灵菌红素对耐阿霉素人乳腺癌细胞MCF-7/ADR的作用研究

目的探讨灵菌红素对耐阿霉素人乳腺癌细胞MCF-7/ADR的作用。方法采用平板发酵粘质沙雷氏菌WA12-1-18生产灵菌红素,CCK-8测定灵菌红素的体外活性及MCF-7/ADR的耐药指数。构建裸鼠皮下移植瘤模型,灵菌红素高、低剂量组分别腹腔注射5.0、2.5 mg/kg灵菌红素,生理盐水对照位腹腔注射等体积生理盐水,每4天1次,连续用药24 d,观察移植瘤的体积、质量及裸鼠体质量,HE染色观察移植瘤组织及裸鼠主要脏器的病理情况,免疫组织化学检测移植瘤Ki-67的表达。结果获得的灵菌红素质量分数为95.18%,对MCF-7和MCF-7/ADR的IC50分别为0.484μg/mL和0.264μg/mL。MCF-7/ADR耐药指数13,符合细胞耐药株的要求。灵菌红素处理组裸鼠移植瘤增长速度较生理盐水组慢,肿瘤细胞排列稀疏,核小且着色较浅,Ki-67染色后棕色明显减少。灵菌红素2.5 mg/kg组和灵菌红素5 mg/kg组,在荷MCF-7/ADR裸鼠中抑瘤率分别为37.23%和53.72%。另外,各组裸鼠体质量差异无统计学意义,主要脏器无明显病理变化。结论灵菌红素可抑制裸鼠体内耐阿霉素人乳腺癌细胞MCF-7/ADR的生长,对心、肝、脾、肺和肾等主要脏器无明显毒副作用,为灵菌红素在耐阿霉素乳腺癌的临床应用提供了实验依据。

滋阴补脾方对人结肠癌裸鼠移植瘤的抑制作用机制研究

目的:探讨滋阴补脾方对人结肠癌裸鼠移植瘤的抑制作用机制。方法:4周龄BALB/c雌性裸鼠20只,制备人结肠癌裸鼠模型,按照随机数字表法分随机分为4组,每组5只。对照组注射等量生理盐水,化疗药物组腹腔注射氟尿嘧啶,中成药组灌胃中药汤剂10 mL,联合用药组:每只裸鼠腹腔注射氟尿嘧啶联合灌胃中药汤剂。1次/d,均连续应用4 d,至第14天处死动物收集标本。测量各组肿瘤重量、肿瘤体积和体积抑瘤率;采用蛋白质印迹法测定CD113、CD116和P53蛋白表达。结果:与对照组比较,化疗药物组、中成药组和联合用药组肿瘤重量、肿瘤体积、CD113和CD116表达明显降低,肿瘤体积抑瘤率和P53表达明显升高(P<0.05);化疗药物组和联合用药组肿瘤重量、肿瘤体积、CD113和CD116表达低于中成药组,肿瘤体积抑瘤率和P53表达高于中成药组(P<0.05);联合用药组肿瘤重量、肿瘤体积、CD113和CD116表达低于化疗药物组,肿瘤体积抑瘤率和P53表达高于化疗药物组(P<0.05)。结论:滋阴补脾法可抑制人结肠癌HT29裸鼠移植瘤生长,认为其机制可能与下调CD113和CD116表达及上调P53表达有关。

烯二炔类新抗生素C1027的抗肿瘤作用研究

从我国湖北潜江县土壤分离的一株链霉菌产生的Ｃ１０２７是大分子肽类抗生素，其发色基团是新的烯二炔化合物。研究表明，抗生素Ｃ１０２７对肿瘤细胞有强烈杀伤作用。Ｃ１０２７在精原细胞法检测中显示高度活性，比阿霉素、丝裂霉素Ｃ等强５００倍。由发色基团和蛋白质两部分构成的Ｃ１０２７分子可以拆分与重建；而重建的Ｃ１０２７分子同样具有很强的活性。在可耐受剂量，Ｃ１０２７对移植性小鼠结肠癌２６以及对移植于裸鼠的人体肝癌和盲肠癌均有显著的疗效。

