呼吸道合胞病毒A与B亚型多重荧光PCR检测方法的建立及应用

目的建立一种新的呼吸道合胞病毒(RSV)分型检测方法,用于快速检测和监测。方法针对RSV G基因设计引物、探针,并引入人β-actin基因(ACTB)作为内参质控,建立RSV-A、RSV-B多重荧光PCR检测方法。使用多种常用呼吸道病原体及体外转录RNA产物考核其特异性和灵敏度。并对2015年1月至12月广州两家医院的儿童急性呼吸道感染患者进行检测。结果所建立的多重检测方法未见非特异性反应。RSV-A、RSV-B和ACTB分别可检测低至4、8和12 copies/μL的RNA模板,且分别在10~1×10^(10)copies/μL、100~1×10^(10)copies/μL和100~1×10^(10)copies/μL时具备良好的线性关系,线性相关系数r2均大于0.99。儿童急性呼吸道感染患者监测中,RSV-A为期间优势亚型。结论本研究所建立的RSV-A、RSV-B多重荧光PCR检测方法,具有较好的特异性、灵敏度、可操作性,可用于相关研究。

宁夏一株人呼吸道合胞病毒B亚型全基因组基因特征分析

目的了解2020年宁夏地区人群常见呼吸道病毒感染分布情况,对一株人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)宁夏株进行全基因组测序,对其进行基因型别鉴定及基因进化分析。方法选取2020年宁夏新冠肺炎疫情期间具有呼吸道感染症状的480人作为研究对象,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real time reverse transcription polymerase chain reaction,real time RT-PCR)方法对甲型流感病毒(FluA)、乙型流感病毒(FluB)、呼吸道合胞病毒(RSV)、副流感病毒(PIV)Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、呼吸道腺病毒(RAdV)、人偏肺病毒(HMPV)等8种呼吸道病原进行检测。对筛选出的HRSV进行全基因组测序,测序结果经分子生物学软件拼接,与GenBank中相关代表株序列进行分子进化分析。结果检出呼吸道病毒51例,阳性率为10.6%,RSV检出率最高(4.0%)(19/480)。宁夏首株China/ningxia/2020-02的全基因组序列为15259 bp核苷酸,与RSV-A亚型原型株Long株的核苷酸同源性最低为80.9%,与RSV-B亚型原型株9320株的核苷酸同源性为96.0%,提示了宁夏首株HRSV为B亚型。G基因遗传进化树表明,该毒株与BA9基因型代表株聚集在同一分支上,划分为BA9基因型。结论新型冠状病毒肺炎流行期间,应加强呼吸道病毒的监测,对人呼吸道合胞病毒的全基因组测序研究,有必要连续监测本地区RSV亚型流行趋势,为预防和控制RSV感染提供指导,为筛选疫苗株提供参考。

沈阳市某医院收治的23490例疑似呼吸道感染患者外周血常见呼吸道病毒IgM抗体检测结果分析

目的探讨2017年—2020年各年度沈阳地区呼吸道病毒的流行特征,为临床诊疗提供依据。方法选择2017年—2020年在中国医科大学附属第四医院就诊的疑似呼吸道感染患者23490例,采集患者外周血,采用EILSA法检测血清A型流感病毒(AIV)、B型流感病毒(BIV)、副型流感病毒(PIV)、腺病毒(ADV)、柯萨奇病毒(COX)、人类巨细胞病毒(HCMV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、EB病毒壳抗原(VCA)IgM抗体。收集患者临床资料,分析呼吸道病毒的流行病学特征。结果2017年—2020年间23490例患者中检出呼吸道病毒IgM抗体阳性5750例(24.49%,5750/23490)。PIV、COX、RSV、BIV、ADV、VCA、HCMV、AIV IgM抗体阳性率分别为7.26%(1706/23490)、4.01%(942/23490)、3.90%(916/23490)、3.52%(826/23490)、2.93%(688/23490)、1.76%(413/23490)、1.03%(241/23490)、0%(18/23490)。2017、2018、2019、2020年患者呼吸道病毒IgM抗体阳性率分别为24.16%(1495/6189)、29.09%(1909/6563)、22.98%(1663/7238)及19.51%(683/3500),两两比较,P均<0.05;不同年份间患者呼吸道病毒IgM抗体(AIV除外)阳性率比较,P均<0.05。男、女患者呼吸道病毒IgM抗体阳性率分别为24.14%(3035/12570)、25.3%(2763/10920),二者比较,P<0.05;但是单病毒IgM抗体阳性率比较,差异无统计学意义。0~≤3岁、4~≤6岁、6~≤18岁、19~≤65岁及65~≤105岁患者呼吸道病毒IgM抗体阳性率分别为16.36%(552/3375)、17.28%(345/1997)、18.08%(234/1296)、25.74%(2370/9209)、29.53%(2248/7613)。成年(年龄≥18岁)患者比未成年(年龄<18岁)患者呼吸道病毒IgM抗体阳性率高(P均<0.05)。且不同年龄层的易感病毒存在差异。春、夏、秋、冬季患者呼吸道病毒IgM抗体阳性率分别为25.78%(1448/5617)、26.2%(1335/5096)、22.4%(1289/5821)、24.2%(1676/6926);不同季节患者BIV、PIV、HCMV、RSVIgM抗体阳性率存在差异,P均<0.05。结论2017年—2020年沈阳地区门诊/住院患者呼吸道病毒感染的阳性率仍较高。沈阳地区门诊/住院患者的呼吸道病毒感染以PIV、COX、RSV、BIV、ADV感染为主。呼吸道病毒种类分布在呼吸道感染患者中不受性别影响,与年龄、季节、年份相关。2018年门诊/住院患者呼吸道病毒感染以RSV病毒感染为主,2019、2020年以EB病毒感染为主。成年患者呼吸道病毒感染比例较高。PIV感染主要集中在冬季,夏季较少发生;BIV感染秋季最低;HCMV感染春、秋季较少发生;RSV感染主要发生在春、夏。

