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Orthotopical transplantation of human renal carcinoma tissue into nude mice and the establishment of a high metastatic cell line MRCC
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作者 王鹏飞 《外科研究与新技术》 2003年第2期116-117,共2页
Objective To establish a SOI model of human renal carcinoma and a high metastatic cell subline. Methods A human renal cell line RCC-9863 has been established by inoculating a human renal tumor tissue into nude mice s.... Objective To establish a SOI model of human renal carcinoma and a high metastatic cell subline. Methods A human renal cell line RCC-9863 has been established by inoculating a human renal tumor tissue into nude mice s. c.. When RCC-9863 passaged for 20 times, the tissue from the same xemotransplant tumor were used to construct SOI model. Cultured the metastatic tissue in vitro, the tumor cell suspension was then injected orthotopically, The metastatic tissue obtained underwent the same procedure again. At last, the metastatic tumor was cultured in vitro and cloned. Results 15 days later, a tumor mass sized 1. 7 cm × 0. 6 cm in the nude mouse’s renal parenchyma was grown which lobulated, rude, and with multiply blood vessels and 55 days later later the mouse became moribund and metastases in the lungs were formed. The transplanted renal tumor in the SOI model grew fast and invasively and metastasized to lungs, lymphatic node and liver. A subline, MRCC, with metastatic ability to the lung was selected. 展开更多
关键词 of Orthotopical transplantation of human renal carcinoma tissue into nude mice and the establishment of a high metastatic cell line MRCC
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甘草干姜汤对人肾癌细胞及人尿源性干细胞的作用
2
作者 黄吉 张忆雪 孙震晓 《癌变.畸变.突变》 CAS 2024年第5期359-364,390,共7页
目的:探讨甘草干姜汤(LDGD)对体外培养的人肾癌769-P细胞和人尿源性干细胞(hUSCs)活力和凋亡的作用。方法:常温离心法从人的新鲜尿液中分离培养hUSCs,观察hUSCs的生长状态并采用MTT法测定其活力;流式细胞术鉴定hUSCs表面标志物的表达。... 目的:探讨甘草干姜汤(LDGD)对体外培养的人肾癌769-P细胞和人尿源性干细胞(hUSCs)活力和凋亡的作用。方法:常温离心法从人的新鲜尿液中分离培养hUSCs,观察hUSCs的生长状态并采用MTT法测定其活力;流式细胞术鉴定hUSCs表面标志物的表达。MTT法检测2.5~40 mg/mL LDGD作用769-P细胞和hUSCs 24~72 h后的活力,观察其细胞形态的变化;流式细胞术检测10 mg/mL LDGD诱导769-P细胞和hUSCs凋亡的情况,计算其凋亡率。结果:通过常温离心法获得细胞形态良好、生长活性较高的hUSCs,hUSCs表达间充质干细胞表面标志物CD44和CD90,不表达内皮细胞表面标志物CD31和造血干细胞表面标志物CD34。5~10 mg/mL LDGD作用24~72 h可抑制769-P细胞活力并呈时间和剂量-效应关系,而对hUSCs活力有促进作用。10 mg/mL LDGD作用48 h后,倒置显微镜下可见769-P细胞发生明显皱缩,体积缩小,细胞折光率下降,而hUSCs形态无明显变化。10 mg/mL LDGD作用769-P细胞48 h后的凋亡率为(11.93±0.51)%,相较对照组显著升高(P<0.01),而作用hUSCs后的凋亡率为(0.01±0.10)%,与对照组比较差异无统计学意义(P<0.05)。结论:在本实验条件下,LDGD可抑制体外培养的人肾癌细胞活力,诱导其凋亡;可促进hUSCs的细胞活力,且无明显诱导细胞凋亡作用。LDGD对两种细胞的作用存在明显差异。 展开更多
