人早幼粒白血病细胞HL-60胞内pH的^(31)P核磁共振研究

建立了无损伤性测定HL 60细胞胞内pH的31 P NMR方法。细胞内无机磷 (Pi)的化学位移对pH非常敏感 ,随pH变化而变化 ,通过测定其化学位移进而能间接确定细胞内的pH。HL 60细胞的31 P核磁共振谱由Pi、ATP等的共振峰组成。根据Pi 峰的化学位移对HL 60细胞内pH进行了测定。HL 60细胞内Pi 峰的化学位移为 5 .78± 0 .0 1 ,计算得到细胞内pH值为 6.1 6±0 .0 1。31 P核磁共振能在测定细胞胞内pH的同时 ,观测到细胞内多种含磷小分子代谢物 。

44种生物碱类化合物对人鼻咽癌细胞株KB和人白血病细胞株HL-60细胞增殖抑制活性的筛选

目的:从中药中筛选有抗肿瘤活性的化合物。方法:应用人鼻咽癌细胞株KB和人白血病细胞株HL-60筛选44种生物碱类化合物对其增殖的抑制作用。结果:西萝芙木碱、伊波加因、骆驼蓬碱、哈尔明碱、黄连碱、延胡索碱、白屈菜碱、小檗胺、吐根碱、4-甲氧基-1-甲基-2-喹诺酮、贝母碱N-氧化物、去氢贝母碱N-氧化物、倒千里光碱、9-去甲基小檗碱、番茄碱苷、澳洲茄次碱、金鸡宁、罂粟碱、喜树碱和酒石酸麦角胺对人鼻咽癌细胞株KB细胞的增殖有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;最强者为吐根碱、番茄碱苷和喜树碱,其次为黄连碱、白屈菜碱、哈尔明碱、澳洲茄次碱和延胡索碱。西萝芙木碱、白屈菜碱、哈尔明碱、小檗胺、吐根碱、贝母碱N-氧化物、番茄碱苷、罂粟碱、利血胺和喜树碱对人白血病细胞株HL-60细胞的增殖亦有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;最强者为吐根碱,其次为西萝芙木碱、小檗胺、番茄碱苷和喜树碱。结论:上述生物碱类化合物可能是含有该生物碱的、有抗肿瘤活性中药的有效成分,亦可能成为开发抗肿瘤新药的候选药物。

40种香豆素类化合物对人鼻咽癌细胞株KB和人白血病细胞株HL-60细胞生长抑制活性的筛选

目的:从中药中筛选有抗肿瘤活性的化合物。方法:应用人鼻咽癌细胞株KB和人白血病细胞株HL-60筛选40种香豆素类化合物对其生长的抑制作用。结果:马栗树皮苷、去甲基呋喃皮纳灵、前胡素和二氢山芹醇当归酸酯对人鼻咽癌细胞株KB细胞的生长有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;伞形花内酯刘寄奴酸酯、牛防风素和考迈斯托醇对人白血病细胞株HL-60细胞的生长有一定程度的抑制作用。结论:马栗树皮苷、去甲基呋喃皮纳灵、前胡素和二氢山芹醇当归酸酯对人鼻咽癌细胞株KB细胞的生长有抑制作用;伞形花内酯刘寄奴酸酯、牛防风素和考迈斯托醇对人白血病细胞株HL-60细胞的生长有抑制作用。

中国鲎鲎素T-1抗人早幼粒白血病HL-60细胞活性研究

利用从中国鲎血细胞中提取的鲎素Ｔ－１作抗肿瘤活性实验．结果表明，鲎素Ｔ－１在体外对人早幼粒白血病ＨＬ－６０细胞的增殖有明显抑制作用．急性毒理实验显示，鲎素Ｔ－１对正常活体毒性较小，可用于活体实验．荷瘤裸鼠实验统计，鲎素Ｔ－１对肿瘤抑制率达４２．３％．

