基于GC-TOF/MS代谢组学技术探讨藿香正气滴丸干预湿困脾胃型大鼠的作用机制

目的通过基于气相色谱-飞行时间质谱联用(GC-TOF/MS)技术的代谢组学方法探讨藿香正气滴丸干预湿困脾胃型大鼠的作用机制。方法将雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组和藿香正气滴丸组(1 g·kg^(-1))。采用综合物理模型复制方法结合饮食失节制备湿困脾胃大鼠模型。灌胃给药,每日1次,连续给药10 d。观察大鼠宏观体征和行为学指标(体质量、体长、尾长、腹围指数与自主活动次数)。利用GC-TOF/MS方法对大鼠血清和尿液代谢组进行分析,鉴定与湿困脾胃相关的潜在生物标志物,分析藿香正气滴丸干预湿困脾胃型大鼠的代谢通路。结果与正常组比较,模型组大鼠的体质量、体长、尾长、自主活动次数明显减少(P<0.05),腹围指数明显升高(P<0.05)。与模型组比较,藿香正气滴丸组大鼠的体质量、体长、自主活动次数明显增加(P<0.05),腹围指数明显降低(P<0.05)。在大鼠血清、尿液中分别鉴定了38、44个与湿困脾胃相关的潜在生物标志物。藿香正气滴丸对模型大鼠的血清和尿液代谢表型能产生有效的干预,并能使血清、尿液中的17、13个潜在生物标志物水平显著回调,共涉及7条代谢通路。结论藿香正气滴丸对湿困脾胃型大鼠的干预机制可能与调节色氨酸代谢、组氨酸代谢、谷氨酸-谷氨酰胺代谢、能量代谢及肠道菌群等有关。

加味藿香正气丸特征图谱建立及3种成分测定

目的基于HPLC法建立加味藿香正气丸特征图谱,并测定3种成分含量。方法样品甲醇提取液采用Agilent TC-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分析,以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速为1.0 mL/min;检测波长为254 nm和284 nm;柱温为30℃。结果橙皮苷、厚朴酚、和厚朴酚分别在2.715~434.400μg/mL、2.760~176.600μg/mL、2.623~167.900μg/mL范围内呈现良好的线性(r=1.0000),平均加样回收率分别为99.2%,96.3%,95.9%,RSD分别为1.5%,1.3%,1.8%(n=9)。建立的特征图谱对制剂中7味主要药材进行了控制,为整体上评价不同企业的原药材、投料、工艺以及制剂的质量情况提供了依据。结论该方法准确可靠、重复性好,可用于加味藿香正气丸的质量控制。

藿香正气滴丸干预大鼠湿困脾胃证的转录组学分析

目的基于转录组学技术分析藿香正气滴丸干预湿困脾胃证的潜在作用机制。方法将SD大鼠随机分为3组:正常组、模型组、藿香正气滴丸组(1 g/kg)。采用综合物理造模方法建立湿困脾胃大鼠模型,共造模20 d,造模第11天灌胃给药。测量大鼠体质量变化、观察大鼠脏器系数、结肠组织病理变化并用ELISA法检测大鼠血清免疫球蛋白G(IgG)水平。运用转录组学技术检测结肠组织中差异基因表达情况。利用RT-qPCR验证藿香正气滴丸对关键差异基因mRNA表达水平的影响。结果与正常组比较,模型组大鼠脾脏、胸腺指数及IgG水平显著降低,结肠组织变化明显。与模型组比较,藿香正气滴丸能显著回调大鼠脾脏、胸腺指数及IgG水平,能改善结肠病理变化。转录组学分析结果显示,与正常组比较,湿困脾胃证模型组差异表达基因共525个,其中有192个基因显著上调,333个基因显著下调。藿香正气滴丸共回调了113个差异表达基因。GO功能富集结果表明差异表达基因主要涉及ATP的合成、调节干扰素系统等;KEGG分析结果表明差异表达基因主要参与氧化磷酸化代谢通路、生热作用、RIG-I样受体信号通路、NOD样受体信号通路等相关信号通路;RT-qPCR验证显示,藿香正气滴丸能明显回调差异表达基因。结论藿香正气滴丸干预湿困脾胃证的作用机制可能与其调节机体能量代谢、炎症反应和改善机体免疫系统有关。