阻断PD-L1/PD-1途径增强顺铂化疗效果的实验研究

目的:探讨抗PD-1抗体阻断PD-L1/PD-1途径对顺铂的抗肿瘤效应以及抗肿瘤免疫力的影响。方法:建立TC-1肿瘤细胞C57BL/6小鼠模型,分为4组(n=4),绘制肿瘤生长曲线及小鼠生存曲线,并取肿瘤组织,免疫组化法检测肿瘤组织中PD-L1、CD8^+T细胞的表达。结果:(1)顺铂组、PD-1组及联合用药组均可显著抑制肿瘤生长及延长小鼠生存时间,联合用药组效果最为明显(P<0.05)。(2)顺铂组肿瘤组织PD-L1表达显著增加,联合用药组PD-L1表达显著下降(P<0.05)。(3)顺铂组肿瘤组织中CD8^+T细胞减少,联合用药组CD8^+T细胞表达显著增加(P<0.05)。结论:PD-1抗体阻断PD-L1/PD-1通路联合顺铂可提高机体抗肿瘤免疫,发挥免疫细胞抗肿瘤效应,增强顺铂的化疗效果。

中药合剂“振明正生”对三株人肿瘤细胞裸鼠移植瘤抑制作用的观察

目的:观察中药合剂"振明正生"(ZMZS)对人肿瘤细胞的抑制作用。方法:BALB/c裸鼠分别接种人白血病细胞系(K562)、鼻咽癌细胞系(CN1)和胰腺癌细胞系(P3),2×106/只。接种后24小时开始给药,实验组裸鼠每天口服中药合剂0.2ml/只,连续4周。对照组裸鼠口服生理盐水0.2ml/只。每周测量动物肿瘤大小,计算肿瘤生长抑制率。结果:经过3或4周的治疗,中药合剂"振明正生"对K562、CN1和P3有明显抑制作用。结论:中药合剂"振明正生"对三株人肿瘤细胞裸鼠移植瘤有显著的治疗效果。

人脑转移癌组织裸小鼠脑内移植模型的建立

目的建立人肺腺癌脑转移瘤的裸小鼠原位移植模型，并分析移植瘤的生物学特征。方法取人肺腺癌脑转移瘤组织块，接种于裸小鼠右尾状核。致瘤后即用裸小鼠的瘤组织进行其原位传代接种，观察致瘤率及荷瘤鼠生存期；MRI观察移植瘤在鼠脑内的大体形态；HE染色分析各代移植瘤的组织学形态；免疫组化染色观察移植瘤中CEA的表达；Alcian blue／PAS特殊染色检测移植瘤中粘液的性质。结果移植瘤组织在裸小鼠右尾状核已连续传至6代，共65只鼠。荷瘤鼠生存期：原代为（47．6±1．8）d，2～3代有所缩短，4～6代稳定在（38．0±0．9）d；移植瘤MRI类圆形，瘤周无水肿。移植瘤病理为低分化腺癌，不向周围正常鼠脑组织浸润；移植瘤中CEA表达阳性，有酸性粘液存在。结论人肺腺癌脑转移瘤组织块接种于鼠脑内建立的原位移植模型能更好地模拟临床原发肿瘤的病理学特征，本方法为研究人肺腺癌脑转移瘤的生物学特性及实验治疗提供了一个可靠的动物模型。

埃坡霉素B对A549人肺腺癌细胞的体内外抗肿瘤药效学研究

目的:观察埃坡霉素B在体内外对A549人肺腺癌细胞生长的抑制作用。方法:用MTT法观察埃坡霉素B体外作用72h对A549人肺腺癌细胞增殖的抑制作用;用A549人肺腺癌裸鼠移植瘤模型评价埃坡霉素B在1.0、0.5、0.25mg/kg剂量下,给药2~3次后的体内抗肿瘤活性。结果:实验结果显示,埃坡霉素B在体外对人肺腺癌细胞A549抑制作用的IC50为(0.53±0.11)nmol/L,实际检测的最大抑制率为68.6%。体内实验表明受试物对A549人肺腺癌裸鼠移植瘤具有较强的抑制作用,并呈现出良好的剂量依赖性。给予1.0、0.5、0.25mg/kg受试物,第一次实验,其对A549裸鼠移植瘤的抑制率分别为78.6%、58.8%和48.3%;第二次实验,其对A549裸鼠移植瘤的抑制率分别为84.2%、76%和68.2%。阳性药物紫杉醇15mg/kg多次给药的抑瘤率分别为56.0%和85.7%。结论:埃坡霉素B在体内外对A549人肺腺癌具有较强的抑制作用。