关键词 甘草干姜汤 肾癌细胞 人尿源性干细胞 细胞活力 凋亡
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小檗碱通过下调METTL3表达抑制肾癌细胞侵袭和迁移的机制 被引量:1
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作者 杨天宇 帅立雄 +3 位作者 许竞泽 程馨阳 许志明 张永胜 《中国药房》 CAS 北大核心 2023年第15期1863-1868,共6页
目的 探讨小檗碱(BER)对人肾癌细胞侵袭、迁移的抑制作用及可能机制。方法 以人肾癌OSRC-2细胞为对象进行实验。采用alamarBlue法测定0(对照组)、25、50、75、100、125、150、175、200μmol/L BER作用24、48 h后对OSRC-2细胞增殖的抑制... 目的 探讨小檗碱(BER)对人肾癌细胞侵袭、迁移的抑制作用及可能机制。方法 以人肾癌OSRC-2细胞为对象进行实验。采用alamarBlue法测定0(对照组)、25、50、75、100、125、150、175、200μmol/L BER作用24、48 h后对OSRC-2细胞增殖的抑制作用。用0(对照组)、50、100μmol/L BER作用于细胞48 h后,通过流式细胞术分析BER对细胞周期的影响;通过细胞划痕实验观察24、36 h时各组细胞的迁移能力;通过Transwell实验观察作用24 h时各组细胞的侵袭能力;并通过Western blot法检测上述药物作用48 h后细胞中甲基转移酶样蛋白3(METTL3)的蛋白表达,通过RNA甲基化定量试剂盒检测各组细胞内RNA的N6-甲基腺嘌呤(m6A)水平。结果 与对照组比较,不同浓度BER均可显著升高OSRC-2细胞的增殖抑制率(P<0.01),并呈时间和浓度依赖性趋势;50、100μmol/L BER作用48 h后可将细胞周期阻滞在G0/G1期(P<0.01);50、100μmol/L BER组细胞的迁移、侵袭能力均显著降低(P<0.05或P<0.01),细胞中METTL3蛋白的表达水平和RNA的m6A水平均显著降低(P<0.01)。结论 BER可通过下调METTL3的表达,进而抑制m6A水平,从而抑制人肾癌细胞的侵袭、迁移。 展开更多
关键词 小檗碱 人肾癌OSRC-2细胞 迁移 侵袭 甲基转移酶样蛋白3 N6-甲基腺嘌呤
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人着丝粒蛋白E在人肾透明细胞癌中的表达及对细胞增殖的影响
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作者 刘芬 李世宾 李晓石 《天津医科大学学报》 2023年第6期594-598,共5页
目的:探讨人着丝粒蛋白E(CENPE)在人肾透明细胞癌组织中的表达、临床意义及对细胞增殖的影响。方法:生物信息学分析GEPIA数据库中CENPE在肾透明细胞癌组织及癌旁组织中的mRNA水平,并分析其表达与患者预后之间的关系。回顾性分析来自新... 目的:探讨人着丝粒蛋白E(CENPE)在人肾透明细胞癌组织中的表达、临床意义及对细胞增殖的影响。方法:生物信息学分析GEPIA数据库中CENPE在肾透明细胞癌组织及癌旁组织中的mRNA水平,并分析其表达与患者预后之间的关系。回顾性分析来自新乡市中心医院2014年9月—2021年8月接受手术治疗的77例肾透明细胞癌患者的临床病理资料。采用免疫组化法检测肾透明细胞癌组织和癌旁组织中CENPE蛋白表达水平,分析其与患者临床病理特征的关系。培养HTB-47和CRL-1932细胞,通过CENPE的shRNA质粒转染降低其表达,通过集落形成实验及CCK-8实验检测对肾透明细胞癌细胞增殖的影响。结果:生物信息学分析显示肾透明细胞癌患者CENPE显著高表达,并与无病生存期显著相关。免疫组化结果显示CENPE在肾透明细胞癌组织中显著高表达,而在癌旁组织中则为阴性或低表达,表达水平与肿瘤直径显著相关(P=0.021),而与患者的年龄、性别、肿瘤分化无关(均P>0.05)。集落形成实验(P=0.013 5、0.015 4)及CCK-8实验(P=0.009 1、0.013 3)证实CENPE在细胞表达下调并可以抑制肾透明细胞癌细胞的增殖。结论:肾透明细胞癌组织中CENPE显著高表达,且与患者临床病理特征及预后相关,CENPE蛋白促进肾透明细胞癌细胞的增殖。 展开更多
关键词 人着丝粒蛋白E 肾透明细胞癌 免疫组化 细胞增殖
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下调HIF-1α/PLOD2信号通路对缺氧肾透明细胞癌786-0和ACHN细胞株增殖、迁移和侵袭的影响
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作者 曹雪 杨金成 +4 位作者 李媛 赵梦潮 赵天琪 苗冬青 侯绍章 《宁夏医科大学学报》 2023年第10期973-978,1014,共7页
