急性心肌梗死患者血清人软骨糖蛋白39、可溶性肿瘤坏死因子受体1水平与心功能及预后的相关性

目的分析急性心肌梗死(AMI)患者血清人软骨糖蛋白39(YKL-40)、可溶性肿瘤坏死因子受体1(sTNFR1)水平与心功能及预后之间的关系。方法选取2016年3月—2018年10月在河北北方学院附属第一医院就诊的77例AMI患者为研究对象(AMI组),选取同期在该院健康体检的77例为对照组。对AMI患者出院后随访,记录患者预后情况,随访时间为24个月。超声心动图测定两组心功能参数左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室后壁厚度(LVPWT);酶联免疫吸附法测定血清YKL-40、sTNFR1水平;Pearson法分析血清YKL-40、sTNFR1水平与AMI患者心功能参数的相关性;分析血清YKL-40、sTNFR1水平与AMI患者预后不良的关系;COX回归分析影响AMI患者预后不良的危险因素。结果与对照组比较,AMI组血清YKL-40、sTNFR1水平和LVEDD、LVPWT显著升高,LVEF显著降低(P<0.05)。随着AMI患者心功能分级的升高,血清YKL-40、sTNFR1水平逐渐升高(P<0.05)。AMI患者血清YKL-40、sTNFR1水平与LVEF呈负相关,与LVEDD、LVPWT呈正相关(P<0.05)。AMI患者YKL-40高水平组、sTNFR1高水平组的预后不良发生率均高于低水平组(P<0.05)。多因素COX分析表明,心肌梗死类型、梗死部位与血清YKL-40、sTNFR1水平是影响AMI患者预后不良的危险因素(P<0.05)。结论AMI患者血清YKL-40、sTNFR1水平与心功能和预后不良的发生相关,可能是评估AMI患者预后的潜在生物标志物。

人GLP-1类似物对2型糖尿病轻度认知功能损害患者血清TNF-α、sICAM-1及sVCAM-1的影响

目的观察人胰升血糖素样肽-1(GLP-1)类似物利拉鲁肽对2型糖尿病轻度认知功能损害(MCI)患者血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、可溶性细胞间黏附分子-1(s ICAM-1)和可溶性血管细胞黏附分子-1(s VCAM-1)水平的影响,探讨其作用机制。方法选取2型糖尿病MCI患者40例作为实验组,给予利拉鲁肽治疗,疗程12个月;选择同时期健康体检者40例作为对照组。检测对照组及实验组治疗前、治疗6个月及12个月后体质量、收缩压、舒张压、TC、TG、LDL-C、空腹血糖(FBG)、餐后2h血糖(2h PG)、糖化血红蛋白(Hb A1c)、TNF-α、s ICAM-1和s VCAM-1水平。结果治疗前,实验组体质量、FBG、2h PG、Hb A1c、TNF-α、s ICAM-1和s VCAM-1水平均显著高于对照组(P均<0.05),收缩压、舒张压、TC、TG、LDL-C与对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。治疗过程中,实验组收缩压、舒张压、TC、TG、LDL-C均无显著变化;治疗6个月及12个月后,实验组体质量、FBG、2h PG、Hb A1c、TNF-α、s ICAM-1和s VCAM-1均显著低于治疗前(P均<0.05),且治疗12个月后s ICAM-1和s VCAM-1水平均明显低于治疗6个月后(P均<0.05);血清TNF-α与s ICAM-1(r=0.831,P<0.05)和s VCAM-1(r=0.434,P<0.05)均呈正相关。结论人GLP-1类似物可能通过降低2型糖尿病MCI患者血清TNF-α水平,进一步抑制血清s ICAM-1和s VCAM-1的作用,预防2型糖尿病并发症的发生、发展。

