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Distribution of bone morphogenetic protein receptors in human scleral fibroblasts cultured in vitro and human sclera 被引量:3
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作者 Zhen-Ya Gao Li-Jun Huo +3 位作者 Dong-Mei Cui Xiao Yang Wen-Juan Wan Jun-WenZeng 《International Journal of Ophthalmology(English edition)》 SCIE CAS 2012年第6期661-666,共6页
AIM: To investigate the distribution of bone morphogenetic protein receptors (BMPRs) in human scleral fibroblsasts (HSFs) and in human sclera. METHODS: Primary HSFs were cultured in vitro. The mRNA levels of BMP-2 and... AIM: To investigate the distribution of bone morphogenetic protein receptors (BMPRs) in human scleral fibroblsasts (HSFs) and in human sclera. METHODS: Primary HSFs were cultured in vitro. The mRNA levels of BMP-2 and BMPRs in HSFs were assayed by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). The protein distributions of BMP-2 and BMPRs in HSFs were further detected by immunocytofluorescence and western blot. Their protein expression was also detected in frozen human posterior scleral sections by immunohistofluorescence. RESULTS: BMP-2 and BMPRs were expressed in both HSFs and human sclera not only at mRNA level but also at protein level. The expressions of BMPRIA and BMPRII were higher than that of BMPRIB in the cytoplasm and cell membrane of HSFs in vitra Western blot further verified the results of immunocytofluorescence. In human sclera, BMP2, BMPR IB and BMPR II were found to be expressed in the cytomatrix of HSF, and weak signal was detected about BMPRIA. CONCLUSION: BMP-2 and all three subtypes of BMPRs were found in HSFs and may play a role in scleral remodeling. 展开更多
关键词 human scleral fibroblasts BMP-2 BMPRs
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人巩膜成纤维细胞中miR-184表达与近视发生、发展的关系及其对PI3K-Akt信号通路的调控作用
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作者 张悦之 邓燕 +2 位作者 殷小龙 熊伟伟 于春红 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2023年第6期444-448,共5页