目的 探讨缺氧条件下缺氧诱导因子1α(HIF-1α)影响肾透明细胞癌(ccRCC)细胞迁移、侵袭和增殖的机制。方法 体外培养人ccRCC细胞,分为正常对照组(NG组)、缺氧组(Hypoxia组,1%O2)和缺氧+HIF-1α抑制剂组(Hypoxia+PX-478组,55μmol·L... 目的 探讨缺氧条件下缺氧诱导因子1α(HIF-1α)影响肾透明细胞癌(ccRCC)细胞迁移、侵袭和增殖的机制。方法 体外培养人ccRCC细胞,分为正常对照组(NG组)、缺氧组(Hypoxia组,1%O2)和缺氧+HIF-1α抑制剂组(Hypoxia+PX-478组,55μmol·L-1/45μmol·L-1)。用CCK-8法检测细胞活力;用Western blot实验检测各组ccRCC细胞中HIF-1α、2-酮戊二酸5-双加氧酶2(PLOD2)蛋白表达量;用细胞划痕实验检测ccRCC细胞迁移能力;用Transwell实验检测ccRCC细胞迁移、侵袭能力;用克隆形成实验检测ccRCC细胞增殖能力。结果 HIF-1α抑制剂加入后的细胞活力降低,且随着药物浓度升高而降低;与NG组相比,Hypoxia组HIF-1α、PLOD2蛋白表达量均增加(P均<0.05),与Hypoxia组相比,Hypoxia+PX-478组HIF-1α、PLOD2蛋白表达量发均降低(P均<0.05);与NG组相比,Hypoxia组ccRCC细胞786-0的迁移、侵袭和增殖能力均提高(P均<0.01),与Hypoxia组相比,Hypoxia+PX-478组细胞的迁移、侵袭和增殖能力均降低(P均<0.01)。结论 缺氧条件下,下调HIF-1α/PLOD2通路可抑制786-0和ACHN细胞的迁移、侵袭和增殖。 展开更多
关键词 缺氧 肾透明细胞癌 缺氧诱导因子1Α 2-酮戊二酸5-双加氧酶2
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5-氮杂-2’-脱氧胞苷抑制肾癌细胞增殖及逆转γ-catenin基因甲基化作用 被引量:3
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作者 陶美满 孙浩 +2 位作者 马克均 张顺兴 尤海燕 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期831-835,共5页
目的:研究甲基化抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人肾癌OS-RC-2细胞生长的抑制作用及对γ-catenin基因甲基化状态的影响,初步探讨肾癌发病机制及临床治疗的可行性。方法:不同浓度5-Aza-CdR处理肾癌细胞OS-RC-2后,采用倒置显微... 目的:研究甲基化抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人肾癌OS-RC-2细胞生长的抑制作用及对γ-catenin基因甲基化状态的影响,初步探讨肾癌发病机制及临床治疗的可行性。方法:不同浓度5-Aza-CdR处理肾癌细胞OS-RC-2后,采用倒置显微镜观察5-Aza-CdR处理OS-RC-2肾癌细胞株前后细胞形态学变化;四唑蓝(MTT)比色观察细胞经药物处理前后的生长活性;流式细胞仪检测5-Aza-CdR对OS-RC-2肾癌细胞株凋亡的影响;Western blot检测5-Aza-CdR处理OS-RC-2肾癌细胞株后γ-catenin蛋白表达的变化;甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测细胞处理前后γ-catenin基因的甲基化状态。结果:形态学观察显示,用药后癌细胞体积缩小,核固缩,染色质凝聚成块;5-Aza-CdR明显抑制肾癌细胞OS-RC-2的生长;细胞凋亡率增高;药物处理后γ-catenin蛋白表达恢复;未经5-Aza-CdR处理的OS-RC-2细胞中γ-catenin基因启动子区域高甲基化,经10-5mol/L5-Aza-CdR处理72h后,γ-catenin基因启动子区域高甲基化得到逆转。结论:5-Aza-CdR能有效逆转肾癌OS-RC-2细胞γ-catenin基因的异常甲基化,恢复γ-catenin蛋白表达,诱导肾癌细胞凋亡。 展开更多
关键词 5-氮杂-2’-脱氧胞苷 人肾癌OS-RC-2细胞株 γ-catenin基因 细胞凋亡 甲基化
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂通过激活p-JNK信号通路诱导肾癌细胞凋亡(英文) 被引量:5
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作者 徐米清 洪明 谢辉 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1409-1415,共7页
目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatinA,TSA)和帕比司他(panobinostat,LBH589)在体外对人肾癌细胞株增殖、细胞周期分布及凋亡的影响,并进一步探讨其可能的分子机制。方法 LBH589或TSA作用于经或未经SP600125预处理... 目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatinA,TSA)和帕比司他(panobinostat,LBH589)在体外对人肾癌细胞株增殖、细胞周期分布及凋亡的影响,并进一步探讨其可能的分子机制。