影响。结果F20.1,1,10×10-6mol.L-1可剂量依赖地抑制ICa,抑制率分别为40%,72%,84%,IC50为1.19×10-6mol.L-1。F2上移ICa的I-V曲线,但不改变ICa的最大锋电位和翻转电位;F2对ICa稳态激活曲线无明显改变;F2可使得ICa稳态失活曲线左移;延长ICa失活恢复时间。结论F2对心肌细胞ICa具有阻断作用。

槲皮素对原发性高血压患者肠系膜动脉平滑肌细胞钙激活钾通道活性的影响

背景槲皮素是是一种自然界广泛分布的具有多种生物活性的黄酮类化合物。大量研究已证实槲皮素能够通过多种方式实现降血压效应。但是对于槲皮素通过离子通道降血压的机制目前还不十分清楚。目的观察槲皮素对高血压患者肠系膜动脉平滑肌细胞钙激活钾通道(K_(Ca))活性的影响,以探讨槲皮素通过离子通道降血压的机制。方法选取需择期行腹部手术者,共26例,分为两组,血压正常组14例,原发性高血压(EH)组12例。取肠系膜动脉小分支,用急性酶消化法获得单个肠系膜动脉平滑肌细胞。然后应用单通道细胞膜片钳技术观察不同浓度槲皮素对肠系膜动脉平滑肌细胞钙激活钾通道开放概率(P_o)、电流幅度值(A_m)、平均开放时间(T_o)、平均关闭时间(T_c)等各指标的影响。结果在 inside-out patch 方式下,随着浴液中槲皮素浓度依赖性地增高正常血压者和高血压患者肠系膜动脉平滑肌细胞 K_(Ca)通道 P_o,通道 A_m及通道 T_o 变化不大,而通道 T_c 均明显缩短。各槲皮素浓度下的两组 K_(Ca)通道 P_o 增长率(⊿P_o%)差异无统计学意义。结论槲皮素能直接激活人类血管平滑肌细胞 K_(Ca)通道。高血压患者和正常血压者血管平滑肌细胞 K_(Ca)对槲皮素的反应性无明显区别。槲皮素激活钙激活钾通道可能是其降血压的一种机制。

牛磺酸镁配合物对豚鼠心室肌细胞钠离子和钙离子通道的影响

目的研究牛磺酸镁配合物(TMC)对正常豚鼠心室肌细胞钠电流(INa)和L-钙电流(ICa,L)的影响,旨在探讨其抗心律失常作用的可能机制。方法酶解法分离豚鼠单个心室肌细胞,全细胞膜片钳技术记录单个心室肌细胞的INa和ICa,L。结果TMC50μmol·L-1不影响INa,而100～200μmol·L-1浓度依赖性地抑制INa;TMC50～200μmol·L-1浓度依赖性地增加ICa,L,使ICa,L的稳态失活曲线右移,对ICa,L的稳态激活曲线无影响。结论TMC对心室肌细胞INa的阻滞可能是其抗心律失常作用的机制之一;对ICa,L的促进可能有利于其发挥正性肌力作用。

β-淀粉肽(1-40)对海马神经元高电压激活钙电流的作用及银杏内酯B对该作用的影响(英文)

应用全细胞膜片钳技术探讨β-淀粉肽(1-40)(β-amyloid peptide1-40,Aβ1-40)对新鲜分离的大鼠海马CA1区锥体神经元高电压依赖性钙通道电流(high voltage-activated calcium channel current,INVA)的作用并观察银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对该作用的影响。利用细胞外灌流或者电极内液给药的方法,比较加药前后电流幅度的变化以判断药物是否发挥作用。细胞外给予老化处理的Aβ1-40可以浓度依赖性地增强IHVA的幅度,Aβ1-40的浓度为0．01-30 μmol/L时可分别使IHVA幅度增加(5．43±3．01)％(n=8, P>0．05)、(10．49±4．13)％(n=11,P>0．05)、(40．69±8．01)％(n=16,P<0．01)、(58．32±4．85)％(n=12,P<0．01)和(75．45±5．81)％ (n=6,P<0．01);新鲜配制的Aβ1-40对IHVA几乎没有影响(n=5,P>0．05)。L-型钙通道阻断剂nifedipine可以抵消Aβ1-40对IHVA的增强作用。Aβ1-40(1．0 μmol/L)对IHVA的增强作垌可以被cAMP的类似物8-Br-cAMP和腺苷酸环化酶(adenylyl cyclase,AC)的激动剂forskolin增强[分别为(66．19±5．74)％,P<0．05和(73．21±6．90)％,P<0．05],被蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)的抑制剂H- 89减弱[(20．08±2．18)％,P<0．05]。GB可有效地减弱Aβ1-40对IHVA的增强作用。以上结果表明Aβ1-40可通过AC-cAMP-PKA 增强IHVA引起胞内钙超载,这可能是其产生神经毒性作用的机制之一。GB可通过抑制Aβ1-40引起的异常钙离子内流对神经元起一定保护作用。

Effects of berberine on L-and T-type calcium channels in guinea pig ventricular myocytes