目的探讨人巩膜成纤维细胞中miR-184表达与近视发生、发展的关系及其对磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路的调控作用。方法利用形觉剥夺法建立豚鼠左眼(实验眼)近视模型,右眼为对照眼,采用实时定量PCR法检测豚鼠实验眼巩膜... 目的探讨人巩膜成纤维细胞中miR-184表达与近视发生、发展的关系及其对磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路的调控作用。方法利用形觉剥夺法建立豚鼠左眼(实验眼)近视模型,右眼为对照眼,采用实时定量PCR法检测豚鼠实验眼巩膜组织中miR-184以及PI3K-Akt信号通路相关mRNA的表达水平,采用Pearson相关分析豚鼠实验眼巩膜组织中miR-184与PI3K、Akt、雷帕霉素机械靶蛋白(mTOR)mRNA表达水平的相关性。体外培养人巩膜成纤维细胞,并分为对照组(mimics对照组)、高表达组(转染miR-184 mimic)、低表达组(转染anti-miR-184)和PI-103组(加入PI3K通路抑制剂PI-103)。采用Western blot检测各组人巩膜成纤维细胞中PI3K-Akt信号通路相关蛋白表达水平,流式细胞检测技术检测细胞增殖,Annexin V-FITC染色观察细胞凋亡。结果豚鼠实验眼巩膜组织中miR-184与PI3K、Akt、mTOR mRNA表达水平均明显低于对照眼(均为P<0.05),且实验眼巩膜组织中miR-184与PI3K、Akt、mTOR mRNA表达水平均呈正相关性(均为P<0.05)。体外实验中,培养24 h、48 h、72 h、96 h时,高表达组人巩膜成纤维细胞增殖倍数>对照组>低表达组>PI-103组;培养24 h时,4组人巩膜成纤维细胞增殖倍数比较差异无统计学意义(P>0.05);培养48 h、72 h、96 h时,4组人巩膜成纤维细胞增殖倍数整体比较以及组间两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。培养24 h时,4组人巩膜成纤维细胞凋亡率差异有统计学意义(P<0.05),PI-103组>低表达组>对照组>高表达组,组间两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。培养72 h时,4组人巩膜成纤维细胞中PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平差异均有统计学意义(均为P<0.05),高表达组人巩膜成纤维细胞中PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平>对照组>低表达组>PI-103组,组间两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论近视眼的发生、发展与巩膜组织中miR-184表达下调有关,其作用机制可能为miR-184表达下调导致PI3K-Akt信号通路调控受阻,进而抑制巩膜成纤维细胞增殖以及促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 近视 巩膜组织 人巩膜成纤维细胞 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B 细胞凋亡
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极低频电磁场作用下人胚胎眼巩膜成纤维细胞的分子病理改变 被引量:6
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作者 王洁 崔杰锋 +3 位作者 朱煌 赵立全 冯婕妤 叶胜龙 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期403-407,共5页
背景极低频电磁辐射产生的热效应与人类癌症的关系及其对眼表的影响已有较多研究。但眼球暴露于极低频电磁场(ELF.EMFs)下是否会导致巩膜的病理改变,从而影响近视的发生、发展目前鲜见报道。目的研究ELF—EMFs作用下人胚胎眼巩膜成... 背景极低频电磁辐射产生的热效应与人类癌症的关系及其对眼表的影响已有较多研究。但眼球暴露于极低频电磁场(ELF.EMFs)下是否会导致巩膜的病理改变,从而影响近视的发生、发展目前鲜见报道。目的研究ELF—EMFs作用下人胚胎眼巩膜成纤维细胞(HFSFs)的分子病理改变及其在近视发生发展中的可能机制。