长期传代后HL-60细胞内脱氧胞苷激酶与阿糖胞苷耐药性的关系

目的通过观察人早幼粒白血病细胞系(HL-60)及其耐药细胞株(HL-60/R)经过长期传代后细胞内脱氧胞苷激酶(deoxycytidine kinase,dck)mRNA表达及其酶活性的变化规律,探讨dck与阿糖胞苷(Ara-C)疗效及耐药现象发生的相关性。方法分别采用实时PCR方法和核素液闪法测定HL-60和HL-60/R细胞内dck的mRNA表达水平及其酶活性水平。通过体外培养传代,观察2种细胞株经长期传代(5、10、20、30、40、50代)后细胞内dck的mRNA表达及酶活性的变化规律。结果传代初期结果显示,HL-60和HL-60/R两组细胞株之间的mRNA表达水平分别为0.37±0.03和0.17±0.03,活性值分别为0.069±0.006nmol.min-1.mg-1 protein和0.019±0.007nmol.min-1.mg-1 protein,HL-60的dck mRNA表达水平和酶活性均明显高于HL-60/R(P<0.01)。并且两组细胞株之间的显著性差异(P<0.01)持续存在于各传代过程中。HL-60和HL-60/R两组各传代节点(10、20、30、40和50代)的dck mRNA表达水平与酶活性与本组第5代细胞相比,则无明显变化(P>0.05)。结论 HL-60及HL-60/R两组细胞株间的dck mRNA表达和酶活性在传代初期存在显著差异,且两组间的差异持续存在。但与各自的初期传代相比,长期传代后的dck mRNA表达和酶活性变化并不明显,提示dck仅与Ara-C的初期疗效明显相关,而与Ara-C耐药现象的发生可能无关。

全反式维甲酸和亚硒酸钠对HL-60细胞Rb基因的RNA表达及其产物磷酸化的影响

目的：观察全反式维甲酸（ＲＡ）和亚硒酸钠对ＨＬ６０的Ｒｂ基因的ＲＮＡ及其产物磷酸化的联合效应。方法：以ＨＬ６０细胞为实验对象，利用狭线杂交、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ和流式细胞仪进行研究。结果：狭线杂交实验表明ＲＡ和硒单独或联合都对Ｒｂ基因的ＲＮＡ无明显影响。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ结果显示：ＲＡ和硒可影响该细胞ＲＢ蛋白磷酸化与去磷酸化状态。在第４天０．１μｍｏｌ／ＬＲＡ可使去磷酸化ＲＢ蛋白增加４７％；５．８μｍｏｌ／ＬＮａ２ＳｅＯ３可使磷酸化ＲＢ蛋白减少４９％，对去磷酸化ＲＢ蛋白仅轻度增加。联合后去磷酸化ＲＢ蛋白明显增加，较对照组增加了１２７％，明显高于两单独组。实验中ＲＢ蛋白磷酸化状态与细胞分化和细胞周期关系与文献报道一致。结论：ＲＡ和硒联用对ＨＬ６０细胞的ＲＢ蛋白产物去磷酸化作用比单独作用更强。

亚硒酸钠和维甲酸联合对HL-60细胞c-myc和c-fos基因表达的影响

以HL－60细胞为实验对象，利用Slot－blot技术，观察了亚硒酸钠和维甲酸（RA）联合对其原癌基因c－myc和c－fos表达的影响。结果表明：硒和RA在第一和第二天都可使c－myc基因表达下降，以后逐渐上升到对照组或稍高水平。联合可使c－myc表达显著下降，强于两单独作用。硒和pA在第三至第四天均可使c－fos表达明显升高，第四天5．8ｕmol／LNa2SeO3和0．1ｕmol／LRA以及联合组c－fos表达水平分别为对照组的2．8，3．7和5．4倍。

