贫铀对细胞存活的影响及基因突变作用

目的 研究贫铀 (DU)对细胞存活的影响和诱发基因突变的作用 ,并初步探讨其可能的机制。方法 用包含单条人类 11号染色体 (Hchr 11)的人 中国仓鼠卵巢杂交细胞 (AL 细胞 )为靶 ,观察DU作用细胞的低密度接种效率 ;用CD59表面抗原抗体及其补体筛选突变细胞克隆 ,研究DU诱发的Hchr 11基因突变率。结果 DU可明显降低细胞存活率 ,并使Hchr 11基因突变率显著增高 ;二甲基亚砜 (DMSO)、Ca2 + 和Na2 SeO3对DU诱发的细胞增殖死亡和基因突变有较好的保护效果。结论 DU对细胞存活的影响和基因突变作用可能与其诱发产生活性氧自由基及其与Ca2 + 的交换有关。

人精子穿透去透明带金黄地鼠卵试验与人精卵体外受精的比较

目的 研究在人工助孕技术中能否以人精子穿透去透明带金黄地鼠卵试验 ( SPA)结果作为确定采用人精卵体外受精 ( IVF)或经卵细胞胞浆内单精子注射 ( ICSI)的指标。方法 对 2 2例准备行 IVF的夫妇男方精子 SPA受精率与其 IVF受精率结果进行比较。结果 SPA和 IVF受精率分别为 38.6 %± 2 3.5 %与 5 3.5 %±2 8.4% ,SPA受精率较 IVF受精率低 ,但随着 SPA受精率的增加 ,IVF受精率也呈明显增加的趋势。在 SPA受精率大于 10 %的病例中 ,约 76 %的病例 IVF受精率大于 5 0 %。经统计学分析两者有显著相关性 ( rs=0 .70 46 ,| U | =3.2 2 84>u0 .0 1 /2 )。结论 SPA受精率可作为助孕技术中确定 IVF或

金黄地鼠卵母细胞4℃保存的研究

去透明带地鼠卵穿透试验（ＨＯＰＴ）是评价人精子受精能力的有效模型。本文探讨４℃冷保存金黄地鼠卵母细胞的可穿透性。结果表明，与对照组的穿透率（４３．９４±３０．０５％）比较，冷保存２４小时卵子的穿透率（４１．４９±２５．９６％）没有显著性差异（Ｐ＞０．０５），冷保存４８小时卵子的穿透率（２４．２５±１７．１８％）显著下降（Ｐ＜０．０１）；冷保存４８小时３２％的卵子呈现多种老化现象；去除卵透明带后不利于冷保存。提示４℃保存２４小时的卵子可应用于ＨＯＰＴ。

雌激素对正常人精子受精能力的影响及其机制初探

目的研究雌激素物质17β-雌二醇(E_2)对正常生育男性体外受精能力的影响,并初步探讨其可能的机制。方法精子悬液中分别加入不同浓度的E_2及非透膜性交联物雌二醇-牛血清白蛋白(E_2-BSA),获能4h后行体外受精,观察卵子受精率(FR)和受精指数(FI)的变化;进一步去除培养液中钙离子(Ca^(2+)),再次观察无钙环境下E_2对人精子FR和FI的影响。结果一定浓度的E_2(1μmol/L、10μmol/L)可显著提高人精子的FR和FI(P<0.05),较低和较高浓度的E_2(0.1μmol/L、100μmol/L)则对人精子FR和FI无显著影响(P>0.05);另外,非透膜性大分子物质E_2-BSA(2mg/L)也可明显提高人精子的FR和FI(P<0.05)。去除获能液中的Ca^(2+)后,E_2对人精子FR和FI无显著影响(P>0.05)。结论培养液中加入一定浓度的E_2可提高人精子的体外受精率,其作用机制可能是通过与精子膜上的雌激素受体或雌激素结合位点相互作用后促进胞外Ca^(2+)内流而实现的。