方法对HFSFs进行体外培养和传代,根据细胞是否暴露于50Hz电磁场分为暴露组和对照组,应用实时定量聚合酶链反应(real—timePCR)法检测不同磁场强度(0、0.1、0.2、0.5、1.0mT)、不同暴露时间(0、6、12、24、36、48h)下HFSFs中I型胶原蛋白(COL1A1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)的基因表达水平变化,同时应用CCK18法检测两组HFSFs的细胞增生情况,并以细胞免疫荧光法对HFSFs中COL1A1和MMP-2蛋白的表达进行确认。结果与对照组相比,暴露组在磁场强度0.2mT下作用6h可见HFSFs中COL1A1mRNA的表达下调,差异有统计学意义(对照组:0.099±0.008,暴露组:0.050±0.004;P=0.009),且表达量随着磁场强度的增加而减少;在磁场强度O.1mT下暴露24h,HFSFs细胞中的MMP-2mRNA表达上调,差异有统计学意义(对照组:0.009+0.001,暴露组:0.018±0.003;P=0.038),并随着暴露时间的延长表达增强。磁场强度0.2mT下暴露24h,HFSFs细胞增生的吸光度(A450)值明显下降,差异有统计学意义(P=0.009);免疫荧光分析也显示暴露组HFSFs细胞中COL1A1表达下调,MMP-2表达上调。结论ELF—EMFs暴露可在一定范围内影响体外培养的HFSFs的增生及COL1A1的合成,可能是诱导巩膜发生病理性重塑进而导致近视发生、发展的危险因素之一。 展开更多
关键词 极低频电磁场 人胚胎眼巩膜成纤维细胞 近视 I型胶原蛋白 基质金属蛋白酶2
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胶原相关整合素对人巩膜成纤维细胞增殖和胶原合成的影响 被引量:2
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作者 胡守龙 崔冬梅 +2 位作者 于刚 吴倩 曾骏文 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2013年第6期501-504,共4页
目的观察胶原相关整合素对人巩膜成纤维细胞增殖和胶原合成的影响。方法首先进行人巩膜成纤维细胞原代培养与鉴定,RT-PCR检测胶原相关整合素α1、α2、β1亚单位mRNA表达,Western blot法检测胶原相关整合素α1、α2、β1亚单位蛋白表达,... 目的观察胶原相关整合素对人巩膜成纤维细胞增殖和胶原合成的影响。方法首先进行人巩膜成纤维细胞原代培养与鉴定,RT-PCR检测胶原相关整合素α1、α2、β1亚单位mRNA表达,Western blot法检测胶原相关整合素α1、α2、β1亚单位蛋白表达,CCK-8检测胶原相关整合素α1β1和α2β1对人巩膜成纤维细胞增殖的影响,实时荧光定量PCR检测胶原相关整合素α1β1和α2β1对人巩膜成纤维细胞Ⅰ型胶原mRNA表达水平的影响。结果成功进行了人巩膜成纤维细胞的原代培养。人巩膜成纤维细胞存在胶原相关整合素α1、α2、β1亚单位mRNA及蛋白水平的表达。胶原相关整合素α1β11mg·L-1和4mg·L-1抗体组细胞存活率分别为(86.3±4.5)%和(74.3±6.8)%,与对照组的100%相比,细胞存活率均显著下降,差异均有统计学意义(均为P<0.05),且呈浓度依赖性的抑制作用。胶原相关整合素α2β1抗体在1mg·L-1时有抑制作用,细胞存活率为(89.3±12.1)%,但与对照组的100%相比差异无统计学意义(P>0.05),4mg·L-1抗体组细胞存活率下降为(74.5±6.6)%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。胶原相关整合素α1β1(4mg·L-1)抗体组Ⅰ型胶原mRNA表达明显减低,是对照组的0.48倍(P<0.05)。胶原相关整合素α2β1抗体1mg·L-1组和4mg·L-1组Ⅰ型胶原mRNA表达分别是对照组的0.94倍和0.87倍,与对照组相比差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论人巩膜成纤维细胞存在胶原相关整合素α1、α2、β1亚单位的表达。胶原相关整合素α1β1和α2β1影响人巩膜成纤维细胞的增殖。胶原相关整合素α1β1参与人巩膜成纤维细胞胶原的合成。 展开更多
关键词 近视眼 人巩膜成纤维细胞 胶原相关整合素 增殖 胶原合成
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MMPs激动剂和抑制剂对人巩膜成纤维细胞MMP-1/2以及Ⅰ型胶原表达的作用研究 被引量:9
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作者 邹蕾蕾 刘睿 +3 位作者 刘红 黄莉雯 周行涛 周浩 《中国眼耳鼻喉科杂志》 2013年第2期91-95,共5页
