胃癌hPOT1基因单核苷酸多态性与幽门螺杆菌感染的关系

目的探讨胃癌中人端粒保护蛋白1基因(hPOT1)IVS13-98G/T位点单核苷酸多态性与幽门螺杆菌(H.pylori)感染的关系。方法采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)对150例外科手术切除的胃癌患者和156例正常对照者行基因型分析,采用PCR和Warthin-Starry银染色法检测幽门螺杆菌。结果胃癌组hPOT1IVS13-98 T/G位点GG、GT、TT基因型的频率分别22.00%、41.67%、36.67%,G、T等位基因频率分别为42.67%、57.33%;对照组GG、GT、TT基因型的频率分别为24.36%、51.92%、23.72%,G、T等位基因频率分别为49.68%和50.32%。两组G、T等位基因型频率比较无统计学意义(2χ=3.0257,P=0.0820)。以T/T基因型作为参照基因型,G/T和G/G两种基因型OR值分别为0.432(95%CI:0.242-0.772,P=0.005)、0.540(95%CI:0.274-1.064,P=0.075)。胃癌中3种基因型H.pylori的检出率无统计学意义(P>0.05)。结论hPOT1 IVS13-98G/T单核苷酸多态性可能与甘肃胃癌高发区的胃癌患者有关,可能为胃癌的保护因素。胃癌hPOT1 IVS13-98G/T单核苷酸多态性与H.pylori感染无关。

hPOT1 RNA干扰对人胃癌BGC823细胞突变型p53表达的影响

目的通过RNA干扰技术抑制人胃癌细胞BGC823中人端粒保护蛋白(human protection of telomeres 1,hPOT1)的表达,观察hPOT1 RNA干扰对胃癌BGC823细胞突变型p53基因转录水平的影响。方法从hPOT1编码区外显子8的区域选取一段19个碱基的序列gtactagaagcctatctca为RNA干扰靶向序列,构建hPOT1的RNA干扰真核表达载体,转入体外培养的低分化人胃癌细胞BGC823,提取细胞总RNA,半定量RT-PCR检测hPOT1和突变型p53基因mRNA表达水平的改变,验证hPOT1 RNA干扰载体的基因沉默效率,了解抑制hPOT1表达后突变型p53基因mRNA水平的改变。结果经DNA测序鉴定,hPOT1 RNA干扰载体包含干扰序列的插入片段,插入位置正确。经半定量RT-PCR鉴定,RNA干扰组细胞的hPOT1 mRNA表达水平明显下调,基因沉默效率在70%左右;突变型p53表达下调。结论通过RNA干扰技术抑制人胃癌细胞BGC823中hPOT1表达后,突变型p53表达下调,提示hPOT1与突变型p53之间有一定的相关性。

利用酵母双杂交技术筛选与hPOT1相互作用的新蛋白

目的:利用酵母双杂交系统筛选与人POT1(human protection of telomeres 1,hPOT1)相互作用的蛋白。方法:以hPOT1的300～634氨基酸片段为诱饵,在人乳腺cDNA文库中筛选能与hPOT1相互作用的蛋白质;运用营养缺陷型培养基和X-α-Gal实验排除假阳性,并对阳性克隆进行序列测定和比对。结果:经过酵母双杂交筛选,发现7个与hPOT1相互作用的蛋白;选取NM23B与hPOT1通过GST-pull down和免疫共沉淀进行进一步的验证,结果证明它们确实存在相互作用。结论:hPOT1能与NM23B发生相互作用,在此实验基础上可以进一步研究NM23B与hPOT1相互作用的生物学意义。