二烯丙基二硫对人白血病细胞HL-60增殖、细胞周期及p21表达的影响

目的观察二烯丙基二硫(DADS)作用于人白血病细胞系HL-60后,细胞增殖、细胞周期及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p21表达的变化,探讨DADS抑制HL-60增殖、诱导G2/M阻滞的作用机制。方法不同浓度DADS作用HL-60后,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期,Westernblot检测p21蛋白水平。结果在一定浓度范围之内,DADS能抑制HL-60细胞增殖,细胞周期发生G2/M期阻滞,并上调p21蛋白水平。结论DADS能通过上调p21的表达而抑制HL-60增殖,诱导其G2/M期阻滞。

维甲酸诱导HL-60细胞分化与细胞周期的关系

研究全反式维甲酸 (RA)在体外诱导人髓系白血病细胞系 (HL 60 )分化过程中细胞周期的改变。利用流式细胞术动态测定RA在体外诱导HL 60细胞分化过程中细胞周期的改变。结果发现 :①在RA与HL 60细胞共培养 4 8小时内 ,S +G2 /M期比例无明显变化 ,但S期细胞的比例改变与RA的浓度有关 ,在 10 - 6 mol/LRA浓度S期细胞比例先出现一过性升高 ,继而持续下降 ,在 10 - 5mol/L浓度S期细胞比例表现为持续性下降 ;②重培养试验证明 :S +G2 /M和S期细胞比例的下降与成熟分化细胞的增加相一致 ;③RA诱导HL 60细胞成熟分化并不是在一个时间点上同时进入分化状态 ,而一旦细胞开始进入成熟分化 ,即使在无RA存在的情况下 ,细胞仍能分化至成熟。结论提示 :RA与HL 60细胞必须相互作用一定时间后才能触发细胞成熟分化 ,S期细胞的比例改变与RA药物浓度有关 ,一旦细胞开始进入成熟分化 ,即使在无RA存在的情况下 。

HL-60细胞产生的肿瘤免疫抑制因子对T细胞的作用及其生物学特性

白血病细胞培养上清液和白血病人血清能抑制PHA—P诱导的人外周血T淋巴细胞的增殖;抑制白细胞介素2(IL—2)的产生和反应性。以正常2BS人胚肺细胞培养上清液和正常人血清作对照则无抑制作用。白血病细胞培养上清液无细胞毒作用。聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)结果表明,来源HL—60人早幼粒白血病细胞的肿瘤免疫抑制因子(tumor-derived immunosuppressive factor,TDSF)的分子量约为87KD,其化学本质为蛋白质。抗急非淋白血病药物对这种TDSF的分泌有部分抑制作用。

蝌蚪提取液对HL-60细胞相关癌基因表达的影响

目的 研究蝌蚪提取液 (T871 3)对白血病细胞的作用机制。 方法 利用细胞形态学观察、细胞化学、TUNEL法等技术 ,并采用原位mRNA杂交和完整细胞原位斑点印迹技术 ,观察T871 3诱导HL 6 0细胞分化和凋亡过程中c myc、c myb、bcl 2癌基因表达的变化。 结果 1 T871 3能抑制HL 6 0细胞分裂增殖。 2 T871 3在低浓度时诱导HL 6 0细胞向单核 /巨噬样细胞方向分化 ,高浓度时诱导细胞凋亡。 3 T871 3诱导HL 6 0细胞分化的过程伴随着c myc、c myb癌基因表达的下调 ,诱导HL 6 0细胞凋亡的过程伴随着c myc、bcl 2癌基因表达的下调。 结论 T871 3可能通过调节癌基因的表达发挥其诱导HL 6 0细胞分化和凋亡的作用。

几种药物对HL-60细胞的诱导分化作用及其过程中蛋白激酶C活力分布的变化

本文就HHT、RA、WB_(852)对HL-60细胞的诱导分化作用及此过程中PKC活力在细胞胞浆部分及膜溶脱部分的变化进行研究。结果表明,在适当的用药浓度下,从细胞生长抑制情况、形态学观察及NBT还原能力测定判断,三种药物对HL-60细胞有明显的诱导分化作用。PKC活力分布变化的研究结果表明,用药组细胞胞浆部分酶活力有不同程度的下降,尤在用药早期(约6h以前)下降显著;而膜部分PKC活力则表现上升、或下降,或活力相差不大的结果。暗示在信息传递过程中起核心作用的PKC对不同的胞外刺激可能采取不同的应答方式。PKC的作用可能主要发生在信息传递的早期。