目的研究基质金属蛋白酶(MMPs)家族MMP-1、MMP-2激动剂和抑制剂对人巩膜Ⅰ型胶原表达的作用,探讨MMP-1和MMP-2在人巩膜胶原代谢中的作用。方法应用人巩膜成纤维细胞系作为研究模型,用荧光定量检测MMPs激动剂醋酸氨基苯汞(APMA)及抑制剂... 目的研究基质金属蛋白酶(MMPs)家族MMP-1、MMP-2激动剂和抑制剂对人巩膜Ⅰ型胶原表达的作用,探讨MMP-1和MMP-2在人巩膜胶原代谢中的作用。方法应用人巩膜成纤维细胞系作为研究模型,用荧光定量检测MMPs激动剂醋酸氨基苯汞(APMA)及抑制剂对人巩膜成纤维细胞MMP-1和MMP-2活性的影响;实时荧光定量反转录聚合酶链反应以及免疫印迹蛋白定量法检测比较激动剂组与抑制剂组对MMP-1/2以及Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达的变化;最后用siRNA干扰敲除MMP-1、MMP-2或MMP-1/2后,检测巩膜成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白水平的变化。结果 MMPs激动剂引起MMP-1/2活性显著增加,Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达下降,MMPs抑制剂引起MMP-1/2活性显著下降,相应的Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达增加(均P<0.01)。激动剂可引起MMP-1mRNA表达增加(P<0.01),对MMP-2mRNA表达无明显影响(P>0.05),而抑制剂能引起MMP-2mRNA表达下降(P<0.01),但对MMP-1mRNA表达无显著影响(P>0.05)。应用siRNA干扰方法敲除MMP-1、MMP-2或两者同时被敲除后,MMP-1蛋白表达均显著降低(均P<0.01),MMP-2除在MMP-1siRNA干扰敲除组无明显变化外(P>0.05),其余各组均显著下降(均P<0.01);Ⅰ型胶原的表达在各敲除组中显著增加,当MMP-1和MMP-2均干扰敲除时,Ⅰ型胶原的表达增加最为显著(均P<0.01)。结论在人巩膜成纤维细胞系中,MMP-1/2激动剂和抑制剂均能引起MMP-1/2活性改变及相应的MMP-1/2蛋白表达变化,并最终导致Ⅰ型胶原表达的变化;MMP-1和MMP-2是调控人巩膜Ⅰ型胶原重塑的关键因子。 展开更多
关键词 人巩膜成纤维细胞 基质金属蛋白酶1 基质金属蛋白酶2 胶原 I型
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Smad泛素化调节因子2对人胚胎眼巩膜成纤维细胞TGF-β1/Smads信号通路和I型胶原表达的影响 被引量:1
6
作者 陈婷 陈丽娟 陈银河 《福建医药杂志》 CAS 2022年第2期110-113,F0004,共5页
目的探讨Smad泛素化调节因子2(Smurf2)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导后对人胚胎眼巩膜成纤维细胞(HFSFs)分泌Smads蛋白、I型胶原α1(COLIA1)的影响,探讨泛素化在巩膜重塑中的作用。方法HFSFs复苏并稳定传代后,免疫组化(IHC)法检测细... 目的探讨Smad泛素化调节因子2(Smurf2)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导后对人胚胎眼巩膜成纤维细胞(HFSFs)分泌Smads蛋白、I型胶原α1(COLIA1)的影响,探讨泛素化在巩膜重塑中的作用。方法HFSFs复苏并稳定传代后,免疫组化(IHC)法检测细胞中Smurf2的表达。将HFSFs细胞分别设空白对照组、TGF-β1组(加入10 ng/mL TGF-β1)、Control siRNA转染组(10 ng/mL TGF-β1+Control siRNA)及Smurf2 siRNA转染组(10ng/mL TGF-β1+Smurf2 siRNA)。Western Blot法检测COLIA1蛋白表达水平。RT-PCR法检测各组细胞中Smurf2、Smad2、Smad3和Smad7的mRNA表达水平。结果IHC结果显示,HFSFs中有Smurf2蛋白表达。TGF-β1诱导HFSFs中COLIA1蛋白显著性高表达,而当Smurf2被抑制时,COLIA1蛋白表达受抑制。与空白对照组比较,Smad7 mRNA表达水平呈上升趋势,差异有统计意义(P<0.05),但Smad7蛋白表达水平与PCR结果不完全相同;各培养组中Smad2和Smad3 mRNA和蛋白表达水平,与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论Smurf2表达于HFSFs细胞中,且随着Smurf2表达减少,HFSFs细胞中Smad7蛋白含量呈上升趋势,COLIA1含量呈下降趋势。提示Smurf2可能通过作用于TGF-β1/Smads信号通路参与了巩膜重塑过程。 展开更多
