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蛋白hSav1和Mst1之间的相互作用
被引量:
3
1
作者
罗学来
李兆明
+4 位作者
严群
李小兰
陶德定
龚建平
胡俊波
《华中科技大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第6期761-763,841,共4页
目的探讨hSav1(human salvador1)和Mst1(Mammalian STE20-like 1)存在的相互作用,为进一步研究Mst1的功能及相关机制奠定基础。方法以Mst1cDNA全长构建诱饵蛋白载体pGBKT7-Mst1,并对其自身转录活性进行鉴定,利用酵母双杂交系统筛选人胎...
目的探讨hSav1(human salvador1)和Mst1(Mammalian STE20-like 1)存在的相互作用,为进一步研究Mst1的功能及相关机制奠定基础。方法以Mst1cDNA全长构建诱饵蛋白载体pGBKT7-Mst1,并对其自身转录活性进行鉴定,利用酵母双杂交系统筛选人胎肝文库,挑选单克隆,从而初步筛选出与Mst1相互作用的蛋白。然后构建初步筛选出的蛋白hSav1的载体pCMV-HA-hSav1,与蛋白Mst1的载体pcDNA/4TO-Flag-Mst1共转染HEK293T细胞,利用相应抗体做二者的免疫共沉淀,以验证蛋白hSav1和Mst1之间的相互作用。其次构建pEGFP-hSav1质粒转染HEK293T,利用免疫荧光观察二者在细胞内的定位。结果以Mst1为诱饵蛋白在人胎肝文库筛选到包括hSav1在内的与之存在相互作用的蛋白。免疫共沉淀结果显示,hSav1蛋白可以在FLAG抗体的免疫沉淀物中检测出来,同样在hSav1抗体的免疫沉淀物中也能检测到蛋白Mst1。免疫荧光的结果显示二者荧光在细胞内存在共定位,二者的荧光可充分融合。结论蛋白hSav1与Mst1在哺乳细胞内存在某种相互作用,为进一步研究Mst1的功能及相关机制提供了线索。
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关键词
hSav
1
Mst
1
蛋白相互作用
下载PDF
职称材料
hSav1蛋白高表达对Mst1介导的细胞凋亡的影响
2
作者
李兆明
刘韦成
+5 位作者
董硕
罗学来
李小兰
陶德定
龚建平
胡俊波
《中华肿瘤杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第7期481-484,共4页
目的观察hSav1蛋白高表达对Mst1介导的细胞凋亡的影响,探讨hSav1在Mst1介导的细胞凋亡中的作用。方法构建蛋白hSav1的载体pCMV—HA—hSav1与蛋白Mst1的载体pcDNA/4TO—Flag-Mst1,共转染HeLa细胞。采用相应抗体做二者的免疫共沉淀,...
目的观察hSav1蛋白高表达对Mst1介导的细胞凋亡的影响,探讨hSav1在Mst1介导的细胞凋亡中的作用。方法构建蛋白hSav1的载体pCMV—HA—hSav1与蛋白Mst1的载体pcDNA/4TO—Flag-Mst1,共转染HeLa细胞。采用相应抗体做二者的免疫共沉淀,以证实蛋白hSav1和Mst1之间的相互作用;应用细胞免疫荧光共定位,进一步证实二者之间的相互作用。在HeLa细胞中,分别单独或同时转染质粒pcDNA/4TO-Flag—Mst1和pCMV—HA—hSav1,转染36h后,加入凋亡诱导剂顺铂(50μmol/L)作用14h。应用磷脂结合蛋白碘化丙啶(Annexin V/PI)法检测细胞凋亡,观察蛋白hSav1高表达对Mst1介导的细胞凋亡的影响。结果载体pCMV-HA—hSav1与pcDNA/4TO—Flag-Mst1构建成功,测序结果表明无突变或缺失。免疫共沉淀结果显示,蛋白hSav1可以在Mst1抗体的免疫沉淀物中检测出来,蛋白Mst1可以在hSav1抗体的免疫沉淀物中检测出来。细胞免疫荧光的结果显示,二者的荧光在细胞内存在共定位,并可充分融合。HeLa细胞中,单独Mst1蛋白高表达组的细胞凋亡率为24.5%±2.4%,单独hSav1蛋白高表达组与对照组比较,无明显细胞凋亡。蛋白Mst1和hSav1高表达组的细胞凋亡率为39.3%±4.0%,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论蛋白hSav1与Mst1在HeLa细胞内存在相互作用,蛋白hSav1高表达可明显促进由蛋白Mst1介导的细胞凋亡。
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关键词
hSav
1
Mst
1
蛋白相互作用
细胞凋亡
HELA细胞
原文传递
题名
蛋白hSav1和Mst1之间的相互作用
被引量:
3
1
作者
罗学来
李兆明
严群
李小兰
陶德定
龚建平
胡俊波
机构
华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤研究所/胃肠外科
出处
《华中科技大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第6期761-763,841,共4页