2004～2005年冬春季急性下呼吸道感染患儿RSV亚型的检测及分析

目的分析2004～2005年冬春季呼吸道合胞病毒(RSV)流行季节的亚型分布情况。方法采用直接免疫荧光法检测2004年10月～2005年4月间因急性下呼吸道感染住院儿童1040例鼻咽部分泌物中的常见病毒病原,随机选择RSV阳性标本174例,采用间接免疫荧光检测RSVA、B亚型,分析检测结果。结果1040例中,RSV阳性497例(47.8%),其中174例标本中,检测出RSVA亚型23例(13.2%),B亚型105型(60.4%),A、B亚型混合感染36例(20.7%),无法确定亚型的10例(5.7%)。检测期间各月份间、不同的年龄组间和临床诊断间的RSV亚型分布差异均无显著性意义(P>0.05),都以B亚型为主。结论2004～2005年冬春季RSV仍是儿童急性下呼吸道感染的主要病原,以B亚型为主;并有两种亚型同时感染的情况。

12274例有上呼吸道感染症状的老年患者常见呼吸道病毒IgM抗体检测结果分析

目的分析12274例有上呼吸道感染症状的老年(年龄≥60岁)患者常见呼吸道病毒感染情况。方法2017年1月1日—2021年12月31日间中国医科大学附属第四医院收治的12274例有上呼吸道感染的老年患者,采集外周血3 mL,采用ELISA法检测血清A型流感病毒(AIV)、B型流感病毒(BIV)、副型流感病毒(PIV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、人类巨细胞病毒(HCMV)、腺病毒(ADV)和柯萨奇病毒(COX)及EB病毒,分析呼吸道病毒的流行病学特征。结果12274例样本的呼吸道病毒IgM抗体阳性率27.24%,其中PIV、BIV、VCA、ADV、COX、HCMV、RSV、AIV IgM抗体阳性率分别为5.05%、1.11%、3.32%、3.86%、1.18%、4.81%、0.13%。与男性比较,女性老年患者血清HCMV IgM抗体阳性率高(χ^(2)为5.51,P<0.05)。与其余各年比较,2021年老年患者血清BIV IgM抗体阳性率低(P均<0.05)。与其他季节比较,老年患者春季PIV IgM抗体阳性率高,夏季RSVIgM抗体阳性率高(χ^(2)分别为7.92、126.7,P均<0.05)。结论有上呼吸道感染症状的老年患者呼吸道病毒感染以PIV、BIV、ADV、COX、RSV感染为主。老年患者呼吸道病毒感染与性别、年龄、季节及年份密切相关,随年龄增长,老年患者呼吸道PIV、RSV感染比例升高,女性老年患者更易感染呼吸道病毒,老年患者呼吸道病毒感染集中在春季和夏季,2021年老年患者呼吸道病毒感染主要为BIV感染。