重组人血管内皮抑制素注射液联合冷冻消融治疗肺腺癌A549移植瘤的实验研究

目的探讨重组人血管内皮抑素注射液(商品名:恩度)联合冷冻消融对肺腺癌A549移植瘤的抑制作用及机制。方法建立肺腺癌A549裸鼠皮下移植瘤模型24只,待肿瘤最大直径达1 cm时,随机分为对照组、血管内皮抑素组、冷冻消融组和血管内皮抑素联合冷冻消融组(联合治疗组)。治疗后第21天处死裸鼠,取肿瘤组织,测量肿瘤体积,采用末端标记法(TUNEL)原位检测周边冷冻损伤区带细胞凋亡,免疫组化SP法检测肿瘤组织微血管密度(MVD)、血管内皮生长因子(VEGF)表达水平。结果治疗后第21天,对照组、血管内皮抑素组、冷冻消融组和联合治疗组的肿瘤生长速率分别为236.68%±51.23%、220.02%±30.61%、159.46%±29.33%和103.34%±25.50%,组间差异有统计学意义(P<0.01);肿瘤细胞凋亡率分别为21.67%±2.34%、22.17%±1.47%、38.33%±1.37%和49.17%±1.72%,组间差异有统计学意义(P<0.01)。联合治疗组的MVD、VEGF表达水平均明显低于其他各组(P<0.01)。MVD与VEGF之间呈正相关关系(r=0.925,P<0.01)。结论血管内皮抑素可明显提高冷冻消融对肺腺癌A549移植瘤的抑制效果,其机制可能与血管内皮抑素通过下调VEGF表达水平,从而抑制肿瘤新生血管形成,协同冷冻消融促进肿瘤细胞凋亡有关。

基于人源化免疫重建的患者来源肿瘤组织异种移植模型的研究进展

将患者的肿瘤组织移植于免疫缺陷小鼠体内建立的肿瘤移植模型(patient-derived xenograft, PDX)较好地保留了原发瘤的生物学特性,但瘤组织基质成分会在小鼠体内传代过程中逐渐被鼠源性基质代替,缺乏免疫系统的小鼠体内环境也会改变肿瘤的微环境,原发肿瘤的异质性会逐渐丢失,从而限制了该类模型的应用;将人的造血干细胞(hematopoietic stem cells, HSCs)移植于低剂量X线全身照射或其他方法清理骨髓的重度免疫缺陷小鼠,然后再将患者的瘤组织移植于该小鼠建立的人源化肿瘤模型(humanized patient-derived xenograft, Hu-PDX),具有与人相似的免疫系统,可以更好的保留原发瘤的异质性。研究证实人的HSCs在小鼠体内可以产生各种免疫细胞,使肿瘤生长微环境与人体更相似,更好的保留了肿瘤的异质性,为肿瘤的个体化研究提供了良好的动物模型。

