莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞株JAK2/STAT3信号通路影响的研究

目的观察莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞株体外生长的影响及对SKOV3细胞株JAK2/STAT3信号通路基因表达的影响,探讨莪术醇治疗卵巢癌的分子机制。方法不同浓度莪术醇作用于人卵巢癌细胞株SKOV3,MTT法检测SKOV3细胞的增殖抑制率,实时荧光定量-PCR法检测SKOV3细胞中JAK2、STAT3基因表达水平。结果莪术醇对卵巢癌SKOV3细胞有明显的增殖抑制作用,其强度随药物作用时间及浓度的增加而增强,呈时间-剂量依赖性。实时荧光定量-PCR法检测证实莪术醇作用后SKOV3细胞中JAK2、STAT3基因表达受到明显抑制。结论莪术醇能明显抑制SKOV3细胞的体外增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是通过降调节JAK2、STAT3基因的表达来实现的。

c-erbB2反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞放射敏感性的影响

目的 :探讨癌基因c -erbB2的反义寡苷酸对人卵巢癌细胞放射敏感性的影响。方法 :设立c -erbB2正义寡核苷酸组和非处理组作对照 ,用RT -PCR检测卵巢癌细胞处理前后c -erbB2表达水平的变化。用MTT法及平板克隆形成试验检测人卵巢癌细胞株SKOV3在脂质体c-erbB2反义寡核苷酸作用前后受60 Coγ射线不同剂量照射后的细胞存活分数和集落形成率。结果 :c -erbB2反义寡核苷酸能抑制c-erbB2癌基因的表达 ,经脂质体介导的c-erbB2反义寡核苷酸作用的卵巢癌细胞经γ射线照射后其存活分数和集落形成率较转染正义寡核苷酸组及单纯照射组明显下降 (P <0 .0 1) ,而转染c -erbB2正义寡核苷酸组的存活分数和集落形成率与单纯照射组相比无明显差异 (P >0 .0 5 )。结论 :c -erbB2反义寡核苷酸通过抑制c -erbB2的表达降低人卵巢癌细胞株SKOV3放射抗拒性。该作用可能与c-erbB2反义寡核苷酸抑制了引起细胞辐射抗拒的细胞信号转导途径有关。

姜黄素对人卵巢癌细胞株skov_3生长的影响

目的探讨姜黄素对人卵巢癌细胞株skov3体外生长的的影响。方法采用MTT法测定姜黄素不同浓度及不同时间对人卵巢癌细胞株skov3生长的抑制作用,计算细胞生长抑制率;光镜和电镜下观测细胞形态学及超微结构的改变;流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果姜黄素具有诱导人卵巢癌细胞株skov3细胞凋亡的作用,呈剂量和时间依赖性。部分细胞出现凋亡形态学改变。结论姜黄素通过抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡等机制,能显著地抑制卵巢癌细胞sk-ov3的体外生长。

全反式维甲酸联合猪胆酸钠对人卵巢癌细胞生长抑制作用的影响

目的 探讨维甲酸 (ATRA)及猪胆酸钠 (SBANa)联合应用对人卵巢癌细胞生长的抑制作用。方法 实验共分为三组 :单用ATRA组、单用SBANa组及ATRA +SBANa联合用药组。应用MTT比色法、流式细胞仪对COC1、COC2 、CAOV3 三种卵巢癌细胞系在不同浓度的ATRA及SBANa下进行检测。结果 ATRA及SBANa联合应用后 ,能增强抑制卵巢癌细胞生长作用 ,当达到ATRA10 μmol/L +SBANa 10 0 μg/ml浓度时 ,G0 、G1期细胞比例增加 ,G2 M、S期细胞比例下降 ,细胞增殖速度较单独用药组减缓。MTT检测提示在联合用药浓度达到ATRA 10 μmol/L +SBANa 10 0 μg/ml时 ,癌细胞抑制率最佳。结论 ATRA及SBANa联合应用可增强对卵巢癌细胞增殖的抑制作用 ,并在ATRA 30 μmol/L +SBANa 10 0 μg/ml浓度时 ,促进癌细胞凋亡。