川芎嗪调控PKCβ_1减轻波动高糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤的实验研究

目的观察川芎嗪对波动高糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤及蛋白激酶Cβ_1(PKCβ_1)表达的影响。方法分离、鉴定并培养人脐静脉内皮细胞,实验共分为7组:正常低糖(N)组、稳定高糖(W)组、波动高糖(B)组、稳定高糖+LY333531(WL)组、波动高糖+LY333531(BL)组、波动高糖+川芎嗪(TMP)组和波动高糖+二甲双胍(MH)组。8d后检测各组细胞凋亡率、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)、晚期氧化蛋白产物(AOPP)和总抗氧化能力(T-AOC)水平及细胞PKCβ_1蛋白表达情况。结果与N组相比,W组和B组HUVECs总凋亡率、TNF-α、sICAM-1、AOPP含量、PKCβ_1蛋白表达均显著升高(P<0.01),T-AOC显著降低(P<0.01),且W组和B组间差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。应用TMP和MH干预具有与LY333531阻断相似的效应,可显著降低细胞的总凋亡率、TNF-α、sICAM-1、AOPP含量及PKCβ_1蛋白表达(P<0.01),同时可显著升高T-AOC水平(P<0.01)。结论波动性高糖状态具有显著加重人脐静脉内皮细胞损伤的效应,且该效应与PKCβ_1表达水平显著升高密切相关;川芎嗪对波动性高血糖状态下的血管内皮功能具有明显的保护作用,其作用机制与其显著抑制PKCβ_1的过表达进而减轻氧化应激和炎症反应密切相关。

肿瘤坏死因子α对人脐静脉内皮细胞纤溶酶原激活物抑制剂1表达及转录调控的影响

探讨肿瘤坏死因子α对人脐静脉内皮细胞纤溶酶原激活物抑制剂 1活性和mRNA表达的影响 ,以及纤溶酶原激活物抑制剂 1基因 5’上游序列的调控元件在该基因转录调控中的作用。体外培养人脐静脉内皮细胞 ,加入不同浓度肿瘤坏死因子α作用不同时间。采用发色底物法测定纤溶酶原激活物抑制剂 1活性 ,Northern印迹分析法测定纤溶酶原激活物抑制剂 1mRNA水平。基因重组技术构建四个含人纤溶酶原激活物抑制剂 1基因不同长度5’上游序列的荧光素酶报告基因质粒 ,瞬时转染进入内皮细胞 ,并测定荧光素酶的表达情况。运用聚合酶链反应和序列分析法对构建质粒上的三个AP 1元件分别进行定点突变。结果发现 ,不同浓度肿瘤坏死因子α作用人脐静脉内皮细胞后 ,纤溶酶原激活物抑制剂 1活性和mRNA表达量均明显增高 ;当转染质粒含有纤溶酶原激活物抑制剂 1基因上游序列 - 15 0 9 +90和 - 82 3 +90时 ,肿瘤坏死因子α使转染细胞的荧光素酶表达量比对照组明显增高 ;当转染质粒含有 - 5 5 3 +90和 - 4 7 +90时 ,肿瘤坏死因子α的诱导作用不明显。在纤溶酶原激活物抑制剂 15’上游序列的三个AP 1元件突变后 ,肿瘤坏死因子α的诱导作用明显降低。结果提示 ,肿瘤坏死因子α增强血管内皮细胞纤溶酶原激活物抑制剂 1活性与mRNA表达 ;?

血清sST2、CTRP1与脓毒症患者病情的关系及预后影响因素分析

目的研究血清可溶性人基质裂解素2(sST2)、补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白1(CTRP1)与脓毒症患者病情的关系及预后影响因素。方法将2016年10月至2019年10月西安医学院第二附属医院收治的100例脓毒症患者纳入研究,将其按照是否休克分为休克组62例与非休克组38例。另选取同期于我院体检的40例健康志愿者作为对照组。比较三组受检者的血清sST2、CTRP1水平,分析血清sST2、CTRP1水平与脓毒症严重程度的关系。根据所有患者住院30 d内的存活状态将其分为存活组70例和死亡组30例,比较两组患者的基线资料和各项血清指标。采用多因素Logistic回归分析法分析脓毒症患者住院30 d内死亡的影响因素。结果休克组、非休克组和对照组受检者的血清sST2水平[(694.82±124.59)pg/mL vs(510.27±102.83)pg/mL vs(76.22±2.39)pg/mL]、CTRP1水平[(21.33±5.28)ng/mL vs(16.79±4.14)ng/mL vs(3.55±1.05)ng/mL]比较,休克组明显高于非休克组和对照组,非休克组又明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示,血清sST2、CTRP1水平与脓毒症严重程度均呈正相关(r=0.628、0.647,P<0.05);死亡组患者的年龄、APACHEⅡ评分、血清肌酐、尿素氮、CRP、sST2、CTRP1水平明显高于存活组,差异均有统计学意义(P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,年龄较大、APACHEⅡ评分较高,血清尿素氮、CRP、sST2及CTRP1水平较高均是脓毒症患者住院30 d内死亡的独立危险因素(P<0.05)。结论血清sST2、CTRP1水平升高预示着脓毒症患者病情加剧,患者预后影响因素包括年龄、APACHEⅡ评分、尿素氮、CRP、sST2及CTRP1等,均值得临床重点关注。

