Bufalin对MGC-803细胞生长、分化的影响

目的 :以低分化胃腺癌细胞系MGC 80 3为实验对象 ,观察了蟾酥提取物bufalin对其生长、分化的影响。方法 :应用台盼蓝染色法、 76 90 XU荧光染色法和电子显微镜等观察细胞生长、分化。结果 :0 0 1μmol/Lbufalin可显著抑制细胞生长 ,细胞粘附力下降 ,由梭形趋于圆形 ,核质比下降 ,细胞内核糖体和线粒体数目减少 ,内质网不如对照组细胞发达 ;76 90 XU荧光染色显示 ,用药 72h ,约 71%的细胞发生分化。结论 :bufalin能有效诱导胃癌MGC 80

熊果酸诱导人胃癌细胞株MGC-803发生凋亡和自噬

目的:观察熊果酸(UA)对胃癌细胞株MGC-803凋亡与自噬的影响。方法:体外培养人胃癌细胞株MGC-803,以CCK8法测定UA对MGC-803细胞活力的影响并筛选出UA最佳作用浓度和时间;采用倒置相差显微镜观察UA干预后MGC-803细胞的形态学改变;采用MDC染色法观察UA对MGC-803细胞自噬的影响;采用实时定量PCR法检测凋亡相关基因BAX、BCL2和自噬相关基因Beclin1、LC3Ⅱ的表达水平;采用WB法对上述凋亡及自噬相关基因进行蛋白水平的验证。结果:CCK8法显示UA能显著抑制MGC-803细胞增殖,并具有浓度和时间依赖性;倒置相差显微镜观察到UA干预后视野下MGC-803细胞数量显著减少,部分细胞的形态发生变化,呈现碎片化;MDC染色法显示UA干预后视野下MGC-803细胞的荧光信号显著增强;实时定量PCR法显示UA显著上调凋亡相关基因BAX水平以及自噬相关基因Beclin1、LC3Ⅱ水平(P<0.05),显著下调凋亡相关基因BCL2水平(P<0.05);WB法显示UA显著上调凋亡相关蛋白BAX水平以及自噬相关蛋白Beclin1、LC3Ⅱ水平(P<0.05),显著下调凋亡相关蛋白BCL2水平(P<0.05)。结论:熊果酸对人胃癌细胞株生长具有显著的抑制作用且呈剂量和时间依赖性,同时熊果酸诱导人胃癌细胞死亡过程中凋亡和自噬均被激活。

熊果酸对胃癌细胞株MGC-803凋亡和自噬的调控及其作用机制

目的:观察熊果酸(UA)对胃癌细胞株MGC-803 自噬和凋亡的调控作用,并探讨UA基于PI3K/AKT/mTOR信号通路诱发MGC-803 细胞自噬的机制。方法:体外培养人胃癌细胞株MGC-803,分为空白对照组、UA干预组和UA+3-MA组。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,双荧光mRFP-eGFP-LC3 质粒转染细胞法检测各组细胞自噬发生情况,qPCR实验检测各组细胞LC3B、BAX、Bcl-2 mRNA的表达水平,WB实验检测各组细胞Ⅰ型PI3K、p-AKT、p-mTOR、ULK1、LC3B、BAX、Bcl-2 蛋白的表达水平。结果:与空白对照组相比,UA干预组细胞凋亡率显著增加(P<0.05);与UA干预组相比,UA+3-MA组细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。双荧光mRFP-eGFP-LC3 质粒转染法显示,与空白对照组相比,UA 干预组绿色和红色荧光亮点数均显著增加(P<0.05);与UA干预组相比,UA+3-MA组绿色和红色荧光亮点数均显著减少(P<0.05)。qPCR和WB实验结果显示,与空白对照组相比,UA干预组BAX和LC3B mRNA和蛋白以及ULK1 蛋白表达水平均显著上调,Bcl-2 基因和蛋白表达水平以及Ⅰ型PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平均显著下调(均P<0.05);与UA干预组相比,UA+3-MA组BAX、LC3B mRNA和蛋白表达水平显著下调,Bcl-2 基因和蛋白表达水平显著上调(均P<0.05),Ⅰ型PI3K、p-AKT、p-mTOR 和ULK1 蛋白表达水平无显著差异(P>0.05)。结论: UA诱导的自噬可以促进胃癌细胞MGC-803 的凋亡,其机制可能与UA参与调控PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达有关。