三氧化二砷诱导人卵巢癌细胞凋亡及对线粒体的影响

目的研究三氧化二砷(As2O3)诱导人卵巢癌细胞凋亡中是否发生线粒体系统和Bcl-2蛋白表达的改变,探讨As2O3诱导凋亡的可能引发机制。方法采用光镜、电镜和流式细胞术等技术,观察细胞凋亡、线粒体超微结构改变及检测线粒体跨膜电位(Δψm)。结果As2O3可诱导卵巢癌细胞凋亡,具有剂量依赖性和细胞株类型差异性;不同浓度As2O3均可诱导SKOV3、3AO细胞Δψm的降低,且随浓度升高,下降愈明显;电镜观察到As2O3作用SKOV3、3AO72h后,线粒体明显肿胀,内嵴消失,基质电子密度降低。免疫荧光染色显示As2O3能抑制SKOV3、3AO细胞的Bcl-2蛋白表达。结论线粒体Δψm的下降和Bcl-2蛋白表达的抑制,是As2O3诱导细胞凋亡的重要环节。

三氧化二砷诱导人卵巢癌细胞凋亡对端粒酶活性的影响

目的探讨As2O3诱导细胞凋亡时对其端粒酶活性的影响及其作用机制。方法采用光镜、电镜,PCR-ELISA,RT-PCR等技术,检测细胞凋亡,端粒酶活性及其催化亚单位的表达。结果As2O3可诱导卵巢癌细胞凋亡,但存在作用浓度,细胞株类型差异性;端粒酶活性随药物作用时间和浓度的增加而明显减弱,同时伴随hTERT mRNA表达水平的下降。结论端粒酶活性和hTERT mRNA表达在As2O3诱导SKOV3、3AO细胞凋亡过程中共同发挥作用,两者有密切关系,是诱导细胞凋亡的分子机制之一。

接合物蛋白Crk与CrkL在卵巢癌细胞株MCAS细胞增殖中的不同作用

目的探讨接合物蛋白Crk和CrkL在卵巢癌细胞株MCAS细胞增殖中的不同作用。方法采用免疫共沉淀法检测上皮性卵巢癌细胞株MACS中Crk和CrkL蛋白与已知的与肿瘤增殖相关的上下游结合蛋白的内源性结合;用可调节性siRNA敲低MACS细胞中内源性的Crk及CrkL,观察二者对细胞生长及存活能力的影响。结果免疫共沉淀显示卵巢癌细胞株MACS中,Crk与影响细胞生长增殖的上游蛋白p130Cas及下游蛋白Sos的结合明显强于CrkL,尽管Crk与CrkL表现出部分相同的免疫原性。免疫印迹显示在加入Dox后即Crk或CrkL表达沉默被启动。Crki/CrkLi细胞中加入Dox后Crk与CrkL表达明显降低[Dox+:Crk(0.021±0.001),CrkL(0.676±0.005);Dox-:Crk(0.544±0.003),CrkL(1.282±0.007),P<0.05]。对可调节性siRNA构建之可控性Crki/CrkLi细胞的连续动态观察发现,Crki细胞表现出细胞增殖力受限仍保存生存活力,而CrkLi细胞则表现出逐渐脱壁至死亡。结论 Crk及CrkL在卵巢癌细胞MCAS的恶性增殖中扮演着不同的作用,Crk蛋白的过度表达可能直接影响着卵巢癌细胞恶性增殖,而CrkL则可能更多地参与了细胞基本生存相关的生物行为。