关键词 Smad泛素化调节因子2(Smurf2) 人胚胎眼巩膜成纤维细胞(HFSFs细胞) TGF-β1/Smad通路 近视
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人巩膜成纤维细胞体外三维胶原基质培养系统的构建及其生物力学特性
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作者 胡守龙 李莉 +1 位作者 崔冬梅 曾骏文 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期108-113,共6页
背景眼轴的过度伸长和巩膜组织的扩张是高度近视发病机制研究的热点之一,建立合理的人巩膜成纤维细胞(HSFs)培养体系模型有助于进一步探讨HSFs在高度近视形成过程中与胶原基质相互作用的生物学机制。 目的构建HSFs与Ⅰ型胶原的三维... 背景眼轴的过度伸长和巩膜组织的扩张是高度近视发病机制研究的热点之一,建立合理的人巩膜成纤维细胞(HSFs)培养体系模型有助于进一步探讨HSFs在高度近视形成过程中与胶原基质相互作用的生物学机制。 目的构建HSFs与Ⅰ型胶原的三维培养系统,微观模拟在体巩膜,建立巩膜重塑模型。 方法采集新鲜供体巩膜组织,采用组织块培养法分离和培养HSFs,采用免疫荧光技术检测细胞中波形蛋白和角蛋白的表达以鉴定细胞;获取8周龄SPF级雄性SD大鼠鼠尾腱制备鼠尾胶原,400 μl胶原加入50 μl NaOH(0.1 mol/L)溶液中混匀,加入80 μl 10倍培养液,混匀,溶液pH值约为7。加入1 100 μl终浓度1×106/ml细胞悬液混合形成凝胶培养系统,于倒置相差显微镜下观察HSFs的增生情况和细胞形态,采用IPP-5软件对三维培养的含细胞胶原收缩面积进行测量以分析三维胶原系统的物理特性;采用生物力学试验机对三维胶原系统的生物力学特性进行测定。 结果培养的HSFs波形蛋白呈阳性表达,角蛋白表达阴性。未接种培养细胞的无成纤维细胞SD鼠鼠尾胶原凝胶透明,实验期间性状无明显变化,而含HSFs的三维胶原凝胶随着细胞培养时间的延长细胞数量增加,倒置相差显微镜下可观察到数十层成纤维细胞相互交错呈网状排列,培养后7~14 d凝胶块呈乳白色,凝胶面积保持在正常的10%左右,三维培养系统中的HSFs接种后24 h细胞产生多向性突起,呈双极形或纺锤形。HSFs胶原凝胶复合物的弹性材料蠕变曲线呈非线性(0~100 s)部分与线性(100~600 s)部分,前者是胶原凝胶在短暂应力的作用下本身的弹性变化,后者是胶原凝胶在定力的作用下随拉伸时间的延长而出现的蠕变变化。 结论鼠胶原凝胶对培养的HSFs有良好的生物相容性,HSFs胶原凝胶可形成三维复合物,可呈现机械性生物学特性,是研究成纤维细胞与细胞外基质之间以及细胞之间相互作用的良好模型,可用于巩膜重塑的模拟研究。 展开更多
关键词 成纤维细胞/细胞学 巩膜 胶原 SD大鼠 生物力学 细胞培养技术/方法 种植 人巩膜成纤维细胞的胶原蛋白基质
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极低频电磁场对人胚胎眼巩膜成纤维细胞中ROCK1及COL1A1表达的调控作用
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作者 牛宗镇 朱煌 +2 位作者 蔡晓静 王洁 冯婕妤 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期640-644,共5页
目的观察极低频电磁场(ELF-EMFs)对人胚胎眼巩膜成纤维细胞(HFSFs)中Rho相关的卷曲蛋白激酶1(ROCK1)及Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)表达的影响。方法 HFSFs体外培养和传代后以0.2 mT、50 Hz电磁场辐射24 h(暴露组),设立未行电磁场辐射的HF... 目的观察极低频电磁场(ELF-EMFs)对人胚胎眼巩膜成纤维细胞(HFSFs)中Rho相关的卷曲蛋白激酶1(ROCK1)及Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)表达的影响。方法 HFSFs体外培养和传代后以0.2 mT、50 Hz电磁场辐射24 h(暴露组),设立未行电磁场辐射的HFSFs作为对照组。Real-Time PCR检测ROCK1和COL1A1 mRNA的表达,Western blotting检测ROCK1和COL1A1蛋白的表达。结果 Real-Time PCR检测结果显示:与对照组相比,暴露组HFSFs中ROCK1 mRNA的表达显著上调(t=3.006,P=0.039 7),而COL1A1mRNA的表达显著下调(t=4.225,P=0.013 4)。Western blotting检测发现,暴露组HFSFs中ROCK1蛋白的表达升高,COL1A1蛋白的表达降低。结论 ELF-EMFs对HFSFs中ROCK1和COL1A1的表达具有调控作用,并因此使巩膜重塑,进而导致近视的发生和发展。 展开更多