外源性三磷酸腺苷对人胃腺癌细胞(MGC-803)增殖和细胞骨架的影响

本文报道人胃低分化腺癌细胞(MGC-803)在外源性三磷酸腺苷(ATP)的连续作用下,细胞增殖受到明显的阻抑,4天以后细胞增殖的抑制率达80％以上,细胞内的骨架系统有较明显的改善。微管由中央区的微管组织中心一直伸展到细胞边缘附近,使细胞充分铺展并变扁平,近似于正常上皮细胞的形态。微丝束变粗壮,纵横交错,布满细胞周边的细胞质内。点状的肌动蛋白荧光明显减少。细胞内外的纤维粘连蛋白的荧光反应更加明显。本文并讨论了细胞增殖和细胞骨架系统之间的关系。

三磷酸腺苷对人胃癌细胞系MGC－803影响的电镜观察

用透射电镜和扫描电镜方法观察了三磷酸腺苷（ＡＴＰ）对人胃癌细胞系ＭＧＣ－８０３的影响，结果表明，ＡＴＰ能使ＭＧＣ－８０３细胞的核仁由网状向环状改变，微丝的组装得到改善，细胞表面微绒毛减少。提示ＭＧＣ－８０３细胞的恶性表型在ＡＴＰ作用下可向正常方向逆转。

银杏外种皮多糖对人癌细胞株的抑制作用及与阿霉素的协同效应

目的 :检测银杏外种皮多糖 (GBEP)的抗癌活性。方法 :采用噻唑蓝 (MTT)比色法 ,观察GBEP单用及与阿霉素合用在体外对人BEL 740 4肝癌细胞株、SGC 790 1胃腺癌细胞株及SPC A 1肺腺癌细胞株的抑制作用。结果 :GBEP在 10～ 32 0 μg/ml剂量下 ,体外作用 2 4～ 72h ,对 3种人癌细胞株皆具有抑制作用 ,其抑制率随剂量增加和时间延长而增加 ,而IC50 则随作用时间延长而减小。GBEP在 10～ 16 0 μg/ml剂量下 ,与 0 .4和 4.0 μg/ml的阿霉素合用 ,可提高对 3种人癌细胞的抑制率。结论 :GBEP单用对 3种人癌细胞株的抑制作用具有量效关系及时效关系 ;GBEP与阿霉素合用 ,对 3种人癌细胞株的抑制作用具有协同效应。

健脾化瘀方对胃癌MGC-803细胞侵袭转移相关基因表达的影响

目的探讨健脾化瘀方抑制人胃癌MGC-803细胞侵袭转移的作用机制。方法分别采用Real-time q PCR和Western Blot技术检测健脾化瘀方对胃癌MGC-803细胞侵袭转移基因转录和蛋白表达的影响。结果健脾化瘀方作用于人胃癌MGC-803细胞24h后,MMPs、VEGF随着给药浓度增加其mRNA和蛋白表达下降,RECK随着给药浓度增加其mRNA和蛋白表达上升,STAT3基因转录和蛋白表达未见明显变化,而p-STAT3蛋白表达量随着给药浓度增加下降。结论健脾化瘀方具有体外抑制MGC-803细胞侵袭转移的作用,其分子机制可能与抑制STAT3蛋白磷酸化和RECK基因转录、表达,进而影响下游VEGF、MMPs等有关。