糖皮质激素对人卵巢癌细胞系HO-8910细胞周期的影响

目的:观察糖皮质激素对人卵巢癌细胞HO-8910细胞周期的影响,并初步探讨其作用机制。方法:将1×10-7mol/L地塞米松(dexamethasone,Dex)和1×10-6mol/L糖皮质激素受体阻断剂RU486分别单用或合用处理HO-8910细胞,采用流式细胞术测定细胞周期,核素掺入半定量RT-PCR检测细胞周期蛋白激酶抑制剂p21/WAF1的表达水平。结果:Dex诱导HO-8910细胞发生G0/G1期停滞,并使p21/WAF1 mRNA表达上调;RU486可逆转Dex引起的p21/WAF1表达的变化。结论:p21/WAF1的表达上调可能参与糖皮质激素引起的HO-8910细胞G0/G1期停滞作用。

42℃温热联合顺铂对人卵巢癌细胞SKOV3毒性的影响

目的探讨42℃温热联合化疗药物顺铂对人卵巢癌细胞株SKOV-3作用的规律及其机制。方法应用四氮唑蓝快速比色法测定42℃热疗组、单纯化疗组以及以不同序贯方式结合的热化疗组对人卵巢癌细胞SKOV-3的生长抑制率;流式细胞仪测定各组细胞周期的变化;金氏公式分析相互作用指数,评价温热化疗两因素联合的作用。结果 42℃单纯热疗和单纯化疗均对卵巢癌癌细胞有抑制和杀伤作用;42℃热疗与化疗药物以不同方式联合,抑制作用均强于单纯化疗组和单纯热疗组(P<0.05),尤以热化疗同时作用组效果最佳(P<0.001);细胞周期分析发现:42℃热疗降低了S期细胞所占比例;与单纯化疗组相比,先化疗后热疗组、先热疗后化疗组和热化疗同时组的S期细胞所占比例减少,G1期细胞增多,其中热化疗同时组增减的幅度最大。结论 42℃温热可以明显增强化疗药顺铂的毒性,结合方式上以热化疗同时进行最佳,其作用机制可能与干扰细胞周期有关。

地塞米松快速抑制卵巢癌细胞系ERK1/2活性

背景与目的:细胞外信号调节的激酶1/2(extracellularsignal-regulatedkinase1/2,ERK1/2)的激活在多种细胞增殖的过程中发挥重要作用。作者曾经发现人工合成的糖皮质激素地塞米松(dexamethasone,Dex)可显著抑制人卵巢癌细胞系HO-8910的增殖。本研究试图观察Dex对HO-8910细胞ERK1/2活性的影响,以探讨其抑制该细胞增殖的信号转导通路。方法:以Westernblot方法测定ERK1/2在HO-8910细胞中的活性,细胞计数方法检测细胞增殖的改变。结果:1×10-7mol/LDex作用于HO-8910细胞5min即出现ERK1和ERK2活性的同步降低,最大作用出现在30min,与对照相比,二者分别减少41%和54%(P均<0.001),4h恢复至对照水平。ERK1/2活性降低的程度随Dex浓度(1×10-10～1×10-6mol/L)升高而增大。该作用不能被糖皮质激素受体(glucocorticoidreceptor,GR)拮抗剂RU486所阻断。ERK1/2上游激酶MEK1/2的抑制剂PD98059也具有抑制该细胞增殖作用,并能增强Dex对细胞增殖的抑制。结论:Dex能够以不依赖GR的方式快速抑制HO-8910细胞ERK1/2活性,这可能与其抑制细胞增殖过程有关。