喉癌及癌前病变中hPOT1的表达及其与HP感染的相关研究

目的探讨喉癌及癌前病变中人端粒保护蛋白1(hPOT1)的表达及其与幽门螺杆菌(HP)感染的关系。方法针对喉癌前病变、喉癌各50例患者,使用免疫学组织化学SP检验法,统计被检测对象的HP值以及其受感染状况与人端粒保护蛋白表达状况。结果喉癌前病变、喉癌中hPOT1表达阳性率分别为38%、86%,P <0.05;HP感染阳性率分别为66%、24%,P <0.05;HP阳性组hPOT1表达均高于HP阴性组,其中,喉癌前病变中hPOT1的表达HP阳性组高于HP阴性组,P <0.05。结论 hPOT1可能参与了喉癌的发生;在喉癌前病变阶段检测hPOT1的表达和HP的感染情况可为临床早期干预性治疗提供依据。

hPOT1基因表达与胃癌发生发展的相关性

目的探讨人类端粒保护蛋白(hPOT1)基因表达与胃癌发生发展的相关性。方法免疫组化SP法和RT-PCR法分别检测100例原发性胃癌患者(A组)、90例胃溃疡患者(B组)的hPOT1蛋白表达和hPOT1单核苷酸多态性(SNP)。结果 A组hPOT1蛋白阳性表达率明显高于B组(86.0%vs.1.1%)(P<0.01)。hPOT1基因表达及基因型与胃癌临床分期、分化程度、浸润程度、淋巴结转移和5年存活率密切相关(P<0.01或P<0.05),而与初复发、年龄、肿瘤大小和组织学类型无关(P>0.05)。与B组相比,A组GG基因型频率以及等位基因G、T频率差异均有统计学意义(P<0.05),而GT、TT分布差异无统计学意义(P>0.05)。结论 hPOT1与胃癌临床分期、分化程度、浸润深度、淋巴结转移及5年存活率等密切相关,并且与GG基因型和等位基因G、T相关联。

端粒保护蛋白过表达对HeLa细胞染色体端-端融合和端粒酶活性的影响

目的观察人端粒保护蛋白1(human protection of telom eres 1,hPOT1)基因过表达对HeLa细胞染色体端-端融合和端粒酶活性的影响。方法利用先前构建的hPOT1基因真核表达重组质粒pcDNA3-hPOT1,经脂质体介导瞬时转染HeLa细胞介导hPOT1基因过表达;秋水仙碱阻滞细胞周期于分裂中期,DAPI荧光染色分析染色体端-端融合;Telom erase PCR-ELISA试剂盒检测端粒酶活性。结果pcDNA3-hPOT1重组质粒转染HeLa细胞5 d后,染色体端-端融合几率增加,对端粒酶活性无明显影响。结论提示hPOT1蛋白可导致染色体端-端融合。

人端粒保护蛋白1基因单核苷酸多态性与胃癌的关系

目的探讨人端粒保护蛋白1基因（hPOT1）IVS13—98G／T位点单核苷酸多态性与胃癌的关系。方法收集2005年12月至2006年7月甘肃省武威肿瘤医院、武威市人民医院、武威市凉州区医院168例胃癌患者（胃癌组）和156例健康受试者（对照组）的血液标本，采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性技术行基因型分析，比较各基因型分布频率与胃癌发病风险的关系。采用矿检验比较胃癌组和对照组hPOT1IVS13—98G／T位点的基因型分布和等位基因频率，用Hardy—weinberg平衡检验基因型和等位基因频率分布是否具有群体代表性。相对危险度和95％CI以非条件Logistic回归模型计算。结果胃癌组hPOT1IVS13—98G／T位点GG、GT、TT型的频率分别为21．4％、41．7％、36．9％，G、T等位基因的频率分别为42．3％、57．7％；对照组GG、GT、TT型的频率分别为24．4％、51．9％、23．7％，G、T等位基因频率分别为49．7％和50．3％。两组G、T等位基因型频率比较差异无统计学意义（χ2=3．58，P〉0．05）。以TT型作为参照基因型，GT和GG两种基因型相对危险度分别为0．439（95％CI：0．251—0．767，P〈0．05）、0．514（95％凹：0．264—0．999，P=0．05）。hPOT1IVS13—98G／T位点各基因型与性别、吸烟及肿瘤家族史对胃癌发病没有影响。结论hPOT1IVS13—98G／T位点的GT和GG型可能与胃癌的易感性降低有关，hPOT1IVS13—98G／T位点单核苷酸多态性可能为胃癌的保护因素。