流行性出血热(EHF)地鼠肾细胞(GHKC)灭活疫苗的初步人体观察

用流行性出血热(EHF)病毒L99株(家鼠型)感染金黄地鼠肾细胞(GHKC),经福尔马林(0.025％)灭活制备EHF灭活疫苗(88-17批),经检定批准,肌肉(1ml)接种志愿者12人(IO人于0、7、28天,2人分别于0、7天及0、28天各一针),进行了安全性及抗体反应的初步人体观察。结果显示,此种疫苗对人体接种无明显不良反应。接种后,12名接种者IFA、ELI-SA及中和抗体(EFRNT)全部阳转,180天和360天后仍分别有10人血清中和抗体阳性。初步表明,此疫苗是安全的,可以有效诱导抗体产生,其中和抗体多数可持续一年以上。

孕酮对正常生育和不明原因不育男性精子-仓鼠卵穿透试验的作用

目的 比较正常生育男性和不明原因男性不育症患者精子的受精能力及其对孕酮 (P)的反应性。方法 选择10例不明原因男性不育症患者和 10例正常生育男性 ,在上游后精子悬液中加入P 10 μmol·L -1,并体外获能 2h。采用超排卵法制备仓鼠卵细胞 ,将精子与卵子体外受精 3h后观察卵子受精率 (FR)与受精指数 (FI)。结果 上游后精子与P孵育能显著提高生育组的FR(P <0 .0 1) ,但不能增加不育组的FR ;生育组FR显著高于不育组FR(P <0 .0 0 1)。P能显著提高生育组的FI (P <0 .0 1) ,但不能增加不育组的FI;生育组FI显著高于不育组FI (P <0 .0 1)。结论 P能增强正常生育男性精子的受精能力 ;

流行性出血热地鼠肾细胞双价灭活疫苗的人体观察

为了研制一种对两型流行性出血热(EHF)均有良好预防效果的灭活疫苗,采用地鼠肾细胞(GHKC)传代适应滴度高(≥8.5logTCID50/ml)的两型EHF病毒株(家鼠型L99株及野鼠型JR株)试制出GHKC双价灭活疫苗(90-1批液体苗和90-2批冻干苗),经卫生部批准,进行了约200人的人体免疫观察。疫苗用福尔马林灭话,加AI(OH)_3佐剂。共免疫242人,其中206人免疫前血清抗体反应阴性。全部接种者除极少数有轻、中度反应,余均无不良反应。两批疫苗接种后,IFA抗体阳转率分别为95.9％及89.2％,ELISA抗体分别为93.5％及91.8％。抽样检查中和抗体反应(每批疫苗30人),用酶斑减少中和试验(EFRNT)检查,两批疫苗对L99株病毒中和抗体阳转率均为100％;对JR株抗体阳转率分别为88.2％及66.7％。每个接种者免前及第一针疫苗接种后56,180,360天血清同时用ELISA法检查抗体,并抽样(每批疫苗30例)检查中和抗体,发现两种抗体的阳性率有逐渐降低的动态变化。两批疫苗三种免疫程序(0,7,28天,0,28,42天及0,28天)接种者的免疫反应基本相似,仅0,28天接种者的抗体水平稍低。对68例接种者于免疫后1年用同一疫苗(90-2批)加强免疫一次,其ELISA及中和抗体均显著升高。试用淋巴细胞转化试验检查20人按种后细胞免疫反应。

自然流产妇女的丈夫精子染色体分析

应用人精子与去透明带金黄地鼠卵受精技术制备人精子染色体标本。对１０例有自然流产史妇女的丈夫共２３０个精子核型进行了分析，并与正常可育男性的２１０个核型对照。结果显示，流产组的精子染色体数目异常率为３９％，与正常组相比（２８％），两者无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；但流产组中结构异常的断裂和无着丝粒断片的比率（６０％；９５％）显著性高于对照组（２５％；２８％）。