方法 LBH589或TSA作用于经或未经SP600125预处理的人肾癌细胞株OS-RC-2,在设定的时间点用四甲基偶氮唑蓝方法(MTT)检测细胞生长抑制率并检测出最佳刺激浓度和时间;用流式细胞术检测药物作用后肾癌细胞周期变化情况及凋亡情况;用Western blotting分析药物作用后肾癌细胞内c-Jun、磷酸化c-Jun(p-c-Jun)、Bcl-2、Bax蛋白的表达变化。用JNK抑制剂SP600125阻断JNK信号通路后,观察SP600125预处理+TSA组较TSA单独处理肾癌细胞周期、凋亡及凋亡相关蛋白的变化情况。结果 TSA和LBH589在体外均可抑制肾癌细胞生长,且具有浓度与时间依赖性;与对照组相比,TSA或LBH589可使肾癌细胞发生G2/M期周期阻滞,并均可诱导肾癌细胞发生明显凋亡。Western blotting显示TSA和LBH589均能明显促进p-c-jun蛋白的表达,同时TSA也能诱导Bax蛋白表达而抑制Bcl2蛋白表达,与对照组相比有显著统计学意义(P<0.05);与TSA单独处理相比,JNK抑制剂SP600125预处理+TSA能部分减弱TSA对肾癌细胞的抑制效应并逆转TSA诱导的肾癌细胞G2/M期阻滞和细胞凋亡,差异有统计学意义(P<0.05)。结论组蛋白去乙酰化酶抑制剂在体外可抑制OS-RC-2细胞增殖,阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡;TSA可通过JNK信号通路诱导OSRC-2细胞G2/M期阻滞,调节凋亡蛋白的表达从而诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 曲古抑菌素A 帕比司他 肾癌细胞 凋亡 细胞周期 组蛋白去乙酰化酶抑制剂
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IGFBP-3在真核细胞中的分泌表达及功能分析 被引量:3
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作者 吴琛 单耀军 +2 位作者 邹民吉 王嘉玺 徐东刚 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期558-562,共5页
将人胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)的cDNA片段亚克隆入pSectagA载体,构建真核分泌型表达载体pSectag-IGFBP3。采用脂质体转染的方法将真核表达载体转染人肾癌786-O细胞,转染48 h后用免疫印迹法检测IGFBP-3的表达状况;同时以Annexi... 将人胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)的cDNA片段亚克隆入pSectagA载体,构建真核分泌型表达载体pSectag-IGFBP3。采用脂质体转染的方法将真核表达载体转染人肾癌786-O细胞,转染48 h后用免疫印迹法检测IGFBP-3的表达状况;同时以Annexin V-EGFP/PI染色,流式细胞仪检测细胞凋亡率,观察分泌表达的IGFBP-3对宿主细胞的促凋亡作用。转染48h后,经Western blotting检测,在细胞培养上清中有分泌表达的IGFBP-3蛋白。流式细胞技术检测结果表明,表达产物可直接作用于宿主细胞,发挥促肿瘤细胞凋亡的作用。由此表明所构建的重组表达质粒pSectag-IGFBP3能在真核细胞水平正常表达并发挥生物学功能,为进一步探索IGFBP-3的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 胰岛素样生长因子结合蛋白3 真核分泌表达 人肾癌细胞 诱导凋亡
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量子点荧光技术标记肿瘤细胞中HSP的应用研究 被引量:2
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作者 吕蔡 张杰 +2 位作者 庞代文 赵薇 杨欢 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2006年第5期513-516,共4页
目的探讨量子点荧光技术对人肾癌细胞株(ACHN)中不同HSP进行标记的可行性应用。方法利用量子点的荧光特性,免疫细胞化学方法检测体外培养的ACHN细胞中量子点特异性标记的HSP70、HSP90、HSPgp96的表达情况。结果共聚焦荧光显微镜下可见A... 目的探讨量子点荧光技术对人肾癌细胞株(ACHN)中不同HSP进行标记的可行性应用。方法利用量子点的荧光特性,免疫细胞化学方法检测体外培养的ACHN细胞中量子点特异性标记的HSP70、HSP90、HSPgp96的表达情况。结果共聚焦荧光显微镜下可见ACHN细胞中HSP70、HSP90、HSPgp96均有明显表达,呈现均匀分布的橙红色强荧光,且量子点在持续激发30分钟后无荧光淬灭发生。结论量子点荧光标记技术能够对不同HSP进行标记,且与传统的标记方法相比具有显著优点,可作为一种新型的检测技术应用于科研及临床标记检测中。 展开更多
关键词 量子点 人肾癌细胞 热休克蛋白
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红景天苷对人肾癌细胞生长、侵袭和迁移的调节作用 被引量:2
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作者 赵伟 王彦 +1 位作者 何涛 袁朝勇 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第4期554-558,共5页