胃癌中人端粒保护蛋白1的表达及其与幽门螺杆菌感染的相关性研究

目的 探讨胃癌中人端粒保护蛋白1（hPOT1）基因的表达及其与幽门螺杆菌（HP）感染的关系.方法 应用SP免疫组织化学、原位杂交法检测hPOT1蛋白、hPOT1 mRNA在53例胃癌标本（观察组）中的表达,同时以20例正常胃黏膜组织作为对照.应用Warthin-Starry银染法检测53例胃癌组织中HP感染情况.结果 观察组中hPOT1蛋白的阳性表达率为84.91％（45/53）,高于对照组的30.00％（6/20） （P＜0.01）;观察组中hPOT1 mRNA的阳性表达率为58.49％（31/53）,高于对照组的10.00％（2/20）（P＜ 0.05）.胃癌组织中hPOT1蛋白与hPOT1 mRNA共同阳性表达率为56.60％（30/53）,两者在胃癌中的表达呈正相关（r=0.394,P＜0.01）.53例胃癌组织中HP感染阳性28例（52.83％）.HP感染阳性组hPOT1蛋白阳性表达率为96.43％（27/28）,高于HP感染阴性组的72.00％（18/25）（P＜0.05）.HP感染阳性组hPOT1 mRNA阳性表达率为85.75％（24/28）,高于HP感染阴性组的28.00％（7/25）（P＜0.01）.结论 hPOT1可能参与了胃癌的发生,同时检测hPOT1蛋白与hPOT1 mRNA的表达水平有助于胃癌的诊断.胃癌组织中HP感染引起hPOT1异常表达可能是导致胃癌发生的机制之一.

人端粒保护蛋白1的结构与功能

人类端粒DNA由富含G的短片段重复序列（TTAGGG）串联组成，包括双链和3’端突出的单链两部分，不能编码蛋白质[1-2]。通常认为端粒酶是调控端粒DNA长度最重要的因素，端粒酶活性的降低将导致端粒长度的下降，细胞分裂停滞。端粒酶活性通常由其催化亚单位（端粒酶逆转录酶）所决定[3-4]，但奇怪的是，端粒双链DNA结合蛋白TRFl与TRF2，也能调控端粒酶活性，但它们并无直接联系。最近的研究显示人端粒保护蛋白1（hPOTl）能将TRFl一TRF2复合物携带的端粒长度信息传递到端粒DNA的末端与端粒酶，从而维持端粒DNA长度的稳定[5]。本文就端粒结构、hPOTl的基因结构、hPOTl的理化性质以及hPOTl的功能做一综述。

人端粒保护蛋白1与冠状动脉病变的关系

目的探讨人端粒保护蛋白1（hPOTl）的表达水平与冠状动脉粥样硬化病变发生的关系。方法选取山东大学第二医院心脏内科住院患者79例，通过冠状动脉造影术，分为冠心病组（n=49）和对照组（n=30），分离外周血白细胞，应用实时荧光定量PCR（qRT—PCR）法检测hPOTlmRNA表达水平，研究对象均测定身高、体质量、血压等指标，检测空腹血糖、血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL—C）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL—C）等指标。结果冠心病组llPOTlmRNA表达量与对照组相比明显减低（P〈0．05）；hPOTImRNA表达水平与冠心病的易患因素高血糖（r=-0．264，P〈0．05）、高胆固醇（r=-0．213，P〈0．05）及高血压（r=-0．331，P〈0．01）分别呈负相关；多因素Logistic回归分析显示，hPOTl为冠心病发生的保护性因素（OR=0．87l，95％C1=0．852—0．900，P〈0．05）。结论hPOTl表达水平减低与冠状动脉粥样硬化病变的发生及其易患因素密切相关。