亚硒酸钠抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导白血病细胞HL-60凋亡的机制研究

目的探究亚硒酸钠诱导白血病细胞HL-60凋亡的信号通路及其对信号通路的影响。方法应用不同浓度的亚硒酸钠处理白血病细胞HL-60,或者应用亚硒酸钠按照不同的时间点处理白血病细胞HL-60,使用流式细胞仪检测亚硒酸钠对HL-60细胞凋亡的影响。应用10μmol/L亚硒酸钠处理HL-60细胞,Western blot检测p-PI3K、总PI3K、p-AKT、总AKT、p-m TOR和总m TOR的表达情况。在过表达PI3K的HL-60细胞中应用10μmol/L亚硒酸钠处理白血病细胞HL-60,流式细胞仪检测HL-60细胞的凋亡情况,Western blot检测p-PI3K、总PI3K、pAKT、总AKT、p-m TOR和总m TOR的表达变化。同时以加蒸馏水处理的HL-60细胞为空白对照组。结果与空白对照组凋亡比例(0.045±0.0013)相比,10μmol/L及20μmol/L亚硒酸钠处理组可有效诱导白血病细胞HL-60凋亡[凋亡比例分别为(0.254±0.001 6)和(0.435±0.002 1)],差异均有统计学意义(P<0.05)。此外与10μmol/L的亚硒酸钠处理0 h组相比[凋亡比例(0.055±0.001 1)],10μmol/L亚硒酸钠作用24 h、48 h、72 h后,HL-60细胞的凋亡显著[凋亡比例分别为(0.179±0.0018)、(0.384±0.0023)和(0.535±0.0034)],差异均有统计学意义(P<0.05)。亚硒酸钠处理细胞能下调PI3K、AKT、m TOR的磷酸化水平,但对总的PI3K、AKT以及m TOR的表达没有影响。在过表达PI3K的细胞中,AKT、m TOR表达上调,而亚硒酸钠可逆转过表达PI3K导致的PI3K/AKT/m TOR信号通路的过度激活。过表达PI3K使细胞凋亡被抑制,而亚硒酸钠可诱导过表达PI3K的细胞凋亡增加。结论亚硒酸钠可通过抑制PI3K/AKT/m TOR信号通路的激活,诱导白血病细胞HL-60凋亡。

维甲酸与星状孢子素联合分化诱导HL-60细胞过程中酪氨酸蛋白质磷酸化系统的变化

以人早幼粒白血病细胞株（HL-60）为材料，对维甲酸与星状孢子素联合诱导HL-60细胞过程中胞浆和膜部分的蛋白质酪氨酸磷酸化水平变化进行了研究．结果表明，诱导后2～24h范围内，TPK活力出现波动，随时间延长（24～27h），胞浆部分TPK活力下降，膜溶脱部分TPK活力上升；PTPP活力明显升高且上升幅度比TPK大得多．利用抗P-tyr-BSA抗体分析底物含量变化的结果与相应时相的TPK和PTPP活力变化趋势一致．

亚硒酸钠和维甲酸联合对HL－60细胞生长、分化的影响

以人早幼粒白血病细胞（ＨＬ－６０）为实验对象，观察了亚硒酸钠和维甲酸联合作用对其生长、分化的影响。结果表明：５．８μｍｏｌ／Ｌ亚硒酸钠和０．１μｍｏｌ／Ｌ维甲酸联合可显著抑制细胞生长，且细胞毒性并无增加，强于两者的单独作用。而且可明显诱导细胞向粒系细胞分化，在处理５天后有７２％的细胞进行分化。单用０．１μｍｏｌ／Ｌ维甲酸只有３９％的细胞分化成熟。ＮＢＴ还原实验表现出类似结果。