关键词 极低频电磁场 人胚胎眼巩膜成纤维细胞 Rho相关的卷曲蛋白激酶1 Ⅰ型胶原蛋白
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越橘花青素对人胚胎巩膜成纤维细胞MMP2和collagenⅠ表达的影响 被引量:2
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作者 刘丽敏 钟华红 +5 位作者 邓宏伟 肖红萍 曾杞汶 田原 刘小勇 孟晶 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1291-1296,共6页
目的:探讨越橘花青素对人胚胎巩膜成纤维细胞(HFSF)基质金属蛋白酶2(MMP2)和Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ)表达的影响,为越橘花青素防治近视提供实验依据。方法:取不同浓度(0,10^(-6),10^(-5),10^(-4),10^(-3),10^(-2),10^(-1) and 1 g/L)... 目的:探讨越橘花青素对人胚胎巩膜成纤维细胞(HFSF)基质金属蛋白酶2(MMP2)和Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ)表达的影响,为越橘花青素防治近视提供实验依据。方法:取不同浓度(0,10^(-6),10^(-5),10^(-4),10^(-3),10^(-2),10^(-1) and 1 g/L)越橘花青素作用于HFSF,应用MTT法检测越橘花青素作用不同时间(6 h、8 h、12 h、24 h和48h)对HFSF活力的影响;流式细胞术检测HFSF活力最高时(10-1g/L越橘花青素作用12 h)的细胞周期和凋亡情况;RT-q PCR检测HFSF中MMP2、COL1A1和COL1A2的mRNA表达;Western blot检测其MMP2和collagen I的蛋白表达。结果:MTT法结果显示HFSF在10-1g/L的越橘花青素作用12 h时活力最高;与空白对照组比较,流式细胞术显示10-1g/L越橘花青素组S和G2期的细胞比例增加(P<0.05),凋亡率差异无统计学意义;RT-q PCR显示MMP2的mRNA表达量下降(P<0.05),COL1A1的mRNA表达量增加(P<0.05),COL1A2的mRNA表达量差异无统计学意义;Western blot显示MMP2蛋白表达下降(P<0.05),collagen I蛋白表达增加(P<0.05)。结论:越橘花青素对HFSF和具有抑制MMP2和增加collagen Ⅰ表达的作用。 展开更多
关键词 越橘花青素 人胚胎巩膜成纤维细胞 基质金属蛋白酶2 Ⅰ型胶原蛋白
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转化生长因子β_1对人巩膜成纤维细胞Smad泛素化调节因子2和Ⅰ型胶原α_1影响的研究 被引量:6
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作者 陈丽娟 陈婷 +3 位作者 陈雪兰 叶文文 黄丽娟 胡建民 《中华眼科医学杂志(电子版)》 2019年第1期14-20,共7页
目的探讨Smad泛素化调节因子2(Smurf2)在人胚胎眼巩膜成纤维细胞(HFSFs)中的表达,检测转化生长因子β_1(TGF-β_1)影响下HFSFs中Smurf2和Ⅰ型胶原α_1(COLIA1)含量的变化。方法 HFSFs复苏并稳定传代后,用免疫细胞化学法检测细胞中Smurf... 目的探讨Smad泛素化调节因子2(Smurf2)在人胚胎眼巩膜成纤维细胞(HFSFs)中的表达,检测转化生长因子β_1(TGF-β_1)影响下HFSFs中Smurf2和Ⅰ型胶原α_1(COLIA1)含量的变化。方法 HFSFs复苏并稳定传代后,用免疫细胞化学法检测细胞中Smurf2的表达。