GⅠ.1型人札如病毒的体外培养及其衣壳蛋白VP1多克隆抗体的制备

目的体外培养GⅠ.1型人札如病毒(human sapovirus,HuSaV),并制备其衣壳蛋白VP1多克隆抗体。方法将中国疾病预防中心病毒病预防控制所腹泻室保存的GⅠ.1型HuSaV阳性粪便标本接种至添加不同胆酸盐[甘氨鹅脱氧胆酸(GCDCA)、甘氨胆酸(GCA)]的人十二指肠腺癌细胞(HuTu-80)中,利用PCR和RT-qPCR法确定病毒感染、增殖及传代情况。PCR扩增VP1基因,克隆入原核表达载体pGEX-6P-1,构建重组表达质粒pGEX-6P-1-VP1,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组VP1蛋白纯化后免疫2只雌性新西兰大耳白兔,共免疫4次,免疫后18、28、38和48 d采血,ELISA法检测血清效价。结果GⅠ.1型HuSaV在胆酸盐GCA存在下可有效感染HuTu-80细胞,增殖后的病毒在HuTu-80细胞中能够稳定连续传3代。表达的重组GST-VP1蛋白相对分子质量约86000,纯化后约60000(切除GST标签)。制备的抗HuSaV VP1蛋白多克隆抗体效价可达1∶12800以上。结论利用HuTu-80细胞添加胆酸盐成功实现了HuSaV的体外分离培养,并制备了HuSaV VP1蛋白高效价多克隆抗体,为深入开展HuSaV的鉴定、感染及致病机制等奠定了基础。