乙型肝炎病毒对精子染色体的影响

乙型肝炎病毒感染者的精子与去透明带金黄地鼠卵受精制备染色体，并以ＨＢＶ 全长ＤＮＡ 作探针对精子染色体进行荧光原位杂交。结果发现慢性迁延型肝炎患者、慢性活动型肝炎患者和ＨＢＶ 携带者的精子染色体畸变率分别为１２－３３ ％ （９／７３） 、１６－１８％ （１１／６８） 和１５－４８ ％（１３／４８），均显著高于健康对照者精子畸变率（４ ．３５％ ，５／１１５） 。进一步ＦＩＳＨ 显示，在１ 例慢性迁延型肝炎患者的精子染色体上有特异荧光信号。研究结果表明，ＨＢＶ 能导致精子染色体不稳定性，并在患者精子染色体上整合，其整合特点是：整合位点是随机的，且大多为多位点整合。

pCEP4/hIL-17真核表达载体的构建及表达

目的构建pCEP4/hIL-17载体及在真核细胞中表达hIL-17/mFc融合蛋白;初步研究IL-17生物学特性。方法采用RT-PCR的方法克隆hIL-17CDS段基因序列;将测序正确的hIL-17序列插入pCEP4质粒构建pCEP4/IL-17真核表达载体,转染中华仓鼠卵巢(CHO)细胞后,筛选阳性表达细胞株;并用RT-PCR、ELISA和Western blot等法鉴定IL-17基因的mRNA和蛋白表达;流式细胞术分析纯化的蛋白对Raji细胞表达的hIL-17受体的结合能力;以体外实验验证其促炎症作用。结果成功构建了pCEP4/hIL-17重组载体,并在CHO细胞中稳定表达;所获得hIL-17重组蛋白能稳定结合Raji细胞上的IL-17受体;体外刺激HeLa细胞,能明显促进IL-6等炎症因子的分泌。结论稳定表达hIL-17重组蛋白的CHO细胞系的建立,为进一步研究hIL-17的生物学功能奠定了良好的基础。

抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体死亡受体5嵌合抗体的构建及其真核表达

目的构建以人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体死亡受体5(DR5)为抗原的鼠/人重组嵌合抗体。方法采用基因工程技术,扩增和克隆抗DR5嵌合抗体的轻、重链表达载体,共转染二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHO-dhfr-),筛选稳定分泌表达抗DR5嵌合抗体的细胞株。采用ELISA和Western bloting法鉴定抗体的人源性和抗体-抗原结合活性,四唑盐/吩嗪硫酸甲酯比色法检测抗体的生物学活性。结果获得了稳定表达和分泌抗人DR5的嵌合抗体(anti-DR5mV-hH)的重组细胞;与人DR5蛋白具有高的特异性结合活性;能使体外培养的人髓性白血病Jurkat细胞和人结肠癌HCT116细胞的存活率分别下降到73.15%和77.30%。结论抗DR5嵌合抗体anti-DR5mV-hH具有抗肿瘤活性,为发展人源化抗体药物的研究奠定了基础。

抗人精子甘露糖受体抗血清对精子穿透实验的影响

目的研究人精子甘露糖受体(MR)在精卵融合中的作用。方法用亲合层析法分离纯化的人精子甘露糖受体来免疫Balb/c小鼠得到抗MR抗血清;用抗血清处理顶体反应后的人精子,并进行去透明带金黄地鼠卵的精子穿透实验(SPA),观察其体外受精情况。结果抗MR抗血清可抑制人精子与去透明带金黄地鼠卵的结合与穿透,使卵子的受精率下降,具剂量依赖性。结论人精子MR与精卵膜的识别与融合有关。

幼仓鼠肾细胞表达重组人红细胞生成素在猕猴中的药动学

目的：研究幼仓鼠肾（ＢＨＫ）细胞表达红细胞生成素（ＥＰＯ）在猕猴体内的药动学。方法：ＥＬＩＳＡ法测定血清浓度。结果：ｉｖ２００ｕ·ｋｇ－１后符合二室开放模型，ｔ１／２α和ｔ１／２β分别为（１．８±０．３）ｈ和（１１．３±１．７）ｈ。ｓｃ５０，２００和８００ｕ·ｋｇ－１后符合一级吸收一室模型，ｔ１／２Ｋｅ分别为（１０．５±３．２）ｈ、（１０．０±１．３）ｈ和（７．４±１．０）ｈ，吸收速率受剂量限制，ｔ１／２Ｋａ分别为（０．４±０．４）ｈ，（１．１±０．６）ｈ和（１．９±０．６）ｈ（Ｆ＝８．２，Ｐ＜０．０５）。ｔｍａｘ分别为（３．０±１．２）ｈ，（４．０±０．０）ｈ和（５．５±１．９）ｈ。ＡＵＣ随剂量增加，Ｃｌｓ相近，生物利用度为０．６４。结论：ＥＰＯ体内总过程基本符合线性药动学。