金龙蛇颗粒对裸鼠原位移植人胃癌MKN-45细胞凋亡的影响

目的：评价金龙蛇颗粒对裸鼠原位移植入胃癌MKN-45细胞的抑制作用.方法：50只裸鼠建立原位移植人胃癌MKN-45细胞模型,随机分为模型组,金龙蛇颗粒高、中、低剂量组和5-FU干预组.各组裸鼠予以相应药物实施干预.观察各组荷瘤裸鼠一般情况,肿瘤生长情况及抑瘤率.流式细胞仪检测肿瘤细胞周期分布及细胞凋亡情况.采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V-fluorescein isothiocyanate/propidium iodide,Annexin V-FITC/PI）双标记染色法鉴别早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞和坏死细胞.电镜下观察肿瘤细胞的超微结构变化.结果：金龙蛇颗粒高、中、低剂量组的抑瘤率分别为68.13%、55.94%和50.31%,呈剂量依赖效应,与5-FU干预组抑瘤率比较,差异无统计学意义.金龙蛇颗粒各剂量组肿瘤细胞凋亡率为22.81%～38.54%,亦呈剂量依赖效应,且肿瘤细胞主要被阻滞于G0/G1期.AnnexinV-FITC/PI双标记染色结果显示,金龙蛇颗粒各剂量组以早期凋亡细胞居多,5-FU干预组则以晚期凋亡细胞和坏死细胞居多.结论：金龙蛇颗粒对裸鼠原位移植人胃癌MKN-45细胞具有较好的抑制作用,促进MKN-45细胞凋亡可能是其抗肿瘤治疗的主要作用机制之一.

人胃癌耐羟基喜树碱细胞株SGC-7901/HCPT的建立及其生物学性状

目的建立人胃癌耐羟基喜树碱细胞株即SGC-7901/HCPT,并对其生物学特性进行研究。方法采用浓度梯度递增法建立SGC-7901/HCPT;用细胞计数法描绘SGC-7901/HCPT和亲代细胞株即SGC-7901的生长曲线和群体倍增时间;用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测SGC-7901/HCPT对多种常用抗肿瘤药物的耐药特性;用流式细胞仪检测SGC-7901/HCPT与SGC-7901的细胞周期分布。结果历时9个月建成人SGC-7901/HCPT;SGC-7901/HCPT增殖减慢,倍增时间比SGC-7901延长8.2h;SGC-7901/HCPT对HCPT的耐药指数为9.583,与丝裂霉素(MMC)、5-氟脲嘧啶(5-Fu)、顺铂(CDDP)、长春新碱(VCR)、阿霉素(ADM)、柔红霉素(DNR)、足叶乙苷(VP-16)均无交叉耐药;SGC-7901/HCPT的S期和G2～M期的细胞比例比SGC-7901增多。结论本课题建立了SGC-7901/HCPT,其生物学特性不同于SGC-7901,具有耐药细胞株的基本生物学特性。

眼镜蛇毒细胞毒素在体外对人癌细胞的毒性作用(MTT法)

目的测定眼镜蛇毒细胞毒素（ＣＶ－ＣＴＸ）对人癌细胞株的细胞抑制作用，以期能简便准确地反映其抗癌活性。方法应用溴化二苯四偶氮盐（ＭＴＴ）法测定在ＣＶ－ＣＴＸ作用下体外培养的人胃癌细胞株（ＳＧＣ－７９０１）和人肝癌细胞株（ＳＭＣ）的存活情况和其量效关系。结果（１）ＳＭＣ、ＳＧＣ－７９０１的活细胞数与其分解ＭＴＴ的量成正线性关系。（２）ＣＶ－ＣＴＸ对ＳＭＣ、ＳＧＣ－７９０１癌细胞株的细胞抑制作用呈良好的量效关系，ＩＣ５０分别为２．４５和１．２４μｇ／ｍｌ。结论（１）用ＭＴＴ法测定癌细胞的增殖和衰减是可靠的。（２）应用ＭＴＴ法证实ＣＶ－ＣＴＸ对体外培养的人癌细胞的杀伤程度可作为其抗癌活性指标。

