藿朴夏苓汤对链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠的降血糖作用及机制研究

目的研究藿朴夏苓汤(HPXLT)对链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠的降血糖作用及机制。方法采用腹腔注射STZ(65 mg·kg^(-1))制备糖尿病大鼠模型。将60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、格列本脲组(5 mg·kg-1)及藿朴夏苓汤高、中、低剂量组(2、1、0.5 g·kg^(-1)),每日1次,连续灌胃给药4周。测定各组大鼠体质量、摄食量、饮水量;进行糖耐量测定,计算糖耐量下血糖-时间的曲线下峰面积(AUC);生化指标检测:空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)及血清胰岛素水平;采用HE染色观察胰腺组织病理学变化;Western Blot法测定胰腺组织中BCL-2、BAX及胰腺-十二指肠同源异型盒基因-1(PDX-1)蛋白表达水平;Real-time RT-PCR法测定胰腺BCL-2、BAX及PDX-1 mRNA表达水平。结果与正常对照组比较,模型组大鼠的体质量明显降低,而摄食量、饮水量明显增加(P<0.01);FBG值、糖耐量实验的血糖-时间曲线下峰面积(AUC)显著升高(P<0.01);血清中的TC、TG、LDL-c及MDA、NO水平显著升高(P<0.01),HDL-c、GSH、SOD及胰岛素水平显著降低(P<0.01);BAX mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.01),BCL-2、PDX-1 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠的体质量明显增加,摄食量、饮水量明显降低(P<0.01);FBG值、AUC值均明显降低(P<0.05,P<0.01);血清TC、TG、LDL-c及MDA、NO水平明显降低(P<0.05,P<0.01),HDL-c、GSH、SOD及胰岛素水平明显升高(P<0.05,P<0.01);胰腺组织中的BAX mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01),而BCL-2、PDX-1 mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论藿朴夏苓汤对STZ诱导的糖尿病大鼠具有降血糖作用,可能与其上调PDX-1的表达,提高抗氧化水平,改善胰岛β细胞功能有关。

藿朴夏苓汤通过AMPK通路干预非酒精性脂肪肝病小鼠的作用机制研究

目的基于AMPK通路探讨藿朴夏苓汤对高脂饮食诱导非酒精性脂肪肝病(NAFLD)模型小鼠的保护作用及相关机制。方法采用高脂饮食喂养12周制备NAFLD小鼠模型。将小鼠随机分为正常组、模型组、藿朴夏苓汤组(1.0 g·kg^-1)及非诺贝特组(0.1 g·kg^-1),每日1次,连续灌胃给药30 d。采用HE染色法观察小鼠肝脏组织病理形态学变化,并进行NAFLD活动度评分;采用全自动生化分析仪检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平及肝脏组织TG、TC和游离脂肪酸(FFA)水平;采用葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖值(FBG),ELISA法测定胰岛素(FINS)含量,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);小鼠灌胃葡萄糖(2 g·kg^-1),于0、30、60、120 min进行尾静脉采血,测定各组小鼠糖耐量变化和血糖-时间的曲线下峰面积(AUC);采用ELISA法测定肝脏组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;qRT-PCR法检测肝脏组织SREBP-1c、FASN、ACC、HMGCR mRNA表达水平;Western Blot法检测肝脏组织AMPK、p-AMPK蛋白表达水平;免疫荧光双染色法测定肝脏组织CD11b、F4/80蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组小鼠的体质量,血清中的TC、TG、LDL-C、FBG、FINS水平,肝脏组织中TC、TG、FFA水平,HOMA-IR及糖耐受实验的曲线下峰面积(AUC)均显著升高(P<0.05,P<0.01);血清肝功能指标ALT、AST及NAFLD病理评分均显著升高(P<0.01);肝脏组织TNF-α、IL^-1β、IL-6水平及F4/80、CD11b的蛋白表达水平均显著升高(P<0.01);小鼠肝脏组织的SREBP-1c、FASN、ACC、HMGCR mRNA表达水平均显著升高(P<0.01),p-AMPK蛋白表达水平则显著降低(P<0.01)。与模型组比较,给药组小鼠的体质量,血清中的TC、TG、LDL-C、FBG、FINS水平,肝脏组织中TC、TG、FFA水平,HOMA-IR及糖耐受实验的AUC值均显著降低(P<0.05,P<0.01);血清ALT、AST水平及NAFLD病理评分均显著降低(P<0.05,P<0.01);肝脏组织的TNF-α、IL^-1β、IL-6水平及F4/80、CD11b的蛋白表达水平均显著降低(P<0.05,P<0.01);肝脏组织的SREBP-1c、FASN、ACC、HMGCR mRNA表达水平均显著降低(P<0.05,P<0.01),p-AMPK蛋白表达水平则显著升高(P<0.05)。结论藿朴夏苓汤可降低高脂饮食诱导的NAFLD小鼠血脂水平,改善肝功能,减少肝脏脂质累积,减轻炎症反应,可能与其激活AMPK信号通路,抑制脂质合成相关基因及炎症因子的表达有关。