目的探究红景天苷(SD)对人肾癌细胞生长、侵袭和迁移的作用。方法以0、2、5、10μmol/L SD作用于体外培养的人肾癌细胞Ketr-3,利用CCK-8法检测培养不同时间(0、1、2、3、4 d)细胞的增殖情况,用Transwell实验检测细胞侵袭能力,用划痕实... 目的探究红景天苷(SD)对人肾癌细胞生长、侵袭和迁移的作用。方法以0、2、5、10μmol/L SD作用于体外培养的人肾癌细胞Ketr-3,利用CCK-8法检测培养不同时间(0、1、2、3、4 d)细胞的增殖情况,用Transwell实验检测细胞侵袭能力,用划痕实验检测细胞迁移能力,用Western blot检测Ki67、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属酶蛋白-9 (MMP-9)蛋白表达水平。结果 SD浓度达到20μmol/L及以上时,Ketr-3细胞活性降低;SD (2、5、10μmol/L)作用4 d后,与Control组比较,SD (2、5、10μmol/L)组Ketr-3和Caki-1细胞增殖倍数显著降低(P<0.01),Ki67的表达水平显著降低(P<0.01);SD(2、5、10μmol/L)作用24 h后,Ketr-3和Caki-1细胞侵袭能力明显减弱(P<0.01),与Control组相比,SD(5、10μmol/L)组迁移能力均显著减弱(P<0.01),VEGF和MMP-9的表达水平显著降低(P<0.01)。结论 SD能够抑制人肾癌细胞Ketr-3和Caki-1的生长、侵袭和迁移。 展开更多
关键词 红景天苷 人肾癌细胞 增殖 侵袭 迁移
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重组人血管内皮抑制素联合吉西他滨和白介素-2治疗老年晚期肾癌的疗效观察 被引量:3
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作者 周铭 宫敬 +2 位作者 庄乾元 杨钧显 陈磊 《中南药学》 CAS 2015年第3期313-316,共4页
目的观察重组人血管内皮抑素(RHE)联合吉西他滨(G)和白介素-2(IL-2)治疗老年晚期肾癌的近期疗效及安全性。方法选择109例已经过病理学检查确诊为老年晚期肾癌患者作为研究对象,随机分为2组。观察组54例,采用RHE+G+IL-2治疗;对照组55例,... 目的观察重组人血管内皮抑素(RHE)联合吉西他滨(G)和白介素-2(IL-2)治疗老年晚期肾癌的近期疗效及安全性。方法选择109例已经过病理学检查确诊为老年晚期肾癌患者作为研究对象,随机分为2组。观察组54例,采用RHE+G+IL-2治疗;对照组55例,采用G+IL-2化疗。3个周期后对所有患者行CT复查,比较2组患者近期疗效、生活质量和毒性反应评分差异。结果观察组和对照组的客观有效率(ORR)分别为75.93%(41/54)和58.18%(32/55)(P<0.05)、临床受益率(CBR)分别为96.30%(52/54)和81.82%(45/55)(P<0.05);QOL改善稳定率分别为96.30%(52/54)和90.91%(50/55)(P>0.05),2组生活质量评分差异无统计学意义(χ2=1.871,P>0.05)。2组患者均有不同程度的不良反应,观察组和对照组Ⅲ级以上毒性反应发生率分别为74.07%(40/54)和69.09%(38/55),差异无统计学意义(P>0.05)。结论 RHE+G+IL-2治疗老年晚期肾癌近期疗效明显提高,不良反应未见增加并且安全性好。 展开更多
关键词 重组人血管内皮抑素 老年晚期肾癌 吉西他滨 白介素-2
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姜黄素通过Erk1/2信号通路抑制人肾癌细胞786-O在裸鼠体内增殖 被引量:1
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作者 赵建通 张磊 +4 位作者 刘文瞻 徐飞 郭明涛 路志民 肖波 《温州医科大学学报》 CAS 2017年第10期735-738,共4页
目的:探讨姜黄素对786-O细胞在体内增殖的抑制效果及其可能机制。方法:将人肾癌细胞786-O接种裸鼠,成瘤后将裸鼠随机分为2组,干预组给予姜黄素干预治疗,对照组则采用PBS对照治疗。测定干预组肿瘤的抑制率,并采用Westernblot和免疫组织... 目的:探讨姜黄素对786-O细胞在体内增殖的抑制效果及其可能机制。方法:将人肾癌细胞786-O接种裸鼠,成瘤后将裸鼠随机分为2组,干预组给予姜黄素干预治疗,对照组则采用PBS对照治疗。测定干预组肿瘤的抑制率,并采用Westernblot和免疫组织化学方法检测p-Erk1/2和p-Akt表达。结果:经过连续20d给药治疗,干预组裸鼠的瘤体平均质量为(1.03±0.17)g,对照组裸鼠的瘤体平均质量为(2.46±0.48)g,2组差异有统计学意义(P=0.02)。采用姜黄素干预后小鼠的肿瘤抑制率达58.13%。Westernblot及免疫组织化学染色结果均证实干预组裸鼠瘤内Erk1/2的磷酸化水平显著低于对照组(P<0.01),而2组Erk1/2、Akt及p-Akt表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:姜黄素具有较好的抑制肿瘤生长的效果,通过抑制Erk1/2的磷酸化,进而抑制人肾癌细胞786-O在裸鼠体内增殖。 展开更多
关键词 姜黄素 人肾癌细胞 ERK1/2 AKT 体内