人胃癌耐药细胞株SGC-7901/HCPT的耐药机制初探

目的:探讨人胃癌耐羟基喜树碱细胞株即SGC-7901/HCPT的耐药机制。方法:通过光镜和电镜观测SGC-7901/HCPT与人胃癌细胞株即SGC-7901形态和超微结构差异和免疫细胞化学的方法检测SGC-7901/HCPT与SGC-7901之间的TOPO-Ⅰ、TOPO-Ⅱ、P-gp、GST-π、BCL-2表达异同来探讨SGC-7901/HCPT的可能耐药机制。结果:(1)光镜下SGC-7901/HCPT细胞大小不一致,形态不规则,胞浆较丰富,核小而不规则,可见巨核现象;而SGC-7901细胞呈圆梭形,大小一致,核圆形;电镜下SGC-7901/HCPT表面指状突起明显,胞浆内有较多的核糖体及粗面内质网,线粒体较多。(2)SGC-7901/HCPT的TOPO-Ⅰ表达较SGC-7901明显增加,差异具有显著性;而TOPO-Ⅱ、P-gp、GST-π、BCL-2的表达差异无显著性。结论:SGC-7901/HCPT趋向细胞成熟分化,这可能是其产生耐药的形态学表现。TOPO-Ⅰ的表达下降则可能是SGC-7901/HCPT耐HCPT形成的分子基础。

呫吨酮并吡啶衍生物XP-15抗人胃癌MGC-803细胞作用及其机制研究

目的研究呫吨酮并吡啶衍生物9-(2-吗啡啉乙酰胺基)-7H-吡啶并(4,3-c)呫吨-7-酮(XP-15)抗人胃癌MGC-803细胞的作用及其可能的机制。方法实验包括5个组,分别为空白对照组、5-氟尿嘧啶(5-FU)组、10μmol/L XP-15组、50μmol/L XP-15组和100μmol/L XP-15组。通过MTT法、细胞形态学和克隆实验观察XP-15对MGC-803细胞增殖的影响;应用Hoechest33258和PI双染法观察给药前后MGC-803细胞凋亡情况;用荧光分光光度计检测XP-15对细胞内钙Ca2+i及线粒体膜电位的影响;用RT-PCR检测Bad和金属硫蛋白1A(metallothionein 1A,MT-1A)mRNA的表达,比较给药前后的变化。结果 XP-15能明显抑制MGC-803细胞增殖,χ2=19.40,P<0.01;对MGC-803细胞克隆的抑制作用,呈剂量和时间依赖性,χ2=16.58,P<0.01。XP-15作用MGC-803细胞24h后,100μmol/L XP-15引起MGC-803细胞凋亡率为25.1%,明显高于空白对照组的9.4%,χ2=29.76,P<0.01。XP-15作用后,MGC-803细胞的Ca2+i(χ2=165.81,P<0.01)和线粒体膜电位(χ2=830.77,P<0.01)降低,Bad和MT-1A mRNA表达增加明显。结论 XP-15能诱导MGC-803细胞凋亡,其机制可能是通过降低MGC-803细胞Ca2+i和线粒体膜电位以及上调MT-1A表达来实现的。

靶向端粒G-四链体手性钌配合物的抗肿瘤活性研究

[目的]研究手性钌配合物Λ-[Ru(bpy)2(pyip)]2+(Λ-OMe)、Δ-[Ru(bpy)2(pyip)]2+(Δ-OMe)及其外消旋化合物[Ru(phen)2p-MOPIP]2+(dl-OMe)在体外实验中的抗肿瘤活性。[方法]3种配合物分别作用于人胃癌细胞株(MGC-803),人结肠癌细胞株(Colo205),人乳腺癌细胞株(MCF-7),人肺腺癌上皮细胞株(A549),人肝癌细胞株(Hep G2),人舌鳞状细胞癌株(SCC-9)48 h,以人胃黏膜上皮细胞株(GES-1)为正常对照细胞株,顺铂为阳性对照药物,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法筛选出其中半抑制浓度(IC50)最小的药物和药敏作用最好的肿瘤细胞。筛选出药物和肿瘤细胞后,再用MTT法测定24、48、72 h相应药物对肿瘤细胞的抑制作用;Hoechest33342染色法测定其对肿瘤细胞的凋亡诱导作用。[结果]MTT法筛选出Λ-OMe对胃癌MGC-803细胞的增殖抑制作用最好,即(IC50)最小,在作用48 h的半数抑制浓度为:7.4 mg/L,且呈现很好的时间和剂量依赖性。Hoechest33342染色显示,在药物处理48 h后,随着药物浓度增加,药物促凋亡作用越明显。[结论]手性钌配合物具有良好的抗肿瘤活性,其中以Λ-OMe抗肿瘤活性最好。