基金
新世纪优秀人才计划资助项目(No.NCET-04-0699)
国家自然科学基金资助项目(No.30872472
No.30800569)
文摘
目的探讨hSav1(human salvador1)和Mst1(Mammalian STE20-like 1)存在的相互作用,为进一步研究Mst1的功能及相关机制奠定基础。方法以Mst1cDNA全长构建诱饵蛋白载体pGBKT7-Mst1,并对其自身转录活性进行鉴定,利用酵母双杂交系统筛选人胎肝文库,挑选单克隆,从而初步筛选出与Mst1相互作用的蛋白。然后构建初步筛选出的蛋白hSav1的载体pCMV-HA-hSav1,与蛋白Mst1的载体pcDNA/4TO-Flag-Mst1共转染HEK293T细胞,利用相应抗体做二者的免疫共沉淀,以验证蛋白hSav1和Mst1之间的相互作用。其次构建pEGFP-hSav1质粒转染HEK293T,利用免疫荧光观察二者在细胞内的定位。结果以Mst1为诱饵蛋白在人胎肝文库筛选到包括hSav1在内的与之存在相互作用的蛋白。免疫共沉淀结果显示,hSav1蛋白可以在FLAG抗体的免疫沉淀物中检测出来,同样在hSav1抗体的免疫沉淀物中也能检测到蛋白Mst1。免疫荧光的结果显示二者荧光在细胞内存在共定位,二者的荧光可充分融合。结论蛋白hSav1与Mst1在哺乳细胞内存在某种相互作用,为进一步研究Mst1的功能及相关机制提供了线索。
关键词
hSav
1
Mst
1
蛋白相互作用
Keywords
human salvador 1
Mammalian STE20-like
1
protein interactions
分类号
R349.6 [医药卫生—基础医学]
下载PDF
职称材料
题名
hSav1蛋白高表达对Mst1介导的细胞凋亡的影响
2
作者
李兆明
刘韦成
董硕
罗学来
李小兰
陶德定
龚建平
胡俊波
机构
华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤研究所
出处
《中华肿瘤杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第7期481-484,共4页
基金
教育部新世纪优秀人才支持计划(NCET-04-0699)
国家自然科学基金(30872472
30800569)
文摘
目的观察hSav1蛋白高表达对Mst1介导的细胞凋亡的影响,探讨hSav1在Mst1介导的细胞凋亡中的作用。方法构建蛋白hSav1的载体pCMV—HA—hSav1与蛋白Mst1的载体pcDNA/4TO—Flag-Mst1,共转染HeLa细胞。采用相应抗体做二者的免疫共沉淀,以证实蛋白hSav1和Mst1之间的相互作用;应用细胞免疫荧光共定位,进一步证实二者之间的相互作用。在HeLa细胞中,分别单独或同时转染质粒pcDNA/4TO-Flag—Mst1和pCMV—HA—hSav1,转染36h后,加入凋亡诱导剂顺铂(50μmol/L)作用14h。应用磷脂结合蛋白碘化丙啶(Annexin V/PI)法检测细胞凋亡,观察蛋白hSav1高表达对Mst1介导的细胞凋亡的影响。结果载体pCMV-HA—hSav1与pcDNA/4TO—Flag-Mst1构建成功,测序结果表明无突变或缺失。免疫共沉淀结果显示,蛋白hSav1可以在Mst1抗体的免疫沉淀物中检测出来,蛋白Mst1可以在hSav1抗体的免疫沉淀物中检测出来。细胞免疫荧光的结果显示,二者的荧光在细胞内存在共定位,并可充分融合。HeLa细胞中,单独Mst1蛋白高表达组的细胞凋亡率为24.5%±2.4%,单独hSav1蛋白高表达组与对照组比较,无明显细胞凋亡。蛋白Mst1和hSav1高表达组的细胞凋亡率为39.3%±4.0%,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论蛋白hSav1与Mst1在HeLa细胞内存在相互作用,蛋白hSav1高表达可明显促进由蛋白Mst1介导的细胞凋亡。
关键词
hSav
1
Mst
1
蛋白相互作用
细胞凋亡
HELA细胞
Keywords
human salvador 1
Mammalian sterile 20-like kinase
1
Protein interactions
Apoptosis
HeLa cells
分类号
R686 [医药卫生—骨科学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
蛋白hSav1和Mst1之间的相互作用
罗学来
李兆明
严群
李小兰
陶德定
龚建平
胡俊波
《华中科技大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2008
3
下载PDF
职称材料
2
hSav1蛋白高表达对Mst1介导的细胞凋亡的影响
李兆明
刘韦成
董硕
罗学来
李小兰
陶德定
龚建平
胡俊波
《中华肿瘤杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009
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