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Expression of a Hybrid Human Superoxide Dismutase with a High Affinity for Heparin
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作者 GOU Xiao-jun, YIN Shao-man, KONG Xiang-duo, ZHU Shi-zhen WANG Xiao-ping, ZHANG Hong-ying and ZHANG Jin Key Laboratory for Molecular Enzymology and Engineering of Ministry of Education, Jilin University, Changchun 130023, P. R. ChinaZHU HongThe Jilin Provi 《Chemical Research in Chinese Universities》 SCIE CAS CSCD 2002年第1期20-24,共5页
A designed heparin-affinity of human Cu, Zn-SOD is described. The natural leader peptide of P.leiognathi Cu, Zn-SOD and a heparin-binding peptide containing a stretch of 7 Arg were fused to the N-terminal and the C-te... A designed heparin-affinity of human Cu, Zn-SOD is described. The natural leader peptide of P.leiognathi Cu, Zn-SOD and a heparin-binding peptide containing a stretch of 7 Arg were fused to the N-terminal and the C-terminal of human Cu, Zn-SOD respectively. The resulted hybrid enzyme had not only a normal SOD activity but also a high affinity for heparin eluted on the heparin-Sepharose column at 0.4 mol/L NaCl. Some properties, such as the optimum pH, the thermostability and the half-life in the circulation of rats, were also analyzed. 展开更多
关键词 human superoxide dismutase heparin affinity gene expression
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重组人超氧化物歧化酶的基因克隆、表达及产物纯化研究 被引量:18
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作者 张翊 王军志 吴勇杰 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期557-560,共4页
为了克隆人SODcDNA ,构建表达载体 ,实现其在大肠杆菌中的高效稳定表达 ,通过抽提人肝组织总RNA ,RT PCR扩增人SODcDNA ,构建含rhSODcDNA的表达质粒pLY 4/rhSOD ,转化大肠杆菌JF112 5进行表达研究。结果克隆到的rhSODcDNA序列与文献报... 为了克隆人SODcDNA ,构建表达载体 ,实现其在大肠杆菌中的高效稳定表达 ,通过抽提人肝组织总RNA ,RT PCR扩增人SODcDNA ,构建含rhSODcDNA的表达质粒pLY 4/rhSOD ,转化大肠杆菌JF112 5进行表达研究。结果克隆到的rhSODcDNA序列与文献报道一致 ,在宿主菌中获得高效表达 ,表达水平达 6 8%以上 ;蛋白复性纯化工艺高效快速 ,rhSOD纯品纯度达 98%以上 ,比活性达到 2 5 2 9u/mg ; 展开更多
关键词 rhSOD 基因克隆 基因表达 包含体 复性 纯化
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人Cu,Zn-SOD在酵母系统中的表达 被引量:7
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作者 施惠娟 陈哲宇 +3 位作者 李明峰 魏东芝 吴祥甫 袁勤生 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期601-603,共3页
甲醇酵母 (Pichia pastoris)是一种理想的真核蛋白高水平表达系统。将人 Cu,Zn- SOD基因克隆到酵母整合型质粒载体 p PIC3.5K,经转化 his4缺陷型酵母 GS1 1 5,用 MD培养基及 PCR方法筛选阳性转化子 ,并用含 G41 8的 YPD培养基筛选多拷... 甲醇酵母 (Pichia pastoris)是一种理想的真核蛋白高水平表达系统。将人 Cu,Zn- SOD基因克隆到酵母整合型质粒载体 p PIC3.5K,经转化 his4缺陷型酵母 GS1 1 5,用 MD培养基及 PCR方法筛选阳性转化子 ,并用含 G41 8的 YPD培养基筛选多拷贝转化子 ,经甲醇诱导表达。 SDS-PAGE和蛋白质印迹杂交结果证实了表达产物为重组的人 Cu,Zn- SOD,经计算机扫描分析 ,表达量占酵母可溶性蛋白的 1 4% ,所表达的人 Cu,Zn- SOD比活可达每毫克蛋白质 77U。 展开更多
关键词 人Cu Zn-SOD 甲醇酵母 基因表达 蛋白质印迹
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突变的人铜、锌超氧化物歧化酶基因的克隆、测序及表达 被引量:4
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作者 施惠娟 孙建新 +3 位作者 范立强 魏东芝 吴祥甫 袁勤生 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 1999年第3期109-112,共4页
目的:通过基因工程的方法将rhCu,Zn-SOD cDNA基因改造以得到更加稳定的酶。方法:以本实验室构建的 rhCu,Zn-SOD cDNA为模板,利用含有突变核苷酸的引物进行 PCR扩增,将正确测定的含 rhCu, Z... 目的:通过基因工程的方法将rhCu,Zn-SOD cDNA基因改造以得到更加稳定的酶。方法:以本实验室构建的 rhCu,Zn-SOD cDNA为模板,利用含有突变核苷酸的引物进行 PCR扩增,将正确测定的含 rhCu, Zn-SOD突变(rhCu,Zn-MSOD)基因的重组质粒重组到表达载体PET-22b(+)中,重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中表达rhCu,Zn-MSOD。结果:表达产物占菌体总蛋白的38%,具有特异性SOD酶活性。结论:从基因突变的角度改善酶的性能不仅具有理论意义,又有一定的实用价值。 展开更多
关键词 超氧化物歧化酶 PCR 基因突变 rhCu Zn-MSOD
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人CuZn-SOD的分子改造及在毕赤酵母中的表达 被引量:1
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作者 曲和之 杜姗姗 +3 位作者 郝东云 张雷 黄露 王晓平 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2008年第7期1390-1392,共3页
为了改善人CuZn-SOD的酶学性质,在借鉴人细胞外超氧化物歧化酶的特性基础上,利用分子生物学技术,在人CuZn-SOD的C末端加入肝素亲和肽构建了人CuZn-SOD工程酶,并在毕赤酵母中获得表达,经纯化的工程酶具有较强的肝素亲和性.
关键词 人铜锌超氧化物歧化酶 肝素亲和性 分子改造 工程酶
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人铜锌超氧化物歧化酶的基因工程研究 Ⅱ.人铜锌超氧化物歧化酶在大肠杆菌中的表达 被引量:8
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作者 赵敏顺 高必峰 +6 位作者 王惠媛 徐晓石 刘自立 吴晓林 饶欣欣 刘晓琳 李战青 《基础医学与临床》 CSCD 1990年第4期23-26,共4页
利用pUC 8为载体质粒,将合成的人Cu/Zn SOD基因置于Lac Z启动子的调控下,构建了含有该基因的表达质粒pCZS Ⅰ。首次成功地在大肠杆菌中表达了合成人Cu/Zn SOD的基因。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳薄层扫描分析证明,SOD基因的表达产物占细胞可... 利用pUC 8为载体质粒,将合成的人Cu/Zn SOD基因置于Lac Z启动子的调控下,构建了含有该基因的表达质粒pCZS Ⅰ。首次成功地在大肠杆菌中表达了合成人Cu/Zn SOD的基因。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳薄层扫描分析证明,SOD基因的表达产物占细胞可溶性蛋白质的13%左右,用光扩增法捡测表达产物的酶活性,每毫克蛋白质为48.6 McCord Fridovich单位。 展开更多
关键词 人Cu/ZnSOD 基因工程 基因表达
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