雷公藤内酯对人胃癌细胞株FGC_(85)杀伤作用的光镜和电镜观察

本文应用核苷掺入技术及电镜观察首次证实雷公藤内酯对人胃癌细胞株 FGC_(85)的杀伤作用。用药早期,细胞数,分裂指数及 DNA,RNA 合成无明显变化,但出现核仁脱粒及核仁破碎等变化;晚期,电镜观察发现细胞以凋落方式死亡,药物主要作用于间期细胞,其杀伤机构的始动环节可能与核酸代谢障碍无关。

环六亚甲基二乙酰胺对G1期人胃癌MGc－803细胞理化的影响

环六亚甲基二乙酰胺（ＨＭＢＡ）作为一种诱导分化剂，最早用于小鼠红白血病细胞（ＭＥＬＣ）的诱导分化。用ＨＭＢＡ研究人胃癌细胞的诱导分化效应，将有助于了解各种癌症及白血病的发病机理。以人胃癌Ｇ１期ＭＧｃ－８０３细胞经５ｍｍＨＭＢＡ培养液处理后，细胞内环腺苷酸（ｃＡｍｐ）及蛋白激酶Ａ（ＤＫＡ）活性上升，而二酰基甘油（ＤＧ）水平及蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性下降，提示ＨＭＢＡ对细胞诱导分化作用与细胞内信号传导通路密切相关，而ＲＮＡ印迹分析表明经ＨＭＢＡ处理后，Ｒｂ基因表达增高，Ｍｙｃ基因表达下降，表明ＨＭＢＡ可能通过调节两套信使系统而调节细胞基因表达。

姜黄素通过磷酸肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路对胃癌细胞的调控研究

目的研究姜黄素对人胃癌细胞磷酸肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路的调控作用。方法选取对数生长期的胃癌MGC-803细胞随机分为对照组和低、中、高剂量实验组。对照组加入含等体积二甲基亚砜的DMEM培养液;低、中、高剂量实验组分别给予含5,10和20 mg·L^-1姜黄素的DMEM培养液。用噻唑蓝法检测细胞的增殖情况,用Western Blotting法检测p-PI3K及p-AKT蛋白表达水平。结果与对照组相比,低、中、高剂量实验组分别在第12,9和6 h时出现了显著的增殖抑制。对照组和低、中、高剂量实验组的p-PI3K分别为(2.28±0.54),(1.48±0.69),(1.14±0.58)和(0.58±0.33),p-AKT分别为(2.21±0.77),(1.17±0.67),(0.95±0.33)和(0.58±0.34),对照组的上述指标与低、中、高剂量实验组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论姜黄素可抑制胃癌细胞MGC-803的增殖,且呈浓度依赖性,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。

胃癌组织中STAT活化抑制蛋白1表达及意义

目的探讨胃癌组织中STAT活化抑制蛋白1(PIAS1)表达及意义。方法选取2019年9月至2021年3月间我院经胃镜检查的120例胃癌组织标本和40例非萎缩性胃炎组织标本,采用免疫组化染色观察标本组织中PIAS1表达水平。构建重组腺病毒载体AD5-F35-PIAS1、AD5-F35-PIAS1-siRNA和AD5-F35-Null,使用白细胞介素-6(IL-6)(100ng/ml)条件培养基模拟胃癌炎症微环境,分别转染人胃癌细胞株MGC-803,分为IL-6组、空载体组、PIAS1上调组和PIAS1下调组。结果检测结果显示,非萎缩性胃炎组织中未见PIAS1阳性表达,低分化胃组织中PIAS1低表达,中高分化胃组织中PIAS1高表达。PIAS1下调组胃癌细胞增殖率增高;PIAS1下调组迁移、侵袭的胃癌细胞数增多,差异均有统计学意义(均P<0.05)。PIAS1下调组胃癌细胞中钙粘附蛋白E表达水平较IL-6组和空载体组明显下降,波形蛋白和p-P38MAPK表达水平明显提升,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论PIAS1表达水平与胃癌组织恶性程度呈负相关;在炎症微环境下,PIAS1高表达可通过抑制胃癌细胞发生上皮―间质转化来降低细胞的增殖、迁移和侵袭能力。