二氢黄腐酚通过调控HK2表达对人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP的耐药性影响

目的 目前二氢黄腐酚通过调控HK2表达对人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP的耐药性影响及其机制研究较少。文中旨在研究黄腐酚衍生物二氢黄腐酚(DXN)对人卵巢癌顺铂耐药(DDP)细胞株SKOV3/DDP耐药影响和机制。方法 SKOV3/DDP细胞分成对照组、DXN组(4μmol/L DXN)、DDP组(4 mg/L DDP)、DXN+DDP组(4μmol/L DXN+4 mg/L DDP)、DXN+DDP+Vector组(转染空载质粒+4μmol/L DXN+4 mg/L DDP)、DXN+DDP+HK2组(转染HK2过表达载体+4μmol/L DXN+4 mg/L DDP)、si-NC组(转染siRNA control)、si-HK2组(转染HK siRNA)。MTT方法检测其增殖,计算IC50及其逆转倍数,Western blot检测HK2蛋白表达,测定葡萄糖摄取、乳酸产量。结果 DDP单独处理的IC50为16.17mg/L,联合DXN处理的IC50为9.72 mg/L,逆转倍数为1.66。与对照组和DDP组比较,DXN+DDP组的DDPSKOV3/DDP细胞HK2蛋白表达量、葡萄糖相对摄取量、乳酸相对生成量明显降低(P<0.05)。si-NC组、si-HK2组细胞与DDP处理后,IC50分别为17.92、11.17 mg/L,逆转倍数为1.60。与si-NC组比较,si-HK2组SKOV3/DDP细胞HK2蛋白表达量、葡萄糖相对摄取量、乳酸相对生成量明显降低(P<0.05)。与对照组和DXN+DDP+Vector组比较,DXN+DDP+HK2组SKOV3/DDP细胞中HK2蛋白表达量、葡萄糖相对摄取量、乳酸相对生成量明显升高(P<0.05)。计算DXN(0μmol/L)、DXN(4μmol/L)+Vector、DXN(4μmol/L)+HK2细胞与DDP处理后IC50分别为16.59、9.66、13.10 mg/L,DXN对SKOV3/DDP细胞DDP耐药的逆转倍数为1.72,过表达HK2和DXN联合处理对SKOV3/DDP细胞DDP耐药的逆转倍数为1.27。结论 DXN通过抑制HK2进而抑制有氧糖酵解逆转SKOV3/DDP耐药,为研究DXN在卵巢癌耐药中的作用机制奠定了基础。

地塞米松促进卵巢癌细胞系p21/WAF1和TβR-II的表达

探讨人工合成糖皮质激素地塞米松 (Dex)抑制人卵巢癌细胞系HO 8910增殖的分子机理。采用RT PCR测定细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p2 1 WAF1,转化生长因子 β1 (TGF β1 )及其I型受体 (TβR I)和II型受体 (TβR II)的mRNA表达水平 ,免疫细胞化学方法分析TβR II的蛋白表达水平。发现Dex能够诱导HO 8910细胞p2 1 WAF1mR NA的表达 ,10 - 7mol LDex处理细胞 8h组比对照组p2 1 WAF1mRNA表达增加 2 84倍 (P <0 0 1)。并且证明Dex亦可上调TβR IImRNA的表达水平 ,10 - 7mol LDex处理 8h使TβR IImRNA的表达量比对照升高 1 2倍 (P <0 0 1) ;Dex也引起TβR II蛋白表达的增加。这些效应均可被糖皮质激素受体 (GR)拮抗剂RU4 86逆转。而TGF β1 和TβR ImRNA的表达不受Dex的影响。以上结果提示 ,Dex通过GR介导而促进p2 1 WAF1和TβR II的表达 ,可能参与其抑制人卵巢癌细胞HO