目的：研究小檗碱（Ｂｅｒ）对心室肌细胞钙通道的影响．方法：全细胞膜片箝技术．结果：Ｂｅｒ（１０，３０μｍｏｌ·Ｌ－１）使豚鼠心室肌细胞Ｌ型钙流由１４００±２４７ｐＡ分别减至９７８±２０４ｐＡ及６１７±２３ｐＡ（ｎ＝５，Ｐ＜００５），抑制效应呈浓度依赖及非频率依赖，其电流－电压曲线的峰值下降．Ｂｅｒ（１０μｍｏｌ·Ｌ－１）使Ｌ型钙流失活曲线的最大半激活电压由－２７８ｍＶ变为－３４２ｍＶ，斜率因子由９２２变为１３０３，对激活曲线无影响．Ｂｅｒ（１０，３０μｍｏｌ·Ｌ－１）使Ｔ型钙流峰值由加药前的１５４±８０ｐＡ降至１０１±７８ｐＡ及４８±４５ｐＡ（ｎ＝８，Ｐ＜００５）．结论：Ｂｅｒ对Ｌ和Ｔ型钙通道均有抑制作用．

17β-雌二醇对豚鼠心室肌细胞L型钙电流的抑制作用

目的观察17β-雌二醇对豚鼠心室肌细胞L型钙电流的影响及其与雌激素受体(estrogen receptor,ER)的关系。方法酶机械法分离豚鼠单个心室肌细胞;膜片钳全细胞模式观察17β-雌二醇对单个心室肌细胞L型钙电流(ICa-L)的影响,并通过加入雌激素受体阻断剂tamoxifen(TAM)研究该作用与雌激素受体的关系。结果 17β-雌二醇(10-9～10-7mol.L-1)使ICa-L峰电流密度值从(-3.5±0.6)pA.pF-1分别减少至(-2.4±0.3)pA.pF-1、(-1.9±0.3)pA.pF-1和(-1.1±0.3)pA.pF-1(与对照组比较,均为P<0.01,n=5)。TAM(10-7 mol.L-1)预处理后,17β-雌二醇(10-7mol.L-1)使ICa-L峰电流密度值从(-3.5±0.6)pA.pF-1减少到(-1.0±0.2)pA.pF-1(与对照组比较,P<0.01,n=5),与未应用TAM(10-7 mol.L-1)预处理时比较,ICa-L峰电流密度值无变化(P>0.05,n=5)。结论 17β-雌二醇抑制豚鼠心室肌细胞ICa-L的作用呈浓度依赖性,雌激素受体阻断剂TAM不能阻断17β-雌二醇对豚鼠心室肌细胞ICa-L的抑制作用,提示17β-雌二醇对ICa-L的抑制作用可能与ER作用无关。

粉防己碱对缺氧所致大鼠皮层神经元钙通道功能变化的影响

用细胞贴附式膜片钳单通道记录技术 ,研究了粉防己碱 ( Tet)对缺氧状态下大鼠大脑皮层神经元L-和 N-型钙通道变化的影响 .结果发现 ,Tet7.5,1 5和 30 μmol·L-1浓度依赖性缩短由缺氧诱导的L-和 N-型钙通道开放时间增加 ,降低开放概率 .Tet对皮层神经元 L-和 N-型钙通道的这一作用可能是其脑缺氧保护作用的机理之一 .

小鼠精母细胞钙通道特性及硝苯地平的作用

目的 为了建立一个合理、客观评价药物或毒物对生殖系统影响的细胞模型 ,研究了机械分离、未经酶消化的小鼠精母细胞Ca2 + 通道特性及硝苯地平对其的作用。方法 采用全细胞膜片钳技术。结果阻断K+ 电流后 ,当钳制电位 -90mV、指令电压 -80～ +1 0mV、步阶电压 1 0mV时 ,记录到Ca2 +电流 ,二价无机阳离子对Ca2 + 电流的抑制作用Ni2 +>Cd2 + ,而L型Ca2 + 通道激动剂BayK8644对电流无任何影响。分析小鼠精母细胞上记录的Ca2 + 电流为T型Ca2 + 通道开放产生。L型Ca2 + 通道阻断剂硝苯地平对精母细胞Ca2 + 电流有明显的抑制作用 ,半数最大抑制浓度为 0 .3 9μmol·L-1,而且细胞外液冲洗恢复缓慢 ,这支持了二氢吡啶类药物可用于男性避孕。结论 机械分离。

乌苏里藜芦生物碱对豚鼠心肌细胞动作电位及钙电流的影响

的 研究乌苏里藜芦生物碱对豚鼠心肌细胞动作电位及钙通道电流的作用。方法 用全细胞记录技术记录单个心室肌细胞动作电位以及钙通道电流。结果 乌苏里藜芦生物碱可延长动作电位时程 ,其在 0 3～ 30 μmol·L- 1 的浓度范围内 ,可使复极 90 %动作电位时程 (APD90 )和复极 50 %动作电位时程 (APD50 )分别延长 1 3%～ 1 1 2 %和 2 3 %～ 1 31 %。 3～ 30 μmol·L- 1 的高浓度可诱发异常节律。乌苏里藜芦生物碱对心肌细胞钙电流有促进作用 ,此作用呈短暂的浓度依赖性增强。结论 乌苏里藜芦生物碱可通过增加钙通道电流延长心室肌细胞动作电位时程。