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慢病毒介导的Clusterin基因沉默抑制肾癌786-O细胞增殖并促进细胞凋亡 被引量:1
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作者 石华 邓军洪 +4 位作者 郑少斌 王铸 曹开源 周亮 万华 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期603-609,共7页
【目的】应用慢病毒介导的RNA干扰技术,检测clusterin(CLU)基因沉默在人肾癌786-O细胞的干扰效果及其对人肾癌786-O细胞增殖、迁移和凋亡的影响。【方法】构建靶向CLU基因的慢病毒干扰载体,利用包装细胞293T获得重组慢病毒,感染人肾癌78... 【目的】应用慢病毒介导的RNA干扰技术,检测clusterin(CLU)基因沉默在人肾癌786-O细胞的干扰效果及其对人肾癌786-O细胞增殖、迁移和凋亡的影响。【方法】构建靶向CLU基因的慢病毒干扰载体,利用包装细胞293T获得重组慢病毒,感染人肾癌786-O细胞株。实验分5组:CLU-RNAi-LV1(KD1)、CLU-RNAi-LV2(KD2)、CLU-RNAi-LV3(KD3)为加入靶向CLU基因的慢病毒感染的肾癌细胞组,未处理的慢病毒感染的肾癌细胞组(NC组),肾癌786-O细胞为空白对照组(CON组)。应用Real time-PCR及Western blot检测不同组别干扰前后CLU mRNA及蛋白表达的变化。用细胞划痕实验、MST-1、流式细胞仪等方法检测CLU沉默后肾癌786-O细胞在增殖、迁移、凋亡等生物学行为的改变。【结果】成功构建CLU shRNA慢病毒载体clu-RNAi-LV并获得相应慢病毒。Real time-PCR显示不同感染复数CLU-RNAi-LV处理的KD1、KD2、KD3组CLU mRNA表达水平与对照组相比分别下调69.4%~96.5%和0。Western blot结果显示KD1、KD2、KD3组CLU蛋白表达水平与CON组相比分别下降35.24%、46.26%和58.91%,KD3能显著抑制786-O细胞中CLU基因的表达。划痕实验显示24 h时KD3(si-CLU)组细胞迁移相对距离(408.43±25.92)小于NC组(101.35±6.05)和CON组(68.13±6.64,P<0.05)。WST-1法检测转染后72 h KD3(si-CLU)组细胞生长速度较NC组及CON组明显下降(P<0.05),各组间差异(P<0.05),均有统计学意义。流式细胞仪检测KD3(si-CLU)组与NC组、CON组细胞凋亡率分别为(6.23±2.51)%、(1.05±0.30)%和(1.17±0.29)%,KD3(si-CLU)组与NC组、CON组相比凋亡率增加(P<0.05),差异有统计学意义。肾癌786-O细胞的增殖、迁移受到抑制,而凋亡率增加。【结论】筛选出能稳定干扰CLU基因表达的siRNA序列和肾癌786-O细胞株。CLU慢病毒干扰载体可有效沉默肾癌786-O细胞的内源性CLU基因,抑制肾癌786-O细胞的增殖、迁移并促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 RNA干扰 慢病毒 CLUSTERIN 肾细胞癌 786-O
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人肾透明细胞癌中细胞凋亡相关因子Caspase-3和Caspase-9的表达 被引量:3
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作者 梁良 张建勇 +4 位作者 董晓菊 孙万彬 张雷 赵春芳 孟宪涛 《河北医药》 CAS 2010年第11期1352-1353,共2页
目的研究人肾透明细胞癌组织中细胞凋亡相关重要因子Caspase-3、Caspase-9表达的变化与肾癌的关系。方法标本离体后分成肾透明细胞癌组、癌旁组织组、正常肾组织组,均用10%的甲醛溶液固定48h,常规石蜡包埋、切片5μm,应用免疫组织化学... 目的研究人肾透明细胞癌组织中细胞凋亡相关重要因子Caspase-3、Caspase-9表达的变化与肾癌的关系。方法标本离体后分成肾透明细胞癌组、癌旁组织组、正常肾组织组,均用10%的甲醛溶液固定48h,常规石蜡包埋、切片5μm,应用免疫组织化学方法进行观察研究。结果 Caspase-3与Caspase-9均在正常肾组织中可见少量弱阳性反应,癌旁组织阳性表达增加,肾癌组织表达明显减少,两两比较结果显示,3组之间差异均有统计学意义(P<0.01)。肾癌4个期之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。Caspase-3与Caspase-9蛋白表达呈正相关(r=0.988,P<0.05)。结论癌组织中Caspase-3和Caspase-9表达下降,说明细胞凋亡减少,癌组织细胞增殖旺盛,是肿瘤形成的重要机制。 展开更多
关键词 人肾透明细胞癌 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9 细胞凋亡
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CO_2气腹对人肾癌裸鼠原位移植瘤中HIF-1α、VEGF表达的影响 被引量:1