顺铂、5-FU联合应用及联用方式对人卵巢癌细胞株生长的抑制作用

采用细胞培养及 MTT方法检测全量、半量顺铂 (DDP)和 5 - FU及各种联用方式如预处置及同时联合应用对人卵巢癌 3AO细胞株的生长抑制作用。结果 :1DDP和 5 - FU对 3AO细胞生长均有显著的抑制作用 (P均 <0 .0 1) ,且 DDP的杀伤作用呈明显的剂量依赖性 ,半量 DDP的抑制作用较全量者明显减弱 (P<0 .0 1) ,而 5 -FU的剂量依赖性作用不明显。 2 DDP和 5 - FU以各种给药顺序、各种浓度方式联合应用对 3AO细胞均有显著的杀伤作用 (P<0 .0 1) ,尤以预处置组作用最为突出。给予 5 - FU全量预处置 2 4h后再给予 DDP(全量 5 - FU预处置组 ) ,对 3AO细胞的抑制率可达 84.8% ,比单用全量 5 - FU或 DDP效果显著提高 (P<0 .0 5 )。5 - FU半量预处置亦显示相同的作用趋势。5 - FU或 DDP半量预处置均可达到单一药物全量所能达到的细胞抑制率。3全量或半量DDP和 5 - FU同时联合应用亦可达到满意的细胞抑制水平。认为 5 - FU和 DDP联合应用及各种联用方式对人卵巢癌 3AO细胞均有显著的杀伤作用 ,尤以 5 - FU预处置的方式作用效果最为明显。采用预处置的方法联合应用DDP和 5 - FU是提高卵巢癌化疗效果、降低单药剂量及毒副作用的新途径。

多聚乙烯基亚胺介导的卵巢特异性启动子调控下的自杀基因抑制卵巢癌细胞生长的体外研究

背景与目的目前基因治疗领域的关键技术问题是如何提高基因载体的转导效率和靶向性。近年来以一种新的多聚阳离子化合物—多聚乙烯基亚胺(polyethylenimine,PEI)作为载体为基因转移提供了一条有效的新思路。本研究应用PEI介导卵巢特异性启动子OSP-1调控下的自杀基因HSV-tk体外处理人卵巢癌细胞SKOV3,观察其抗瘤效应和靶向性。方法(1)将pGL3-Luc质粒分别介导多聚乙烯基亚胺PEI、脂质体DOTAP和裸DNA转染人卵巢癌细胞SKOV3,检测荧光素酶表达RLU(relativeluciferaseunit);(2)利用PEI将卵巢特异性启动子调控下的真核表达质粒pOSP1-HSVtk导入人卵巢癌细胞SKOV3、人肝癌细胞SMMC7721,应用MTT法测定更昔洛韦(ganciclovir,GCV)对两种肿瘤细胞的毒性;高效液相色谱法(highperformanceliquidchromatography,HPLC)检测GCV在SKOV3的细胞内代谢;流式细胞仪和末端脱氧核苷酸转移酶原位标记(TdT-mediateddUTPnickendlabeling,TUNEL)检测肿瘤细胞的凋亡。结果(1)PEI组的荧光素酶表达活性最高(187.35±6.48),与另两组相比(45.74±5.98,0.03±0.00),有显著性差异(P<0.01);(2)GCV对SKOV3细胞呈现明显的细胞毒性,对SMMC7721细胞没有产生细胞毒性;HPLC检测显示随着作用时间的延长,细胞内GCV水平逐渐下降;流式细胞仪显示转染pOSP1-HSVtk质粒的SKOV3细胞经GCV作用24、48、72h后,凋亡率分别为(8.42±0.76)%、(18.50±1.78)%、(34.80±3.46)%,呈明显的增高趋势;TUNEL检测SKOV3细胞可见大量凋亡细胞。结论多聚乙烯基亚胺介导卵巢特异性启动子调控下的自杀基因对卵巢癌有特异的体外杀伤作用,有助于提高基因治疗的有效性和靶向性。

地塞米松抑制卵巢癌HO-8910细胞增殖机制的研究

目的 探讨地塞米松 (dexamethasone ,Dex)抑制人卵巢癌HO -8910细胞增殖的可能机制。方法 采用细胞计数法检测细胞增殖、流式细胞术测定细胞周期 ,同位素掺入半定量RT -PCR检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p2 1/WAF1的表达水平。结果 Dex诱导HO -8910细胞发生G0 /G1期停滞 ,使p2 1/WAF1mRNA表达上调 ;糖皮质激素受体拮抗剂RU486可逆转细胞增殖和p2 1/WAF1表达的变化。结论 Dex对HO -8910细胞增殖的抑制可能与诱导p2 1/WAF1表达有关。