RNA干扰Tb人舌癌细胞整合素连接激酶基因表达可抑制移植瘤生长

目的研究对Tb舌癌细胞的整合素连接激酶(ILK)进行特异性siRNA沉默后,下游信号分子Akt、GSK3β磷酸化状态及对移植瘤生长和自发性转移的变化。方法建立特异性si ILK表达载体和无同源性的对照载体,通过Lipofectamine 2000介导稳定转染人舌鳞癌Tb细胞,然后将Tb、Tb vector和Tb silk 3组细胞分别注入裸鼠皮下构建移植瘤模型,5周后检测瘤大小和质量,对裸鼠肺及瘤组织行常规病理学检查,用免疫荧光技术检测癌细胞的p-Akt和p-GSK3β等的表达,并对瘤组织内血管生成情况进行观察。结果 Tb组、Tb vector组肺组织均发现自发性转移瘤,Tb si ILK组肺组织未发现自发性转移瘤;Tb si ILK组移植瘤细胞形态较其他二组体积减小,核分裂相较少,核质比例缩小;Tb si ILK组在体内和体外实验中的p-Akt和p-GSK3β表达较其他二组均明显下降;Tb si ILK组移植瘤质量(1.68±1.35)g较Tb组(3.58±1.04)g与Tb vector组(3.64±0.65)g分别降低了53.0%和53.8%(P<0.05);Tb si ILK组移植瘤血管[(5.6±2.2)/视野]生成较Tb组[(15.3±2.3)/视野]和Tb vector组[(14.6±1.4)/视野]也明显减少(P<0.05)。结论特异性ILK表达沉默抑制Tb舌癌移植瘤的血管生成和瘤细胞增殖,可能与其抑制下游信号传导分子Akt及GSK3β的磷酸化有关,提示ILK有望成为肿瘤治疗的靶基因。

特异性抗前列腺癌多肽抑制前列腺癌细胞生长的作用研究

背景与目的本实验组根据PSA具有的肿瘤定位及丝氨酸蛋白酶活性,设计并已获得了包含促细胞凋亡的BH3结构域[2-5]、抗肿瘤血管形成的VEGF拮抗肽K237[6]和bFGF拮抗肽DG2[7]结构域以及可被PSA特异性水解短肽的复合型多肽APP216的纯化蛋白,并运用细胞培养初步验证了其在体外对前列腺癌细胞的杀伤作用,本文进一步探讨该多肽对人前列腺癌肿瘤异种移植物的杀伤作用,为抗前列腺癌新药的研究奠定基础。方法利用检测荷瘤裸鼠血清PSA浓度、各组荷瘤裸鼠肿瘤体积、重量变化、各组荷瘤裸鼠治疗前后体重的变化以及病理组织学观察来评估包含有BH3、K237、DG2结构域和能被PSA特异性水解的短肽序列的多肽药物APP216对分泌PSA的前列腺癌细胞系22RV1荷瘤裸鼠及不分泌PSA的前列腺癌细胞系PC3荷瘤裸鼠的肿瘤细胞杀伤作用。结果前列腺癌细胞22RV1的荷瘤裸鼠治疗后比治疗前血清PSA浓度下降了71.1%、肿瘤体积下降51%,治疗组肿瘤重量比对照组低52%,组织病理学观察镜下可见坏死瘤组织。而前列腺癌细胞PC3的荷瘤裸鼠治疗组肿瘤重量与对照组无明显差别;治疗前后肿瘤体积变化无统计学意义,组织病理学观察癌细胞生长活跃。所有裸鼠重要脏器均未见病理损伤。结论APP216多肽对分泌PSA的前列腺癌细胞荷瘤裸鼠具有良好的抑制瘤细胞增殖的作用。而对于不分泌PSA的前列腺癌细胞荷瘤裸鼠抑瘤效果不佳。并且该蛋白对其他重要脏器无毒性。

人肿瘤干细胞异种移植模型进展

人肿瘤干细胞(human cancer stem cells,CSCs)分离后异种移植至模型内的成瘤特性,为研究肿瘤病因学和制订抗癌策略提供了新的手段和方法。但是,目前人肿瘤干细胞的鉴别离不开移植至异种免疫缺陷鼠内建立肿瘤干细胞的动物模型。本文主要从CSCs的概念、CSCs与肿瘤的关系、CSCs异种移植模型研究进展、模型建立的影响因素、模型建立存在的问题等进行简要综述,为异种移植模型的建立提供参考。