2008～2014年中国6省市流行的人呼吸道合胞病毒B亚型G蛋白编码基因特征分析

人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)是引起婴幼儿下呼吸道感染的主要病原体之一。HRSV粘附蛋白(Attachment glycoprotein,G)是病毒膜表面糖蛋白,介导保护性免疫,是抗HRSV抗体和疫苗等的研究热点之一。为研究2008～2014年中国HRSV B亚型G蛋白编码基因的基因特征,于2008～2014年收集的363份HRSV阳性临床标本或病毒株中挑选89份代表株进行G蛋白编码基因全长核苷酸序列的扩增和测序,使用Sequencher 5.0进行序列的编辑,使用MEGA 5.0进行序列比对和亲缘关系进化树构建以及氨基酸变异分析。89份代表株分别挑选自中国北京、吉林、广东、河北、湖南、陕西6省市发热呼吸道感染患者鼻咽拭子或病毒分离株,基因型包括BA9、BA10、BAc、BA、CB1及SAB4,覆盖我国近年流行的优势基因型。亲缘关系分析显示,89株代表株可以分为6个分支,同一基因型G蛋白编码基因核苷酸序列荟聚为一个分支;89份代表株之间的核苷酸(氨基酸)遗传距离为0.03(0.04),与原型株CH-18537株的核苷酸(氨基酸)遗传距离为0.08～0.10(0.14～0.18),其中B5分支与原型株的核苷酸(氨基酸)遗传距离最远为0.10(0.18);氨基酸变异主要在第二高变区,其次为第一高变区。在中心保守区(aa164～176)以及CX3C模序区,89条HRSV B亚型G蛋白编码基因氨基酸序列与原型株CH-18537株一致。本研究表明2008～2014年中国HRSV B亚型G蛋白编码基因变异较多,但在中心保守区和CX3C模序区保守,本研究为我国HRSV的病毒学研究提供了基础科学数据。

重组人干扰素α1b雾化吸入治疗婴幼儿呼吸道合胞病毒肺炎的临床研究

目的 探讨重组人干扰素α1b雾化吸入治疗婴幼儿呼吸道合胞病毒肺炎的临床疗效.方法 将86例呼吸道合胞病毒肺炎患儿作为研究对象,随机分为对照组和观察组,各43例.对照组：给予常规综合治疗;观察组：在对照组治疗方式基础上,加用重组人干扰素α1b雾化吸入治疗.结果 观察组总有效率为95.35％,对照组总有效率69.77％,两组差异具有统计学意义（P＜0.05）.治疗后,观察组呼吸道合胞病毒肺炎患儿CD3＋水平、CD4＋水平、CD4＋/CD8＋比值和INF水平都高于对照组,且观察组呼吸道合胞病毒肺炎患儿CD8＋水平和IgE水平都低于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.01）.观察组患者喘憋缓解的时间（2.47±1.26）d、呼吸率和心率恢复正常的时间（2.43±1.17）d、哮鸣音消失的时间（3.64 ±0.83）d、肺部体征消失的时间（5.46±1.62）d、咳嗽消失的时间（5.56±1.41）d都短于对照组患者喘憋缓解的时间（3.67 ±1.31）d、呼吸率和心率恢复正常的时间（3.58±1.23）d、哮鸣音消失的时间（4.52 ±0.67）d、肺部体征消失的时间（8.54±2.27）d、咳嗽消失的时间（8.90±1.39）d,差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论 重组人干扰素α1b雾化吸入治疗婴幼儿呼吸道合胞病毒肺炎疗效确切,可有效改善患儿的免疫功能,防止病毒感染扩散,促进临床症状及体征恢复,缩短病程.

一株B亚型人呼吸道合胞病毒兰州分离株的全基因序列测定及其分子特征分析

人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)是每年引起婴幼儿和老年人下呼吸道感染的主要病毒性病原,在全球造成了高疾病负担,明确RSV流行毒株的遗传背景是其流行病学研究和预防控制的基础。为了解HRSV兰州分离株RSV B/LZ11/12的全基因组序列、分子结构特征及遗传变异情况,本研究对其全基因组进行扩增克隆和测序后,与GenBank中相关的参考毒株序列构建系统发生树并进行遗传进化及相似性分析。针对其主要蛋白F、G和SH的氨基酸进行了比对和差异分析,并对F蛋白的N-糖基化位点进行分析。结果表明B/LZ11/12与B亚型RSV的核苷酸同源性高达99%以上,其基因组全长15 275bp,具有RSV的所有结构特征。遗传进化分析显示,B/LZ11/12与B/GZ/13-730、B/England138/2016和SC2225同属于一个分支,提示亲缘关系最近。G基因遗传进化树表明该毒株属于RSV B亚型BA9基因型。主要氨基酸位点分析显示该毒株的G基因和F基因均具有一个特有的变化,即Glu87Gly和Val243Ala的氨基酸替换。F蛋白N-糖基化位点分析显示该毒株具有RSV F蛋白的5个共有修饰位点,即27~30(NITE)、70~73(NGTD)、116~119(NYTI)、120~123(NTTK)和126~129(NVSI)。相似性分析表明整个基因组最易变异的区域在SH和G基因,其次是NS1、NS2和L基因的3′端。本研究首次获得了RSV B/LZ11/12兰州分离株全基因组序列,并阐明了其基因组分子结构特征,该结果对RSV病毒的基因及氨基酸数据库进行了数据补充,也为我国RSV流行病学数据进行了补充。