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作者 陈远卓 郑军华 +3 位作者 刘敏 张海民 王光春 许云飞 《同济大学学报(医学版)》 CAS 2012年第6期72-75,共4页
目的研究腹腔镜CO2气腹对人肾癌裸鼠原位移植瘤中肿瘤增值和转移相关基因和蛋白表达的影响,从而探讨CO2气腹腹腔镜手术治疗肾脏肿瘤的安全性。方法选用人肾透明细胞癌细胞株(786-0),构建BALB/c原位肾癌裸鼠模型40只,根据CO2气腹处理时... 目的研究腹腔镜CO2气腹对人肾癌裸鼠原位移植瘤中肿瘤增值和转移相关基因和蛋白表达的影响,从而探讨CO2气腹腹腔镜手术治疗肾脏肿瘤的安全性。方法选用人肾透明细胞癌细胞株(786-0),构建BALB/c原位肾癌裸鼠模型40只,根据CO2气腹处理时间不同随机分组:A组(处理0 h),B组(处理2 h),C组(处理4 h),D组(处理4 h后放回鼠笼24 h),后处死裸鼠采取肾癌标本后应用Western blotting和real time RT-PCR检测各组所取标本缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelialgrow th factor,VEGF)mRNA和蛋白的表达,行统计学分析。结果 B、C组HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白相对表达量较A组逐渐增加,B组与A组比无统计学差异(P>0.05),C组与A组比有统计学差异(P<0.01),D组HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白相对表达量较B、C组降低,与A组相比无统计学差异(P>0.05)。结论 CO2气腹处理原位肾癌裸鼠,可导致肿瘤细胞HIF-1α、VEGF表达增加,但在4 h内的变化可逆,提示CO2气腹腹腔镜手术治疗肾癌是安全的。 展开更多
关键词 腹腔镜 CO2气腹 肾肿瘤 缺氧诱导因子1Α 血管内皮生长因子
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人肾透明细胞癌组织中增殖细胞核抗原表达与肾癌的关系 被引量:2
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作者 张建勇 梁良 +4 位作者 董晓菊 孙万彬 张雷 赵春芳 孟宪涛 《河北医药》 CAS 2010年第12期1517-1518,共2页
目的通过检测人肾透明细胞癌组织中增殖细胞核抗原(PCNA)表达的变化,研究其表达与肾癌的关系。方法标本离体后分成肾透明细胞癌组、癌旁组织组、正常肾组织组,均用10%的甲醛固定48h,常规石蜡包埋、切片5μm,同时应用免疫组织化学方法进... 目的通过检测人肾透明细胞癌组织中增殖细胞核抗原(PCNA)表达的变化,研究其表达与肾癌的关系。方法标本离体后分成肾透明细胞癌组、癌旁组织组、正常肾组织组,均用10%的甲醛固定48h,常规石蜡包埋、切片5μm,同时应用免疫组织化学方法进行观察研究。结果 PCNA免疫组化染色:正常肾组织内的细胞核有弱阳性表达,癌旁阳性表达增加,高于正常肾组织,肾癌组织阳性表达明显增强,明显高于癌旁组织,两两比较差异均有统计学意义(P<0.01)。肾癌4个期之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PCNA在正常组、癌旁组、癌组织组的表达呈明显加强趋势,癌组织细胞增殖旺盛,是肿瘤形成的重要机制。 展开更多
关键词 人肾透明细胞癌 增殖细胞核抗原
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肾透明细胞癌发病机制中细胞凋亡的初步研究 被引量:1
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作者 张建勇 董晓菊 +2 位作者 张雷 孙万彬 赵春芳 《中国医药导刊》 2009年第8期1333-1333,1335,共2页
目的:研究肾透明细胞癌发病机制与组织细胞凋亡的关系。方法:将标本离体后分成三组,(1)肾透明细胞癌组(根据肿瘤分期再分四组);(2)癌旁组织组;(3)正常肾组织组。用TUNEL法对标本检测。结果:在肾癌组织、癌旁组织及正常肾组织组均有凋亡... 目的:研究肾透明细胞癌发病机制与组织细胞凋亡的关系。方法:将标本离体后分成三组,(1)肾透明细胞癌组(根据肿瘤分期再分四组);(2)癌旁组织组;(3)正常肾组织组。用TUNEL法对标本检测。结果:在肾癌组织、癌旁组织及正常肾组织组均有凋亡发生。正常肾组织组细胞核有弱的阳性表达,癌旁组织表达明显增多,肾癌组织阳性表达最少。结论:细胞凋亡减少是肾透明细胞癌发生的重要机制之一。 展开更多
关键词 肾透明细胞癌 细胞凋亡 脱氧核苷酸末端转移介导的缺口末端标记法(TUNEL)
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人肾透明细胞癌组织中细胞增殖与凋亡及凋亡相关因子的表达 被引量:1
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作者 张建勇 董晓菊 +2 位作者 张雷 孙万彬 赵春芳 《中国医药导刊》 2009年第1期96-98,共3页
