上皮源性恶性肿瘤患者p16/MTS1抑癌基因失活研究

以不同种类的上皮源性恶性肿瘤患者为研究对象 ,分析肿瘤组织中p1 6 /MTS1基因纯合缺失、异常甲基化和表达缺失。发现 p1 6基因纯合缺失率为 1 4% ( 1 5 /1 0 8) ;异常甲基化检出率为 1 4% ( 8/5 8) ;p1 6蛋白表达缺失率为4 4% ( 2 8/6 3) ;按组织学分级 ,中、低分化组 p1 6蛋白表达缺失率显著高于高分化组 (P <0 .0 5 )。p1 6基因失活患者普遍预后差。肺癌、食管癌患者 p1 6基因失活者 1 7例 ,手术后 6个月内 6例死亡 ,1例转移 ;p1 6基因发生缺失和异常甲基化的 6例膀胱癌患者中 4例复发。研究结果表明 ,p1 6基因失活在上皮源性恶性肿瘤患者中是较为常见的基因变化 ,与患者的病理分级和预后有密切关系。

宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中人乳头状瘤病毒感染与P16基因表达的关系

目的研究宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒(HPV)感染与抑癌基因P16表达的关系。方法采用免疫组织化学法检测35例宫颈癌、45例子宫上皮内瘤变(CIN)和30例慢性宫颈炎组织的P16基因的表达情况,同时采用PCR-反向杂交法对其宫颈细胞进行HPV分型检测。结果从慢性宫颈炎、CIN到宫颈癌,各组病例HPV的感染率和P16基因的表达率均呈递增趋势,CIN组和宫颈癌组HPV感染率和P16基因的表达率显著高于慢性宫颈炎组,差异有统计学意义(P<0.01)。在CIN与宫颈癌病例组织中,P16基因的表达率与HPV感染率呈正相关(r=0.98,P<0.05)。结论在CIN、宫颈癌发生发展过程中,HPV感染和P16基因表达均发挥重要作用,而且HPV感染是导致P16基因高表达的原因之一。

乳头瘤病毒L1衣壳蛋白及p16INK4A基因在子宫颈病变中的表达及其相关性

目的研究乳头瘤病毒衣壳蛋白（HPVL1）及p16INK4A基因在子宫颈病变患者中的表达与相关性。方法采用免疫组织化学Max-Vision法检测210例HPV阳性液基细胞学标本及组织中HPVL1蛋白及p16INK4A的表达。结果在各级液基细胞学标本中，HPVL1蛋白阳性率各组比较差异有统计学意义（χ2=70．50、P〈0．005），其中低度鳞状上皮内病变（LSIL）组最高[68％（34／50）]；p16INK4A表达阳性率随着病变级别的增高逐渐增高（13％、28％、52％、100％、100％），在子宫颈癌（SCC）组最高[100％（30／30）1。HPVL1＋p16INK4A率在LSIL组中最高[32％（16／50）]；HPVL1-p16INK4A率在SCC组最高[100％（30／30）]。在各级别病理组织中，HPVL1蛋白表达阳性率不同，差异有统计学意义（χ2=54．37、P〈0．005），其中，CINI级中最高[60．4％（32／53）]；p16删表达阳性率随着病变级别的增高逐渐增高，在子宫颈癌组最高[100％（28／28）]。HPVL1-p16INK4A在CINI级中最高[45．3％（24／53）]；HPVL1-p16INK4A率在子宫颈癌中最高[100％（28／28）]。结论HPVL1蛋白与p16眦“联合检测可以区分不同的子宫颈病变，将有潜在发展与有自愈可能的病例分开，避免漏诊与过度治疗。

辐射诱导表达载体pEgr-p16的构建及其体外蛋白表达的研究

目的构建辐射诱导表达载体pEgrp16并研究其体外稳定转染联合60Coγ射线照射对人宫颈癌HeLa细胞p16蛋白表达变化的影响。方法利用双酶切、粘端连接的方法构建了含有辐射诱导特性的早期生长反应因子Egr1和p16的pEgrp16的质粒载体,以脂质体介导的方法,将重组载体导入人HeLa细胞,采用免疫细胞化学和流式细胞术的方法检测照射转染后的HeLa细胞p16蛋白表达的变化。结果经全自动测序证明辐射诱导表达载体pEgrp16构建正确;稳定转染可见有明显的p16表达增强;5Gy以内p16蛋白表达呈剂量依赖性的增加,在2Gy照射后2hp16蛋白表达水平即开始增高,4h达到最高,12h趋于正常水平。结论本研究成功构建了辐射诱导表达载体pEgrp16,在HeLa细胞中蛋白表达明显增强。

喉癌和喉乳头状瘤与HPV感染和P16蛋白的关系

目的:探讨人类乳头状瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)感染和抑癌基因P16的失活与喉癌(Laryneal carcinoma,LC)和喉乳头状瘤(Laryngeal papilloma,LP)发生的相关性,以进一步阐明LC和LP的病因和发病机理。方法:收集LP 46例[其中成人型喉乳头状瘤(ALP)21例,青少年型喉乳头状瘤(JLP)25例]、LC 26例、癌旁正常组织6例、声带小结15例,用标记的HPV_(1,6,8,11,13,16,18,30,31,32,33,45,51)通用引物直接法原位PCR方法和免疫组化(SP法)方法分别检测HPV-DNA和P16蛋白。结果:1、HPV阳性率JLP组(84%,21/25)显著高于ALP组(38.1%,8/21)、LC组(19.2%,5/26)、声带小结组(0%,0/15)和癌旁组织组(0%,0/6)(卡方检验,P<0.05);而ALP组、LC组、声带小结组和癌旁组织组之间HPV阳性率无显著差别(卡方检验或Fisher’s精确概率法,P>0.05)。2、P16蛋白的阳性率ALP组(57.1%,12/21)和LC组(38.5%,10/26)均显著低于JLP组(88%,22/25)、癌旁组织组(100%,6/6)和声带小结组(93.3%,14/15)(卡方检验,P<0.05);ALP组和LC组之间及JLP组和声带小结组之间P16蛋白阳性率无显著差别(卡方检验,P>0.05)。3、LP中P16蛋白的阳性率在HPV阳性和阴性组中有显著差别(x^2检验,P<0.05);喉癌中P16蛋白的阳性率在HPV阳性组和阴性组中无显著差别(Fisher’s精确概率法,P>0.05)。结论:青少年型喉乳头状瘤的发生与HPV感染密切相关而与抑癌基因P16的失活无明显相关。成人型喉乳头状瘤和喉癌的发和与HPV感染可能无明显关系,而与抑癌基因P16的失活密切相关。HPV感染和P16基因失活在致瘤过程中无明显协同作用。