帕瑞昔布对人结肠癌SW1116细胞裸鼠移植瘤生长的影响及安全性观察

目的观察帕瑞昔布对人结肠癌SW1116细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用及安全性。方法建立人结肠癌SW1116细胞裸鼠皮下移植瘤模型。将24只BALB/C裸鼠随机分为对照组、帕瑞昔布组和5-Fu组。记录各组裸鼠的体重和瘤体积变化,用药30 d后取瘤及脾脏,计算脾脏指数、抑瘤率,检测血清ALT和BUN,并用透射电镜观察瘤组织的形态学变化。结果帕瑞昔布组未见明显的药物相关毒副反应。帕瑞昔布能抑制SW11 16细胞裸鼠皮下移植瘤的生长。在干预前18 d,帕瑞昔布组的肿瘤抑制率逐渐增加,但随着药物干预时间的延长,抑制率却逐渐降低。结论裸鼠体内短期应用帕瑞昔布（15~18 d）是安全的,并能抑制SW1116细胞皮下移植瘤的生长。

^(125)I放射性粒子对人食管癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用研究

目的:观察125I粒子植入对人食管癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用。方法:采用雄性BALB/C裸小鼠建立人食管癌Eca-109细胞株的裸鼠皮下移植瘤模型,将荷瘤鼠随机分为5组(每组5只):对照组(A组)、假手术组(B组)、低剂量组(C组,植入7.4×106Bq粒子1枚)、中剂量组(D组,植入14.8×106Bq粒子1枚)和高剂量组(E组,植入29.6×106Bq粒子1枚)。第30天检测各组移植瘤体积,并观察各组移植瘤组织病理学变化。结果:C、D、E组瘤体积与A组比较显著缩小,差异均有统计学意义(P<0.05),D、E组瘤体积与C组瘤体积相比均有统计学意义(均P<0.05),但D、E组之间瘤体积相比差异无统计学意义(P>0.05)。B组和A组瘤体积相比差异无统计学意义(P>0.05),C、D、E植入后30d肿瘤体积抑瘤率分别为71.5%、90.8%、92.1%。结论:125I粒子对人食管癌裸鼠移植瘤具有一定的抑制和杀伤作用。

肌氨酰胺亚硝脲在荷神经元外单胺递质载体和DNA修复基因表达的人肺癌裸鼠中的抗肿瘤作用

目的 探讨抗癌新药肌氨酰胺亚硝脲 (2 chloroethyl 3 sarcosinamide 1 nitrosourea ,SarCNU)在体内对DNA修复基因表达阳性肿瘤的抗肿瘤作用。方法 将人肺癌细胞株NCI H5 2 2接种于裸鼠皮下 ,制作肿瘤模型 ,观察SarCNU的抗肿瘤作用。同时 ,采用逆转录 -聚合酶链反应 (reverse transcriptionpolymerasechainreac tion ,RT PCR)测定肿瘤标本的神经元外单胺递质载体 (extraneuronalmonoaminetransporter ,EMT)和DNA修复基因六氧甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶 (O6 methylguanine DNAmethyltransferase ,MGMT)、核苷酸剪切修复基因ER CC1 6 (excisionrepaircross complementingrodentrepairdeficiencygene 1 6 )的表达。结果 荷瘤鼠接受SarCNU治疗后肿瘤均明显缩小 ,实验组肿瘤与对照组肿瘤大小变化 (T/C % )最佳比值为 2 3 ,肿瘤生长延缓达 5 5天 ,显示了良好的抗肿瘤作用。肿瘤细胞的EMT和DNA修复基因MGMT以及ERCC1 6的表达均为阳性。结论 在EMT阳性的肿瘤 ,即使具有DNA修复基因表达 。