脓毒症患者血清sTNFR-Ⅱ、GM-CSF、HNP1-3水平与SIRS评分的相关性及预测预后的ROC分析

目的探究脓毒症患者血清可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ(sTNFR-Ⅱ)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、人中性粒细胞多肽1-3(HNP1-3)水平与全身炎症反应综合征(SIRS)评分相关性,并采用受试者工作特征(ROC)曲线评价各血清指标预测预后价值。方法选取遂宁市中心医院2016年1月—2021年3月收治的120例脓毒症患者,随访30 d,根据预后分为生存组(98例)与死亡组(22例),检测对比两组血清sTNFR-Ⅱ、GM-CSF、HNP1-3水平,分析各血清指标与SIRS评分相关性及预测预后价值。结果死亡组血清sTNFR-Ⅱ、GM-CSF、HNP1-3水平高于生存组(P<0.05);Pearson相关性分析,血清sTNFR-Ⅱ、GM-CSF、HNP1-3与SIRS评分呈正相关(P<0.05);COX回归分析,将年龄、病情程度、侵入性操作、SIRS评分等其他因素调整后,血清sTNFR-Ⅱ、GM-CSF、HNP1-3与死亡风险显著相关(P<0.05);ROC曲线分析,血清sTNFR-Ⅱ、GMCSF、HNP1-3联合预测预后的AUC为0.833,95%CI为0.754~0.895,敏感性为90.91%,特异性为62.24%,较各血清指标单独预测价值显著提高(P<0.05)。结论脓毒症患者血清sTNFR-Ⅱ、GM-CSF、HNP1-3水平与SIRS评分呈正相关,联合检测可作为预测预后的新思路、新途径。

人可溶性肿瘤坏死因子受体1基因原核表达及活性鉴定

目的:构建人可溶性肿瘤坏死因子受体1基因的原核表达质粒,诱导sTNFR1-MBP融合蛋白表达,观察表达产物的生物学活性.方法:以HeLa细胞的总RNA为模板.用RT- PCR方法扩增sTNFR1全编码区基因片段,构建含有目的片段的T载体克隆及原核表达载体pMAL-c2x重组质粒亚克隆,经异丙基-β-D半乳糖苷酶(IPTG)诱导重组质粒菌表达sTNFR1,以淀粉树脂亲和层析法纯化重组蛋白,并对重组蛋白进行序列分析和Western blot鉴定.MTT法测定重组蛋白的生物学活性的测定.结果:经DNA序列分析和Western blot鉴定,成功构建了人sTNFR1重组质粒基因工程菌;在IPTG的诱导下,重组质粒菌能表达sTNFR1- MBP融合蛋白,SDS-PAGE显示在66 kDa处有一特异性表达条带;纯化的sTNFR1-MBP融合蛋白经Western blot证实具有生物学活性;生物活性实验(MTT法)显示可有效地封闭TNF-α对OSG7701的细胞毒性作用,随着重组蛋白浓度的增高(0.2,2,20,40,80 mg/L),对TNF-α细胞毒效应的抑制作用增强,细胞死亡率依次为69.98%±1.52%,60.05%±2.18%,46.27%±2.48%,37.02%±3.17%,1.83%±0.59%,1.71%±0.61%.结论:成功获得了具有生物学活性的人sTNFR1-MBP融合蛋白,为进一步研究奠定了基础.

重组质粒PcDNA3.1/sTNFRⅠ在小鼠体内表达的初步研究

目的检测构建的PcDNA3.1/sTNFRⅠ真核表达载体在小鼠体内能否有效表达目的产物,为探索利用该载体基因治疗TNFα介导的炎性疾病奠定一定的实验基础。方法将PcDNA3.1/sTNFRⅠ载体直接注入小鼠胫前肌,ELISA法检测肌肉匀浆中的sTNFRⅠ表达。结果在注射后7d与10d,PcDNA3.1/sTNFRⅠ注射组小鼠肌肉匀浆中sTNFRⅠ表达的量均显著高于PcDNA3.1注射组(P<0.01),注射后第10天sTNFRⅠ表达量高于第7天sTNFRⅠ表达量(P<0.01)。结论采用直接注射法将PcDNA3.1/sTNFRⅠ载体转移入肌肉内可以使目的基因得到一定的表达。

