酒石酸脱除单铽转铁蛋白中铽(Ⅲ)的荧光动力学研究

0 .0 1mol/LHepes,pH 7.4,室温条件下 ,以酒石酸为脱除剂 ,监测铽 (Ⅲ )与脱铁转铁蛋白结合的两种配合物C端单铽转铁蛋白和N端单铽转铁蛋白随酒石酸浓度变化的脱除动力学 ,根据其动力学行为 ,我们推测存在两种平行的脱除途径 :一次途径和饱和途径 ,其中C端单铽转铁蛋白的铽 (Ⅲ )脱除呈现饱和与一次相结合途径 ,N端单铽转铁蛋白为简单的一次途径 .NaCl的加入可促进两种单铽转铁蛋白铽 (Ⅲ )的脱除 。

稀土金属离子与人血清白蛋白的相互作用

本文用荧光光谱、紫外-可见吸收光谱法和循环伏安法研究了稀土金属离子Eu髥、Pr髥与人血清白蛋白(HSA)的相互作用。实验发现:Eu髥和Pr髥对HSA有较强的荧光猝灭作用。用Stern-Volmer方程分别对实验数据进行处理,结果发现:HSA与Eu髥、Pr髥发生反应生成了新的复合物,发生了分子内的非辐射能量转移。Eu髥、Pr髥对HAS的荧光猝灭作用,属于静态荧光猝灭。荧光猝灭图表明:Eu3+和Pr3+在HSA分子中至少有两类结合位点,Eu3+与HSA形成2.76∶1的复合物,结合常数lgK分别为12.03和9.05;Pr3+与HSA形成2.2∶1的复合物,结合常数lgK分别为9.89和6.97。同时用圆二色谱及同步荧光光谱法探讨了Eu髥和Pr髥对HSA构象的影响。

金属-血清白蛋白的结构研究(Ⅷ)──HSA和BSA中锌离子中心的荧光EXAFS研究

荧光EXAFS数据证实，在HSA和BSA中，锌离子与第一配位层原子的核间距分别为0．201nm和0．203nm，配位数近似为4，很可能为4个氮原子配位，胱氨酸硫原子参与配位的可能性基本排除．

人血清白蛋白与金属离子作用的荧光光谱研究

通过金属离子对人血清白蛋白内源荧光的猝灭,探讨了金属离子Cu^(2+),Mn^(2+),Ni^(2+),Co^(2+),Cr^(3+)等与人血清白蛋白的结合;基于Forster无辐射能量转移机理,得出了人血清白蛋白第一类Cu^(2+)结合部位与214位色氨酸残基间的距离。

螯合剂对稀土-转铁蛋白配合物的影响(Ⅱ)——稀土-转铁蛋白配合物的阴离子结合性质

在 0 .1 mol/ L Hepes,p H 7.4的条件下 ,使用紫外差谱和铽 ( )荧光光谱观察了一些螯合剂对稀土 -转铁蛋白配合物 REC-apo Tf中 RE的脱除 .荧光滴定表明 ,螯合剂对 Tb C-apo Tf中铽 ( )的脱除按缔合机理进行 .当螯合剂为非伴阴离子时 ,脱除过程有 Tb C-apo Tf-L三元配合物中间体生成 ;当螯合剂为伴阴离子时 ,脱除过程有 L-Tb C-apo Tf三元配合物中间体生成 ;L-Tb C-apo Tf比 Tb C-apo Tf-L更有利于脱除反应的进行 ;HEDTA,EDTA和 NTA可定量地将 Tb C-apo Tf转化为 Tb-L或 Tb-L2

铽(Ⅲ)与人血清脱铁转铁蛋白结合的荧光光谱研究

在ｐＨ７．４０．１ｍｏｌ／ＬＨｅｐｅｓ及室温条件下，使用荧光光谱进行了Ｔｂ３＋对人血清脱铁转铁蛋白的滴定．结果表明Ｔｂ３＋与人血清脱铁转铁蛋白结合后，其５４９ｎｍ处的荧光强度增强约１０５倍．在５４９ｎｍ处Ｔｂ３＋－脱铁转铁蛋白络合物的摩尔荧光强度是（９．６５±０．０５）×１０４ｍｏｌ－１Ｌ，Ｔｂ３＋可占据脱铁转铁蛋白的两个金属离子结合部位，优先占据脱铁转铁蛋白的Ｃ端结合部位，条件平衡常数是ｌｇＫＣ＝９．９６±０．２０，ｌｇＫＮ＝６．３７±０．１６．Ｔｂ３＋与Ｒ３＋Ｅ（ＲＥ＝Ｎｄ、Ｓｍ。