藿朴夏苓汤对HBZY-1细胞及DN大鼠NF-κB炎症通路的影响

目的研究藿朴夏苓汤(HPXLT)对体内外核转录因子-κB(NF-κB)炎症通路的影响,探讨HPXLT对糖尿病肾病(DN)的作用机制。方法体外研究:采用脂多糖(LPS)刺激大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)及Hep G2细胞,观察HPXLT对细胞炎症因子包括肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)含量及p-p65蛋白表达的影响,以免疫荧光法观察Hep G2细胞的NF-кB p65转核作用。体内研究:采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ,65 mg·kg^(-1))方法制备DN大鼠模型。将大鼠随机分为对照组,模型组,HPXLT高、中、低剂量组(2,1,0.5 g·kg^(-1))和格列本脲组(5 mg·kg^(-1)),连续灌胃给药6周。采用ELISA法测定细胞上清液或大鼠血清TNF-α、IL-1β和IL-6的水平;Western Blot法测定HBZY-1细胞或大鼠肾脏p65、p-p65、TNF-α和IL-1β的蛋白表达水平。结果体外结果:与对照组比较,LPS组的p-p65蛋白表达显著增强,炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量显著升高(P<0.01);与LPS组比较,HPXLT各剂量组的p-p65蛋白表达水平显著下调,炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量显著降低(P<0.05,P<0.01);免疫荧光显示LPS诱导的炎症能促进NF-кB p65的转核,而HPXLT可显著抑制NF-кB p65转核作用。体内结果:与对照组比较,模型组大鼠血清的TNF-α、IL-1β、IL-6炎症因子水平及肾脏的IL-1β、TNF-α、p-p65蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠血清的TNF-α、IL-1β和IL-6炎症因子水平均显著降低(P<0.05,P<0.01),HPXLT高、中剂量组的IL-1β、TNF-α及p-p65蛋白表达水平均明显下调(P<0.05,P<0.01),各组之间的总NF-кB p65蛋白表达水平无明显改变,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HPXLT可能通过抑制NF-κB炎症通路的表达,从而降低DN肾脏的炎症。

藿朴夏苓汤治疗糖尿病肝病大鼠的实验研究

目的研究藿朴夏苓汤对链脲佐菌素(STZ)+CCl_4合并诱导的糖尿病肝病的治疗作用。方法采用腹腔注射STZ+灌胃40%的CCl_4法建立糖尿病肝病大鼠模型,将大鼠随机分为正常组、模型组、藿朴夏苓汤组和格列本脲组。给药6周后,测定血糖、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)等指标,研究藿朴夏苓汤对糖尿病肝病大鼠的血糖、肝功能、血脂及肝组织病理变化等的影响。结果与模型组大鼠相比,藿朴夏苓汤能显著降低大鼠的空腹血糖(BG)(P<0.01),ALT、AST、TG、TC以及LDL的含量显著降低(P<0.01),HDL含量显著增高(P<0.01),进而抑制大鼠肝内Ⅰ型胶原蛋白的形成,导致改善大鼠肝组织病理。结论藿朴夏苓汤具有明显改善STZ+CCl_4诱导的糖尿病肝病大鼠的肝损伤作用。

藿朴夏苓汤对糖尿病肾病大鼠的肾脏保护作用及其机制

目的研究藿朴夏苓汤(HPXLT)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)通路及相关下游调控蛋白的影响,探讨其对DN的肾脏保护作用及机制。方法采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ,65 mg·kg^(-1))制备DN大鼠模型。大鼠随机分为正常对照组,模型组,HPXLT高、中、低剂量组(2,1,0.5 g·kg^(-1)),格列本脲组(5 mg·kg^(-1)),连续灌胃给药6周。测定各组大鼠体质量、肾脏系数、24 h排尿量及尿蛋白;生化指标检测大鼠空腹血糖(FBG)、血肌酐(Scr)以及尿素氮(BUN)的含量;采用免疫印迹法检测肾组织TGF-β1通路及相关下游调控蛋白(Nephrin、Podocin、p38MAPK、p-p38MAPK、Caspase-3、Smad2/3、p-Smad2/3)的表达;采用免疫组化测定肾组织TGF-β1的表达。结果与正常对照组比较,模型组大鼠体质量明显下降,而肾脏系数、24 h排尿量和尿蛋白、FBG、Scr、BUN含量则显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);肾组织Nephrin、Podocin表达明显下降,而TGF-β1及其下游蛋白Caspase-3、p-p38MAPK和p-Smad2/3表达则显著升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,HPXLT高、中、低剂量组的大鼠体质量显著增加,而肾脏系数、24 h排尿量和尿蛋白、FBG、Scr、BUN含量则明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);HPXLT高、中剂量组可显著增强Nephrin、Podocin蛋白的表达,降低TGF-β1、Caspase-3蛋白的表达水平,抑制磷酸化p38MAPK和Smad2/3的活性,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),并呈一定的量效关系。结论 HPXLT可能通过抑制TGF-β1信号通路的表达,提高足细胞Nephrin、Podocin的表达,从而缓解足细胞凋亡,起到保护DN肾脏的作用。