hPPARα真核表达载体的构建及鉴定

目的:构建pSG5/hPPARα真核表达载体,为进一步探讨在治疗糖尿病的过程中,传统中草药对hPPARα信号通路的分子调节机制奠定了基础。方法:从人类外周血中抽提总RNA,利用RT-PCR的方法进行扩增得到hPPARα基因片段。纯化后将其连接至克隆载体pGEM-Teasy中,并对重组载体pGEM-T/hPPARα进行基因测序鉴定。之后将hPPARα基因片段连接至瞬时真核表达载体pSG5中。经BamHⅠ酶切鉴定插入方向后,再次进行测序鉴定。利用瞬时转染技术,将pSG5/hPPARα真核表达载体转染至HepG2细胞中,随后通过western blot检测技术,检测hPPARα的瞬时表达情况。结果:菌落PCR、酶切电泳及测序结果证实,瞬时表达载体pSG5/hPPARα构建成功。western blot结果证明,转染了pSG5/hPPARα的HepG2细胞中,hPPARα基因得到了有效表达。结论:本实验成功构建了pSG5/hPPARα瞬时表达载体,可用于后续实验。