分别用不同浓度的TGF-β_1(0、1 ng/ml、5 ng/ml及10 ng/ml)处理HFSFs 24 h以及10 ng/ml TGF-β_1处理HFSFs不同时长(1 h、6 h、12 h及24 h)后,用实时荧光定量法检测各组Smurf2信使核糖核酸(mRNA)和COLIA1 mRNA表达水平。数据以均数±标准差(±s)描述,不同浓度和不同时长的组间比较采用单因素方差分析,当差异有统计学意义时,进一步采用SNK法两两比较。结果免疫细胞化学检测的结果显示,HFSFs中有COLIA1 mRNA和Smurf2蛋白的表达。与空白对照组比较,TGF-β_110 ng/ml组COLIA1 mRNA的表达呈上升趋势(F=3. 17,P <0. 05),TGF-β_15 ng/ml、10 ng/ml组Smurf2 mRNA表达上调(F=2. 35,2. 00; P <0. 05)。10 ng/ml TGF-β_1干预HFSFs培养1 h、6 h、12 h及24 h后,24 h组COLIA1 mRNA表达显著升高(F=29. 20,P <0. 05)。Smurf2 mRNA表达改变呈先上升后下降趋势,在6 h达到最高(F=10. 65,P <0. 05)。结论 TGF-β_1可能通过调控HFSFs Smurf2的表达,诱导HFSFs COLIA1的合成。 展开更多
关键词 Smad泛素化调节因子2 人胚胎眼巩膜成纤维细胞 转化生长因子β1Smad通路 近视
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葛根素对工频电磁场下人胚胎眼巩膜成纤维细胞增殖活性和Ⅰ型胶原及MMP-2表达的影响
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作者 苏强 杨璐 《中华劳动卫生职业病杂志》 CAS CSCD 2016年第6期447-451,共5页
目的探讨葛根素对工频电磁场下人胚胎眼巩膜成纤维细胞(HFSFs)的增殖活性和细胞内基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及Ⅰ型胶原表达的影响。方法培养HFSFs细胞,分为4个辐射组(0.2mT、50Hz)和对照组,辐射组分别加入0.0、1.0、5.0、10... 目的探讨葛根素对工频电磁场下人胚胎眼巩膜成纤维细胞(HFSFs)的增殖活性和细胞内基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及Ⅰ型胶原表达的影响。方法培养HFSFs细胞,分为4个辐射组(0.2mT、50Hz)和对照组,辐射组分别加入0.0、1.0、5.0、10.0μmol/L葛根素;采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法测定HFSFs的增殖活性;采用蛋白质印迹(Western blot)法和实时定量荧光聚合酶链式反应(RT-qPCR)法分别测定葛根素对工频电磁场引起HFSFs Ⅰ型胶原和MMP-2蛋白和mRNA表达的变化。结果随着培养时间的延长,辐射组和对照组HFSFs增殖活性明显增大,差异有统计学意义(F值分别为959.472、279.468,均P〈0.01);辐射组HFSFs24和48h增殖活性分别为0.432±0.038、0.591±0.017,明显低于对照组(0.536±0.034、0.801±0.020),差异均有统计学意义(均P〈0.01)。HFSFs在0.0、1.0、5.0、10.0μmol/L浓度葛根素的干预下增殖活性逐渐增强,A值分别为0.598±0.031、0.809±0.041、0.910±0.037、0.983±0.054,差异均有统计学意义(P〈0.05)。暴露24h后,辐射组Ⅰ型胶原蛋白表达明显低于对照组,MMP-2蛋白表达明显高于对照组,差异有统计学意义(t=7.917、7.831,均P〈0.01);与0.0μmol/L葛根素组比较,1.0、5.0、10.0μmol/L葛根素组Ⅰ型胶原蛋白表达明显增高,MMP-2蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(均P〈0.01)。与对照组相比,辐射组HFSFs细胞Ⅰ型胶原mRNA表达下降,MMP-2mRNA表达升高,差异有统计学意义(t=17.293、16.378,P〈0.01);与0.0μmol/L葛根素组比较,1.0、5.0、10.0μmol/L葛根素组Ⅰ型胶原mRNA表达明显增高,MMP-2mRNA表达明显降低,差异均有统计学意义(P〈0.01)。结论葛根素能够抑制工频电磁场下HFSFs的增殖活性下降,上调Ⅰ型胶原和下调MMP-2的表达,起到保护作用。 展开更多
关键词 葛根素 电磁场 人胚胎眼巩膜成纤维细胞 Ⅰ型胶原 基质金属蛋白酶-2
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