重组人血管内皮抑制素联合电子线照射对肺腺癌A549移植瘤的实验研究

背景与目的:有研究表明放疗能够上调和强化肿瘤血管的生成过程,导致放疗耐受;重组人血管内皮抑制素(recombinant human endostatin,rh-endostatin)可抑制肿瘤血管生成,改善由放疗引起的耐受性。本研究旨在探讨rh-endostatin与顺铂(cisplatin,DDP)分别联合电子线照射对肺腺癌A549移植瘤的抑制作用。方法:建立A549肺腺癌移植瘤模型,待瘤径达1.0cm时,将实验鼠随机分成4组(每组6只):对照组、照射组、照射+DDP组和照射+rh-endostatin组。定期测量肿瘤最长径和最大垂直径,第16天时处死裸鼠,取出肿瘤组织,检测肿瘤细胞凋亡率,RT-PCR检测bFGF mRNA表达水平,免疫组织化学法检测VEGF表达水平。结果:对照组、照射组、照射+DDP组和照射+rh-endostatin组肿瘤的生长速率分别为(162±6)%、(131±8)%、(104±7)%和(108±11)%(P<0.05);照射+rh-endostatin组与照射组相比以及照射+DDP组与照射组相比,差异均具有统计学意义(P<0.01);照射+rh-endostatin组与照射+DDP组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。肿瘤细胞凋亡率,对照组、照射组、照射+DDP组和照射+rh-endostatin组分别为(12.2±1.1)%、(16.5±0.8)%、(24.4±1.5)%和(20.5±1.9)%,各组间差异具有统计学意义(P<0.05)。照射组bFGFmRNA和VEGF表达水平高于对照组,照射+rh-endostatin组bFGF mRNA和VEGF表达水平明显低于对照组、照射组、照射+DDP组(P<0.05)。结论:rh-endostatin明显提高了照射对A549肺腺癌移植瘤的抑制情况;rh-endostatin联合照射肺腺癌A549移植瘤可取得与DDP联合放疗相似的结果。

树舌多糖GF对人肝癌细胞MHCC97H荷瘤裸鼠肿瘤生长的影响

目的：探讨树舌多糖GF对人肝癌细胞MHCC97H荷瘤裸鼠肿瘤生长的影响及机制。方法：人肝癌细胞株MHCC97H接种4~5周鼠龄的雄性BALB/c-nu裸鼠背部2周,建立裸鼠皮下瘤模型。30只荷瘤裸鼠随机分为3组：对照组、生理盐水组及树舌多糖GF组,每组10只。对照组未做处理;生理盐水组腹腔注射生理盐水（0.15ml/只）,连续14天;树舌多糖GF组按50mg/kg,0.15ml/只腹腔注射树舌多糖GF,连续14天。于末次给药24h,处死全部裸鼠,解剖瘤体,比较各组肿瘤体积及重量。Western blot检测各组瘤体Notch细胞信号的胞内段（Notch intracecellar domain,NICD）蛋白的表达情况。结果：给药14天后,树舌多糖GF组的瘤体及瘤重分别为（81.21±25.68）mm3和（1.39±0.41）g,与对照组（1022.14±164.71）mm3和（2.30±0.46）g,以及生理盐水组（983.19±114.27）mm3和（2.11±0.58）g相比较均有统计学差异（P〈0.05）,树舌多糖GF可抑制肿瘤生长及减少瘤重;Western blot结果显示相比对照组及生理盐水组,树舌多糖GF组NICD表达降低。结论：树舌多糖GF抑制人肝癌细胞MHCC97H荷瘤裸鼠肿瘤生长,其抗肿瘤的作用靶点之一可能为Notch细胞信号。

人源性食管癌异种移植模型的建立及鉴定

目的建立人源性食管癌异种移植模型,为食管癌的研究提供可靠临床前模型,并为患者实现个体化治疗及药物筛选提供有效手段。方法取36例食管癌取患者的新鲜食管癌组织标本,将其分别移植于人源化小鼠皮下进行传代,以构建PDX模型,分析影响模型建立成功的因素;并通过对肿瘤组织P0代与P4代移植瘤进行HE染色、IHC染色及基因检测,分析其在病理形态学、基因组学方面的差异。结果该模型成瘤率为69.4%(25/36),复苏实验成瘤率为92.0%(23/25)。建模成功与建模失败患者间的病理组织类型及复发时间均具有显著差异(P<0.05)。光镜下可见P4代移植瘤与相应肿瘤组织P0代的形态和组织结构均高度相似,且IHC染色CK19均阳性表达。肿瘤组织P0代与P4代移植瘤的基因序列基本相同且突变位点一致。结论利用人源化小鼠建立PDX模型不仅可提高建模成功率,避免建模失败所带来的人力物力资源的浪费,而且其在组织形态学和基因组学上与原代肿瘤细胞基本保持一致,有助于探索肿瘤对免疫耐受的机制及肿瘤免疫治疗,值得临床推广应用。