盐酸洛美沙星与人血清白蛋白相互作用的荧光光谱

应用荧光光谱法研究了生理条件下盐酸洛美沙星(LOM)与人血清白蛋白(HSA)相互作用机制。研究表明:盐酸洛美沙星对HSA内源荧光的猝灭机制属于形成复合物所引起的静态猝灭,猝灭速率常数Kq为3.37×1012L.mol-1.S-1;结合常数为1.23×105,结合位点数为1.11,并根据F rster非辐射能量转移理论,计算出盐酸洛美沙星与HSA相互结合时其供体-受体间的结合距离(R=2.44 nm)和能量转移效率(E=0.209)。通过HSA与抗菌药物盐酸洛美沙星结合反应,探讨了药物盐酸洛美沙星在生物体内与蛋白质相互作用的生物学效应及其作用机理,讨论了共存Cu2+、Fe3+、Zn2+对盐酸洛美沙星与HSA结合反应的影响。

铕(Ⅲ)离子与人血清脱铁转铁蛋白结合的紫外差光谱研究

在pH7.4,温度为25℃的条件下,用紫外吸收差光谱进行了Eu^(3+)对人血清脱铁转铁蛋白的滴定.结果表明Eu^(3+)与人血清脱铁转铁蛋白结合后其差光谱在245nm和296nm处出现吸收峰,在245nm处,Eu^(3+)-脱铁转铁蛋白配合物的摩尔吸光系数是(2.2±0.1)×10~4cm^(-1)·mol^(-1)·dm^3,Eu^(3+)可占据脱铁转铁蛋白的2个金属离子结合部位,Eu^(3+)优先占据脱铁转铁蛋白的C端结合部位,条件平衡常数是logK_c=8.42±0.12,logK_N=6.03±0.42.Eu^(3+)与R_E^(3+)(R_E=Nd,Sm,Gd和Tb)间的线性自由能关系表明,稀土离子占据脱铁转铁蛋白的C端结合部位时受离子大小的影响.

金属离子介导下欧前胡素和异欧前胡素与人血白蛋白的相互作用

目的在模拟人体生理条件下,获得7种金属离子介导下,欧前胡素和异欧前胡素与人血白蛋白(HSA)相互作用的荧光猝灭强度、结合位点数、结合常数、作用力类型及对其空间构象的影响。方法采用荧光光谱法和同步荧光光谱法结合,研究金属离子介导下,欧前胡素和异欧前胡素与HSA的相互作用。结果金属离子介导下,欧前胡素和异欧前胡素对HSA的荧光猝灭增强,同时结合作用增强。作用力主要为氢键和范德华力,不同金属离子介导下其作用力类型不变,但作用力强弱有所改变。对于欧前胡素作用力顺序为:Mg2+>Cu2+>Ni2+>Co2+>Zn2+>Fe3+>Al3+,异欧前胡素作用力顺序为:Cu2+>Zn2+>Fe3+>Co2+>Mg2+>Al3+>Ni2+。同步荧光光谱结果显示金属离子介导下,欧前胡素和异欧前胡素与HSA相互作用后,HSA的构象均发生改变。结论金属离子的存在促进欧前胡素和异欧前胡素与人血白蛋白相互作用。