肿瘤坏死因子对人脐静脉内皮细胞PAI-1活性、mRNA的影响以及促分裂原活化蛋白激酶的作用

目的 研究肿瘤坏死因子 α(TNF α)对人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)纤溶酶原激活物抑制剂 (PAI 1)活性及mRNA水平的影响 ,以及促分裂原活化蛋白激酶 (MAPK)在其中的作用。 方法 进行HUVECs的培养和鉴定。加入不同浓度TNF α ,并选择最佳时间条件。采用发色底物法测定PAI 1活性 ,Northernblot法检测PAI 1mRNA的水平。运用MAPK激酶抑制剂PD980 5 9观察对上述PAI 1l表达系统的作用。 结果 不同浓度TNF α(5× 10 4IU L、1× 10 5IU L、2× 10 5IU L和 4× 10 5IU L)均明显增高HUVECsPAI 1的活性 (P <0 0 1) ,1× 10 5IU LTNF α作用不同时间 (12、18、2 4h) ,PAI 1活性均明显增加 (P <0 0 1)。 1× 10 5IU LTNF α作用 18h时 ,PAI 1mRNA水平为正常对照组的 2 88倍。MAPK激酶抑制剂PD980 5 9能显著抑制TNF α对PAI 1活性和mRNA表达增强的作用。 结论 TNF α增强HUVECsPAI 1活性与mRNA表达 ;PAI 1活性提高与其mRNA表达增加呈正相关 ;MAPK途径在TNF α诱导PAI 1反应中起着重要作用。

丹参酮ⅡA对荷骨肉瘤裸鼠肿瘤生长及相关细胞因子水平的影响

目的探讨丹参酮ⅡA对荷骨肉瘤裸鼠肿瘤生长及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素-2(interleukin-2, IL-2)、可溶性血管黏附分子-1(soluble vascular cell adhesion molecule-1, sVCAM-1)水平的影响。方法 40只裸鼠皮下接种人骨肉瘤143B细胞建立异种移植瘤模型后,随机分为低、中、高剂量干预组(分别腹腔注射丹参酮ⅡA 10、20、40 mg/kg)和模型组(腹腔注射生理盐水),每组10只,连续给予相应药物3周后,计算各组抑瘤率;采用ELISA法检测血清TNF-α、IL-2及sVCAM-1水平;采用Western blot法检测肿瘤组织β-catenin、Dkk-1蛋白相对表达量;采用实时荧光定量PCR法检测肿瘤组织β-catenin、Dkk-1 mRNA相对表达量。结果低、中、高剂量干预组抑瘤率(38.21%、46.19%、56.42%)依次增高(P<0.05);低、中、高剂量干预组血清TNF-α[(25.56±1.86)、(26.38±2.35)、(27.98±1.60)ng/L]、IL-2[(512.56±27.86)、(553.49±24.35)、(584.73±31.57)ng/L]高于模型组[(21.45±2.15)、(449.36±12.35)ng/L](P<0.05),sVCAM-1[(139.26±14.21)、(120.37±12.45)、(109.91±11.61)ng/L]低于模型组[(176.39±18.25)ng/L](P<0.05),肿瘤组织Dkk-1蛋白(0.47±0.05、0.59±0.02、0.78±0.04)及Dkk-1 mRNA相对表达量(0.43±0.05、0.57±0.06、0.81±0.05)高于模型组(0.36±0.03、0.34±0.03)(P<0.05),β-catenin蛋白(0.69±0.03、0.55±0.04、0.38±0.03)及β-catenin mRNA相对表达量(0.55±0.04、0.42±0.04、0.40±0.06)均低于模型组(0.81±0.05、0.68±0.05)(P<0.05);低、中、高剂量干预组血清IL-2水平及肿瘤组织Dkk-1蛋白和Dkk-1 mRNA相对表达量均依次升高(P<0.05),血清sVCAM-1水平及肿瘤组织β-catenin蛋白相对表达量均依次降低(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA可通过抑制Wnt/β-catenin信号活性,上调TNF-α、IL-2水平,下调sVCAM-1水平,发挥抗体内骨肉瘤活性,其机制可能与激活抑制因子Dkk-1有关。

基质金属蛋白酶介导的人肿瘤坏死因子α融合蛋白的构建和表达

为了提高人肿瘤坏死因子α(hTNF-α)靶向性,同时降低其在体内的毒副作用,应用现代基因工程技术对hTNF-α进行改造,构建融合蛋白成为新的途径。本文利用基因工程的方法成功构建hTNF-α与基质金属蛋白酶-1(MMP1)f、oldon序列的重组质粒,将该质粒转化至Rosetta2(DE3),在一定条件下,经异丙基--βD-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白可溶性表达,后用谷胱甘肽(GST)树脂纯化试剂盒进行纯化,得到融合蛋白的纯化产物。为以后的科研和临床应用打下基础。