HL－60细胞诱导分化过程中TPK和PTPP活力的时空改变

对ＲＡ、ＨＨＴ和ＷＰ_（８５２）诱导ＨＬ－６０细胞分化过程中胞浆和膜溶脱部分中的ＴＰＫ和ＰＴＰＰ活力变化进行了研究．结果表明，在诱导早期，ＴＰＫ的活力就有明显的波动变化；随着诱导时间的延长，胞浆部分ＴＰＫ活力下降，膜溶脱部分的ＴＰＫ活力则升高．诱导后，胞浆部分和膜溶脱部分的ＰＴＰＰ活力均明显升高。与ＴＰＫ活力变化相比较，ＰＴＰＰ变化幅度比ＴＰＫ的大。

HL－60细胞诱导分化过程中蛋白质酪氨酸磷酸化水平的改变

对ＲＡ、ＨＨＴ和ＷＢ_（６５２）诱导ＨＬ－６０细胞过程中，细胞浆和膜溶脱部分的蛋白质酪氨酸磷酸化水平变化进行了对比研究，结果发现，在胞浆部分主要有四种含有Ｐ－Ｔｙｒ的蛋白，而且８０ｋＤ蛋白酪氨酸磷酸化水平随着诱导发生变化。诱导前后内源性蛋白上Ｐ－Ｔｙｒ百分含量也发生了改变。

白血病细胞的^(31)P核磁共振分析及用于无损伤游离镁离子测定

建立了无损伤性3 1P NMR研究细胞内代谢物的实验方法 ,并对人早幼粒白血病细胞HL 6 0的3 1P NMR谱中含磷小分子代谢物的谱峰进行了分析 ;通过测量HL 6 0的3 1P NMR谱中ATP的α磷和 β磷的化学位移差值 ,得出HL 6 0细胞内Mg2 + 与ATP结合的复合物MgATP和整个ATP量的比值 ,计算得到HL 6 0细胞内游离Mg2 + 浓度为 0 .2 6 4mmol/L。与其它分析方法相比 ,3 1P NMR测定细胞内游离Mg2 +

黄芩苷作用HL-60细胞前后c-myc基因表达的变化

目的研究中药黄芩苷(baicalin)对人髓系白血病细胞株HL-60细胞增生、凋亡的影响及探讨c-myc基因在其中的作用。方法培养人髓系白血病细胞株HL-60细胞,应用MTT法绘制细胞生长曲线观察黄芩苷对HL-60细胞增生的影响;DNA凝胶电泳观察细胞凋亡;RT-PCR检测黄芩苷作用前后c-myc基因mRNA表达水平的变化;Westernblot检测黄芩苷作用前后c-myc蛋白表达水平的变化。结果细胞生长曲线结果示黄芩苷能明显抑制HL-60细胞增生,半数抑制浓度(IC50)约为20μmol/L,DNA片段化的检出表明黄芩苷能有效诱导HL-60细胞凋亡;黄芩苷作用后HL-60细胞c-myc基因和蛋白的表达水平均下降,并且随作用时间延长,表达下降更明显。结论黄芩苷能有效抑制HL-60细胞增生,诱导其凋亡,c-myc基因可能参与了黄芩苷抑制HL-60细胞增生和诱导凋亡的过程。

亚硒酸钠对人早幼粒白血病细胞的RB蛋白磷酸化的影响

以人早幼粒白血病细胞（HL－60）为实验对象，利用Western－blotting方法和流式细胞仪分析，研究亚硒酸钠对HL－60细胞的RB蛋白产物磷酸化的影响和探讨其抗癌机制。Western－blotting结果显示：与对照组相比，在第四天5．8μmol／LNa2SeO3可使磷酸化Rll蛋白减少49％，去磷酸化RB蛋白仅轻度增加，但在加硒组中去磷酸化RB蛋白占RB蛋白总量的71．1％。与此同时，细胞周期的结果表明：亚硒酸钠对HL－60细胞的G2＋M和S期有一定的阻滞。该实验在蛋白分子水平上研究了亚硒酸钠抑制HL－60细胞增殖的作用机制。