地塞米松对人卵巢癌HO-8910细胞ERK和p38活性的快速作用

目的 :观察人工合成糖皮质激素地塞米松 (Dex)对人卵巢癌细胞系HO - 891 0中丝裂原激活的蛋白激酶 (MAPK)家族成员ERK1 /2和p38活性的影响。方法 :Westernblot测定ERK和p38活性。结果 :1 0 - 7mol/LDex在 5min内即可引起ERK1和ERK2活性下降 ,30min作用最明显 ,分别比对照降低 41 %和 54 % (均P <0 .0 1 ) ;之后回升 ,4h后活性达对照水平 ;该作用具有激素浓度 (1 0 - 1 0 - 1 0 - 6 mol/L)依赖性。Dex还可在 5min内增加p38活性 ,1 5min作用最显著 ,比对照增加 84% (P <0 .0 1 ) ,1h后达对照水平。这些作用不能被糖皮质激素受体 (GR)拮抗剂RU486所阻断。结论 :Dex能够以GR非依赖性方式 ,快速抑制HO - 891 0细胞ERK1 /2活性和促进p38活性 。

人卵巢癌细胞株3AO诱导凋亡的研究进展与评价

目的:细胞凋亡是各种抗癌药物诱导癌细胞正常死亡的主要方式,本文旨在对人卵巢癌细胞株3AO诱导凋亡进行评价。方法:采用国内外文献综述方法。结果及结论:通过对人卵巢癌细胞株3AO诱导及促进凋亡的因素及抑制凋亡的因素进行阐述,更多地了解诱导、促进及抑制3AO凋亡的作用机制,更好地指导抗癌药物的临床应用。

吉西他滨联合放射对人高转移卵巢癌细胞的体外实验研究

目的 探讨吉西他滨（GEM）联合放射对人高转移卵巢癌细胞系HO-8910PM的作用机理。方法 ①用不同浓度的GEM作用于体外培养的HO-8910PM细胞,观察其对细胞的增殖抑制;②GEM加不同放射条件照射细胞后,观察其对细胞的集落形成率、DNA及细胞凋亡的影响;③GEM联合放射对人卵巢癌细胞的时间依赖性实验,用细胞增殖抑制及核分裂指数的方法 ,对实验后24、48、72、96h的人卵巢癌细胞进行观察。结果 ①GEM对人卵巢癌细胞有一定的生长抑制作用,并随GEM的浓度增高而活细胞数下降,对照组与各药物组比较有显著性差异（P〈0.05）;高浓度组与低浓度组之间差异有显著性意义（P〈0.05）。②GEM加不同放射条件照射细胞后,随放射剂量的增高而细胞增殖明显抑制,呈正相关;细胞集落形成率,随放射剂量的增高而集落形成率下降;从流式细胞仪检测细胞周期结果 显示：经GEM加不同放射条件照射后的细胞,可见G0~G1期细胞明显阻滞,进入S期的细胞明显减少;细胞凋亡结果 分析表明,凋亡现象随放射剂量的增加,细胞凋亡率升高,尤以4Gy和6Gy时细胞凋亡现象更为明显。③用GEM联合放射对人卵巢癌细胞作用24、48、72、96h后,从细胞计数及核分裂指数结果 可见：细胞增殖抑制呈明显的时间依赖性,各组细胞随实验时间的增加,细胞增殖抑制明显,对照组与各实验组比较,在各时间点差异均有显著性意义（P〈0.05）,单纯药物组与联合组在实验96h后,有显著性差异（P〈0.05）。结论 GEM能抑制人卵巢癌细胞生长,当GEM联合放射可诱导HO-8910PM细胞阻滞和细胞凋亡,且有时间依赖性和一定的放射增敏作用。