目的:本课题旨在通过检测人肾透明细胞癌组织中细胞增殖(PCNA)与凋亡(TUNEL法)及凋亡相关因子Caspase-3、 Caspgse-9表达的变化,研究这些因子的表达与肾癌的关系。方法:标本离体后分成三组,(1)肾透明细胞癌组;(2)癌旁组织组;(3)正常肾... 目的:本课题旨在通过检测人肾透明细胞癌组织中细胞增殖(PCNA)与凋亡(TUNEL法)及凋亡相关因子Caspase-3、 Caspgse-9表达的变化,研究这些因子的表达与肾癌的关系。方法:标本离体后分成三组,(1)肾透明细胞癌组;(2)癌旁组织组;(3)正常肾组织组,应用HE染色法、TUNEL法及免疫组织化学方法进行观察研究。结果:(1)HE染色结果:肾透明细胞癌组织镜下可见肿瘤细胞体积较大,圆形或多边形,胞质染色浅,透明或颗粒状,核固缩,间质富有毛细血管和血窦。(2) TUNEL检测结果:在肾癌组织、癌旁组织及正常肾组织组均有凋亡发生。凋亡肾组织细胞表现为染色质凝集、边集,核固缩。正常肾组织组细胞核有弱的阳性表达,癌旁组织表达明显增多,肾癌组织阳性表达最少。(3) PCNA免疫组化染色结果:正常肾组织内的细胞核有弱的阳性表达,癌旁阳性表达增加,肾癌组织阳性表达明显增多。(4) Caspase-3、 Caspase-9免疫组化结果:Caspase-3 Caspase-9在正常肾组织中可见少量弱的阳性反应,癌旁组织阳性表达增加,肾癌组织表达明显减少。结论:癌旁细胞组织Caspase-3和Caspase-9的蛋白表达明显高于正常肾组织及癌组织,癌组织表达最少;而PCNA则相反,癌组织高于癌旁组织和正常肾组织,正常肾组织表达最少。癌组织中Caspase-3和Caspase-9表达下降,PCNA表达升高说明细胞凋亡减少,癌组织细胞增殖旺盛,是肿瘤形成的重要机制。Caspase-3、 Caspase-9、 PCNA于肾透明细胞癌的表达在肿瘤分期间无明显差异性。 展开更多
关键词 人肾透明细胞癌 Caspase-3 CASPASE-9 PCNA TUNEL
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hTERT在肾癌中的表达及临床意义 被引量:1
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作者 吴芃 郑少斌 +3 位作者 左翼 谭万龙 药晨 姜耀东 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期272-274,281,共4页
目的检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)在肾癌中的表达及其临床意义。方法采用RT-PCR及Western blot方法检测45例肾癌组织、45例配对的癌旁肾组织及786-0细胞系中hTERT mRNA及蛋白的表达情况,观察其表达与肿瘤大小、临床分期、病理组织分型... 目的检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)在肾癌中的表达及其临床意义。方法采用RT-PCR及Western blot方法检测45例肾癌组织、45例配对的癌旁肾组织及786-0细胞系中hTERT mRNA及蛋白的表达情况,观察其表达与肿瘤大小、临床分期、病理组织分型、分级之间的关系。结果hTERT mRNA及蛋白在肾癌组织中呈高表达(P=0.000),其表达与肾癌的肿瘤大小、临床分期、病理组织分型、分级之间无关(P>0.05)。结论肾癌组织中hTERT表达较高,可尝试用于肾癌的诊断和预测,并为基因治疗提供了思路。 展开更多
关键词 肾肿瘤 肾细胞癌 端粒酶逆转录酶
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Survivin基因及蛋白表达与人786-0肾透明细胞癌细胞增殖、凋亡的相关性研究 被引量:4
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作者 陆毅 姚晖 王曙 《标记免疫分析与临床》 CAS 2018年第8期1223-1226,1248,共5页
目的研究Survivin基因及蛋白表达与人786-0肾透明癌细胞增殖和凋亡的相关性。方法人肾癌细胞系786-0作为Survivin转染组,肾小管上皮细胞系HK-2作为阴性对照组,分别用Survivin模拟物转染;转染72 h后测定Survivin基因及蛋白表达;对比两组... 目的研究Survivin基因及蛋白表达与人786-0肾透明癌细胞增殖和凋亡的相关性。方法人肾癌细胞系786-0作为Survivin转染组,肾小管上皮细胞系HK-2作为阴性对照组,分别用Survivin模拟物转染;转染72 h后测定Survivin基因及蛋白表达;对比两组细胞吸光值、细胞数及凋亡细胞比值;对Survivin基因和蛋白表达水平与细胞吸光值、细胞数和凋亡细胞比值进行Pearson相关性分析。结果转染后,Survivin转染组Survivin mRNA、Survivin蛋白表达水平显著高于阴性对照组(P<0.05);吸光值从第1 d开始显著低于阴性对照组(P<0.05);细胞数从第2d开始显著少于阴性对照组(P<0.05)。786-0细胞的凋亡比例从第1d开始显著低于阴性对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,Survivin基因和蛋白表达水平与吸光值和细胞数呈负相关,与凋亡细胞比值呈正相关。结论 Survivin基因和蛋白表达可以抑制786-0肾透明癌细胞增殖,促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 SURVIVIN基因 SURVIVIN蛋白 人786-0肾透明细胞癌 增殖 凋亡
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