人胰岛素基因在幼仓鼠肾细胞中的表达及降血糖实验研究

目的 :构建并筛选人胰岛素基因真核高效表达载体。方法 :常规法构建重组质粒pEF1α ImINS。将重组质粒pEF1α ImINS和胰岛素其他 3个重组质粒分别转染幼仓鼠肾 (BHK )细胞 ,经G418筛选 ,阳性克隆传至 2 0代 ,分别用放射免疫和免疫组化技术分析胰岛素和 (或 )胰岛素原在BHK细胞中表达的情况。并用重组质粒pEF1α ImINS转染BHK细胞的阳性克隆 2 0代的PBS细胞悬浮液 (5× 10 7个 /只 )及其培养上清 (0 .5ml/只 )对昆明小鼠行腹腔注射 ,通过对注射前后小鼠血糖值测定 ,分析转基因产物降血糖的生物学效应。结果 :胰岛素的表达量最高为 7.984μIU/ml ,胰岛素表达水平的灰度值在BHK细胞质中为 177.5± 15.10 ,细胞核中为 150 .3±2 1.43 ;昆明小鼠注射 pEF1α ImINS转染BHK克隆细胞株的悬浮液后 6h与注射前 2 4h血糖值比较 ,差异极显著 (P <0 .0 1)。结论 :BHK细胞中重组质粒 pEF1α ImINS是胰岛素表达量最高的质粒 ;pEF1α ImINS转染的克隆细胞株在小鼠体内有胰岛素表达 。

孕酮、17β-雌二醇对在体培养人子宫内膜出血作用的初步研究

去卵巢地鼠皮下埋植孕酮和17β-雌二醇硅胶管,两周后在地鼠颊囊内移植分泌期人子宫内膜。手术后第11天用3种不同方式取出含类固醇激素管;1)10只动物仅取出17β-雌二醇管,保留孕酮管,移植内膜均无出血现象;2)31只动物取出孕酮管,保留17β-雌二醇管,有21只动物移植内膜出血,10只不出血;3)10只动物两种激素管同时取出,所有移植内膜均出血。内膜出血时间比较集中在取管后36—72小时内,占总出血动物的64％。文章讨论了子宫内膜出血原因。

地鼠血清培养异合卵制备人精子染色体的研究

本文首次应用地鼠血清培养异合卵制备人精子染色体标本，获得显著的效果。同时应用胎牛血精进行了比较，在两种血清中精子染色体形成率分别为１０２．４５％和５８．２８％，可供分析核型获得率分别为７６．１５％和３１．５１％，两组间存在非常显著的差异（Ｐ＜０．００１）．观察分析了６例供精者的４９８个精子核型，数目异常和结构异常发生率分别为０．８％和２．８％。本研究提示地鼠血清培养同种属卵，可促进卵细胞在体外的进一步成熟，并有助于人精原核的发育及其染色体的形成。

人精子诱变检测中新体外代谢活化系统的研究

人精子与去透明带金黄地鼠卵受精，在受精后异合卵培养阶段，用终浓度分别为２０μｇ／ｍｌ、４０μｇ／ｍｌ、６０μｇ／ｍｌ的间接诱变剂环磷酰胺进行处理，继而制备精子染色体进行核型分析。得到环磷酰胺诱发的染色体畸变精子率在上述剂量组依次为３３％、５０％、３３％；断裂均数依次为０．５４、１．９４和０７２。与空白对照组比较，差异具有显著性（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜００１）。本研究结果表明，用人精子／金黄地鼠异合卵为靶细胞，能够检出间接诱变剂的诱变性。异合卵内源性代谢活化体系的发现和应用在哺乳动物配子的毒理遗传研究中具有重要意义。