重组人AMH对卵巢癌细胞侵袭和迁移的影响

目的:探讨重组人AMH对人卵巢癌细胞株SKOV3迁移和侵袭的影响。方法:将浓度为200nmol/L重组人AMH加入培养的卵巢癌细胞SKOV3中,培养48h,作为观察组。不经过任何处理的卵巢癌细胞SKOV3作为对照组。观察组和对照组都平行设置3个复孔。采用细胞创伤愈合实验检测两组细胞迁移能力的变化,采用Transwell小室体外侵袭实验检测两组细胞侵袭能力的变化。结果:观察组细胞的迁移速度是(2.99±0.04)μm/h,观察组细胞穿过膜的细胞数为(15.00±1.00)个,阴性对照组细胞的迁移速度为(9.02±0.06)μm/h,阴性对照组穿过膜的细胞数为(39.70±1.50)个,观察组细胞迁移速度明显慢于对照组(P<0.05)。观察组细胞穿过膜的细胞数目明显少于阴性对照组,两组相对侵袭指数差异有显著性(P<0.05)。结论:重组人AMH可抑制人卵巢癌细胞株SKOV3的迁移和侵袭能力,为卵巢癌治疗提供一种新的思路。

人磷脂磷酸水解酶3基因真核表达载体的构建及其对卵巢癌细胞生长的抑制作用

目的:构建人磷脂磷酸水解酶3(hLPP3)基因的真核表达载体pLenExpress-hLPP3并转染卵巢癌细胞系SKOV3细胞,初步观察重组表达载体对卵巢癌细胞的转染效率、目的基因表达情况及对卵巢癌细胞生长的影响。方法:采用RT-PCR法从正常胎盘组织中提取hLPP3基因,先克隆入克隆载体pGEM-T easy质粒得到pGEM-T-hLPP3,再用BamHⅠ和XhoⅠ进行双酶切,切下的hLPP3基因亚克隆入真核表达载体pLenExpress,得到pLenEx-press-hLPP3重组质粒,采用脂质体转染法转染卵巢癌细胞系SKOV3细胞。实验分为3组:A组为实验组(转染表达hLPP3基因重组质粒)、B组为空质粒对照(转染空表达质粒)、C组为无转染对照。荧光显微镜观察细胞转染效率,实时荧光定量PCR法检测hLPP3 mRNA的表达,化学法测定转染前后细胞上清液中溶血磷脂酸(LPA)含量的变化,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况。结果:重组表达质粒经限制性酶切鉴定得到与hLPP3基因长度一致(936bp)的酶切产物,测序分析证实,目的基因序列与GenBank上登录的hLPP3基因(BC009196)序列完全一致。荧光显微镜下见A、B2组SKOV3细胞内有大量绿色荧光信号,转染率分别为67%和69%,C组细胞中无荧光信号。实时荧光定量PCR测定显示A组细胞中hLPP3 mRNA的相对表达量较B、C组明显增加(A、B、C组分别为0.5109±0.0584、0.1499±0.0255、0.1433±0.0181,P<0.05)。A组卵巢癌细胞上清液中的LPA含量较B、C组明显下降[A、B、C组分别为(2.37±0.76)μmol/L、(6.71±2.03)μmol/L、(6.84±1.49)μmol/L,P<0.05];流式细胞仪检测显示A组卵巢癌细胞凋亡率明显增加[A、B、C组分别为(30.50±2.12)%、(1.26±0.43)%、(0.10±0.03)%,P<0.05],细胞周期无明显变化。结论:成功构建了表达目的基因hLPP3的重组真核表达载体pLenEx-press-hLPP3,并能高效转染卵巢癌细胞系SKOV3细胞,使细胞中hLPP3基因表达水平明显升高。增强hLPP3基因表达可以降低细胞外LPA水平,诱导细胞凋亡,抑制卵巢癌细胞的生长。