同步与三维荧光光谱法研究日落黄和人血清蛋白的相互作用

日落黄是一种具有潜在危害性的人工合成色素。选用人血清蛋白为研究对象,利用荧光光谱法分析了日落黄对人血清蛋白荧光的猝灭作用,确定了荧光猝灭反应的猝灭常数Ksv,结果表明日落黄对人血清蛋白的荧光猝灭作用类型为静态猝灭。运用同步荧光光谱法分析日落黄与人血清蛋白结合表明:日落黄与人血清蛋白的结合靠近色氨酸附近,引发色氨酸残基趋向伸展状态,人血清蛋白的结构发生改变。此外,在模拟人体生理条件下选用10种不同的金属离子加入到日落黄和人血清蛋白的反应体系中,运用三维荧光法检测金属离子对体系的影响,结果表明Cu^(2+),Pb^(2+),Ni ^(2+)和Mn^(2+)对猝灭过程有着促进作用,其中Ni ^(2+)的影响最大,增幅达22.6%;而Fe^(2+)和Zn^(2+)对猝灭过程有着抑制作用,抑制率达14.12%和14.2%。本研究的实验方法适用于研究食品添加剂的毒性,有助于保护食品安全,维护人体健康。

基于铽-沙拉沙星配合物的荧光增强测定人血清白蛋白

Tb3+和沙拉沙星(SRFX)反应生成二元配合物,发射Tb3+的特征荧光。人血清白蛋白(HSA)能够增强Tb3+-SRFX配合物的荧光强度,据此,建立了荧光法测定HSA的新方法。在最佳测定条件下,当HSA的浓度在0.50～90.0 mg/L时,Tb3+-SRFX-HSA体系荧光强度的增强和HSA的浓度有良好的线性关系,方法的检出限为0.13 mg/L。用该方法测定了人血清中HSA的含量,回收率在99.2%～99.6%之间。同时对荧光强度增强的机理进行了探讨。

稀土钐离子与人血清白蛋白的相互作用

目的:通过对稀土钐离子(Sm3+)和人血清白蛋白(HSA)的结合反应研究,进一步探讨Sm3+在生物体内与蛋白质相互作用的机理。方法:用荧光光谱、紫外-可见吸收光谱法研究了稀土金属离子与人血清白蛋白的相互作用。结果:Sm3+对HSA有荧光猝灭作用,属于静态猝灭,Sm3+与HSA反应生成了新的复合物,荧光猝灭发生了分子内的非辐射能量转移。Sm3+与HSA的结合常数Kb分别为4.12×105L.mol-1(298K)和2.26×105L.mol-1(318K),结合位点数n为1.24(298 K)和1.20(318 K)。结论:Sm3+和HSA之间有很强的结合作用,这为Sm3+在体内被蛋白质储存和转运提供了条件。

荧光光谱法研究锆离子存在下槲皮素及人血清白蛋白的相互作用

目的采用荧光光谱法研究有无锆离子(Zr4+)共存时槲皮素与人血清白蛋白(HSA)的相互作用。方法于10 mL的比色管中,依次加入0.20 mol/LTris-HCl缓冲溶液(pH 7.40)2.50 mL,0.10 mol/L NaCl溶液1.0 mL,一定量的HSA溶液,Zr4+溶液,槲皮素溶液,用二次蒸馏水定容至10 mL。HSA荧光激发/发射波长为281/352 nm,激发和发射光狭缝宽度为3 nm,在波长300～500 nm内记录荧光光谱。结果测得了有无锆离子存在时槲皮素-HSA结合反应的平衡常数和结合摩尔位点数分别为1.032×106L/mol、2.964×105L/mol,1.13、1.07;确定槲皮素-HSA的作用类型为静态猝灭过程。结论锆离子、槲皮素对HSA荧光均有猝灭作用,而且二者共存时对HSA荧光有协同猝灭作用,其猝灭机制为槲皮素与锆离子形成配合物后再对HSA的荧光有猝灭作用,而不是槲皮素和锆离子各自猝灭的简单累加。

人血清转铁蛋白标准物质纯化

建立了一种从Cohn血浆分离副产物组分IV中纯化高纯度转铁蛋白（Tf）标准物质的技术,对Cohn组分IV进行复溶、离心和过滤,采用Capto DEAE阴离子交换色谱进行初分离,再通过穿透式Octyl-Sepharose 4 Fast Flow疏水色谱进一步精制;对纯化产品进行了结构、纯度、活性等表征,采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱、高效液相色谱及酶联免疫吸附法对Tf标准物质进行了分析.结果表明,Tf产品纯度大于99%,收率为79%;圆二色光谱分析显示Tf的二级结构未发生改变,铁离子结合能力实验表明Tf可结合2个铁离子,保持活性.