呋喃骈呋喃木脂素的体外抗肿瘤活性

利用 MTT快速比色法 ,以长春新碱 (Vincristin Sulfas)为阳性对照 ,研究了从玄参科(Scrophulariaceae)兰石草属兰石草 (L ancea tibetica Hook Fet Thoms)中提取的呋喃骈呋喃木脂素对人肝癌细胞 (SMMC- 772 1) ,人宫颈癌细胞 (Hela) ,中国仓鼠肺成纤维细胞 (V79)及小鼠黑色素肉瘤细胞 (B16 )的体外抗肿瘤活性 .结果显示 :呋喃骈呋喃木脂素 L C1对 4种细胞均有较强的抑制作用 ,IC50 在 4 0 .2～ 87.9μg/ m L范围 ,它对 B16的抑制作用强于长春新碱 .但是 ,L C2和 L C3均无抗癌活性 (>4 0 0 μg/ m L) ,可能 L C2和 L C3的酚羟基上的 H被糖基取代而使抗癌活性丧失 .

氟喹诺酮均三唑稠杂环类衍生物抗肿瘤活性理论研究

为了探讨氟喹诺酮均三唑稠杂环类衍生物(FQTHs)体外抗肿瘤作用的微观机理,建立其对中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、鼠白血病细胞(L1210)和人白血病细胞(HL60)等的体外抗肿瘤活性(A_j:A_C、A_L、A_H)与量化参数Q_t的定量结构-活性相关性(QSAR)模型。采用半经验计算法MOPAC-AM1计算15种化合物的量化参数(Qt,如E_(HOMO)、E_(LUMO)、μ、Q_(Cd)、Q_(Ne)、Q_(Of)、Q_F、Q_S等)。运用最佳变量子集回归方法建立FQTHs体外抗肿瘤活性的QSAR模型。A_C的最佳三元线性回归模型的判定系数R^2和逐一剔除法交叉验证系数R_(cv)~2分别为0.910和0.827,A_L对应的R^2和R_(cv)~2分别为0.874和0.815,A_H对应的R^2和R_(cv)~2分别为0.941和0.894。通过R^2、R_(adj)~2、F、R_(cv)~2、V_(IF)、A_(IC)、F_(IT)等检验证明上述模型具有稳健性和预测能力。模型显示Q_(Cd)、Q_(Ne)、Q_(Of)和μ直接影响15种化合物的生物活性。

东莞市不育男性精子功能检查参数的分析

目的：分析东莞地区不育男性患者精子功能相关检查结果。方法随机选取本院25～44岁300例诊断为男性不育患者（不育组）与200名正常生育男性（对照组）精液标本，比较两组精子形态学分析、顶体酶定量、精子DNA碎片检测及进行去透明带仓鼠卵人精子穿透实验的受精指数的差异，并将各项指标与不育进行相关性分析。结果不育组精子正常形态百分率（3.00±2.30）%，对照组精子正常形态百分率（8.00±4.30）%，差异有统计学意义（P＜0.05）。不育组精子顶体酶活性为（69.40±31.50）μIU/106精子，对照组精子顶体酶活性（93.50±32.70）μIU/106精子，差异有统计学意义（P＜0.05），不育组DNA碎片率（20.94±1.00）%，对照组DNA碎片率（11.27±0.79）%，差异有统计学意义（P＜0.05）。不育组与对照组中去透明带仓鼠卵人精子穿透实验受精指数差异无统计学意义（P＞0.05）。各种检查结果与不育的相关回归分析结果是，精子正常形态率与不以呈负相关（r=-0.823，P＜0.05）、顶体酶活性与不育呈负相关（r=-0.723，P＜0.05），与不育呈正相关的有头部畸形率（r=0.894，P＜0.05）、DNA碎片率（r=0.778，P＜0.05）。结论精子形态分析、顶体酶活性、精子DNA碎片检测是检测精子功能的有效指标。精子正常形态率、顶体酶活性与不育呈负相关关系，与不育正相关的有头部畸形率、DNA碎片率。