MicroRNA-34a对人鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠皮下移植瘤的生长抑制作用及分子机制研究

目的:探讨MicroRNA-34a(miR-34a)对鼻咽癌裸鼠皮下移植瘤的生长抑制作用及其可能的分子机制。方法:体外培养人鼻咽癌CNE-2细胞系,利用mi R-34a重组质粒及Scrambled mi RNA重组质粒分别构建miR-34a及阴性对照mi RNA稳定转染细胞株,q RT-PCR检测细胞内mi R-34a表达。选取6周龄雄性BLAB/c裸鼠15只,随机分为3组:mi R-34a组(5只),Scrambled mi RNA组(5只)及空白对照组(5只)。于裸鼠背部近右后肢皮下注射重组CNE-2细胞悬液,建立移植瘤模型,每7 d测定实验组与对照组肿瘤体积变化,饲养35 d后处死,完整取出肿瘤,测定肿瘤重量及终体积。提取肿瘤组织RNA及蛋白,采用qRT-PCR检测肿瘤组织中miR-34a的表达;分别采用q RT-PCR及免疫组化法检测细胞周期调控基因CDK6及抗凋亡基因Bcl-2 m RNA及蛋白的表达。结果:mi R-34a稳定转染CNE-2细胞后可显著提高细胞内mi R-34a表达量(P<0.05)。15只裸鼠均成功构建皮下移植瘤模型,饲养21 d后,与Scrambled mi RNA组及空白对照组相比,mi R-34a组肿瘤体积显著减小(P<0.05)。饲养35 d后,mi R-34a组、Scrambled mi RNA组及空白对照组肿瘤平均重量分别为(0.81±0.13)g、(1.47±0.21)g、(1.58±0.37)g,肿瘤平均终体积分别为(351.37±98.19)mm3、(798.75±91.04)mm3、(849.62±101.32)mm3,mi R-34a组肿瘤平均重量及肿瘤平均终体积均显著小于其余两组(P<0.05)。mi R-34a组中mi R-34a的表达量显著高于其余两组(P<0.05);mi R-34a组中CDK6及Bcl-2 m RNA及蛋白表达量显著低于其余两组(P<0.05)。结论:miR-34a可能通过下调CNE-2细胞内CDK6及Bcl-2的表达水平从而抑制CNE-2细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,发挥其抗肿瘤作用。

沉默整合素连接激酶基因对TCA8113舌癌细胞移植瘤生长的影响

目的研究沉默TCA8113舌癌细胞整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)基因的表达,对其下游底物Akt和GSK3β磷酸化状态及对移植瘤生长和自发性转移的影响。方法通过Lipofectamine 2000介导将特异性siILK表达载体和无同源性的对照载体,稳定转染人舌鳞癌TCA8113细胞,分为TCA8113组、TCA8113 vector组和TCA8113 siILK组,将3组细胞分别注入裸鼠皮下构建移植瘤模型,5周后检测瘤质量,对裸鼠肺及瘤组织形态学行常规病理学检查,使用免疫荧光技术检测体外和体内癌细胞p-Akt和p-GSK3β等的表达,并观察瘤组织内血管生成情况。结果 TCA8113组、TCA8113 vector组肺组织均发生自发性转移瘤,TCA8113 siILK组肺组织未发现自发性转移瘤;TCA8113 siILK组移植瘤细胞形态较其他2组体积减小,核分裂象较少,核浆比例缩小;TCA8113 siILK组在体内和体外实验中的p-Akt和p-GSK3β表达较其他2组均明显下降(P<0.05);TCA8113 siILK组移植瘤质量较其他2组显著降低(P<0.05),抑瘤率分别为84%和92%;TCA8113 siILK组移植瘤血管生成较其他2组也明显减少(P<0.05)。结论沉默TCA8113舌癌细胞ILK表达可抑制其下游信号传导分子Akt和GSK3β的磷酸化,并抑制移植瘤血管生成,从而抑制移植瘤的生长。