UPLC-MS/MS法测定加味藿香正气丸中29种禁用农药残留

目的:建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定加味藿香正气丸中农药残留量。方法:以十八烷基键合硅胶为填充剂(10 cm×21 mm,1.7μm);以0.1%甲酸溶液(含5 mmol·L^(-1)甲酸铵)为流动相A,以乙腈-0.1%甲酸溶液(含5 mmol·L^(-1)甲酸铵)(95:5)为流动相B,梯度洗脱;流速0.2 mL/min,柱温40℃。质谱分析以三重四级杆串联质谱仪检测,电喷雾(ESI)离子源,正离子扫描模式,多反应监测(MRM)。对22个厂家3种剂型共101批加味藿香正气丸样品测定29种禁用农药的残留情况。结果:29种禁用农药化学成分浓度在5~200 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数(r)均大于0.992,回收率在52.8%~143.8%,101批抽检加味藿香正气丸中29种禁用农药成分均未检出。结论:该法可用于检测加味藿香正气丸农药残留含量,市场上加味藿香正气丸样品禁用农药污染风险较低。

基于溶出-液相在线联用系统研究藿香正气丸(浓缩丸)中两种成分体外释放行为

目的:探讨研究并建立藿香正气丸(浓缩丸)体外溶出测定方法,并对其溶出情况进行评价,为该品种的体外溶出评价提供依据。方法:采用溶出-液相联用方法测定藿香正气丸(浓缩丸)中橙皮苷和甘草酸铵两种目标成分的累积溶出量并绘制溶出曲线图,利用不同的数据模型对溶出数据进行模型拟合,确定藿香正气丸(浓缩丸)的最佳溶出模型。结果:在人工肠液和pH 6.8磷酸盐缓冲液中,不同批次的藿香正气丸(浓缩丸)两种目标标成分溶出行为差异性较小,藿香正气丸(浓缩丸)中两种目标成分的溶出数据拟合结果略有不同,主要以Weibull模型最佳。结论:藿香正气丸(浓缩丸)在pH 6.8磷酸盐缓冲液中更有利于考察目标成分的溶出情况,该研究准确可靠,可用于藿香正气丸(浓缩丸)的质量控制,同时也为其质量一致性评价研究及工艺的分析改进提供了数据支撑。

柴胡滴丸联合藿香正气滴丸治疗SARS的临床观察

目的早期应用柴胡滴丸联合藿香正气滴丸治疗SARS的临床疗效观察。方法随机选取 2 2例SARS确诊病例 ,依照年龄、性别、职业为控制因素配成 11对 ,每对中有 1例在应用对症治疗的同时 ,给予柴胡滴丸联合藿香正气滴丸治疗 ,持续观察 13天 ,检测患者肌酸激酶、乳酸脱氢酶、血清钠水平等临床指标 ,并比较中性白细胞绝对数 ,氧合指数及甲基泼尼松日最大用量和总用量。结果早期应用柴胡滴丸联合藿香正气滴丸治疗SARS的患者的肌酸激酶、乳酸脱氢酶、中性白细胞绝对数及氧合指数均有良好影响 ,并能减少患者应用糖皮质激素的日最大用量。结论早期应用柴胡滴丸联合藿香正气滴丸治疗SARS可以减轻患者肺脏损伤 ,减轻白细胞依赖性炎症反应及激素用量。

藿香正气滴丸治疗急性胃炎外邪犯胃型多中心临床观察

[目的]观察藿香正气滴丸治疗急性胃炎外邪犯胃型疗效,初步评价藿香正气滴丸用药时效关系。[方法]以藿香正气滴丸为试验组,119例,以不含乙醇的液体制剂为对照组,118例。两组分别服用观察药物及对应的模拟剂1周,于3、7 d观察胃脘疼痛、恶心呕吐、腹泻、发热、嗳气、纳呆等症状疗效,并行安全性指标检测。[结果]不同剂型藿香正气制剂均有较好疗效,治疗3 d藿香正气滴丸疗效明显优于口服液,藿香正气滴丸对改善中医证候总积分,腹胀腹痛、恶心呕吐、嗳气等症状的改善程度优于口服液;两组的降温退热,止泻作用相当。未发现不良反应。[结论]藿香正气方剂治疗急性胃炎有肯定疗效,藿香正气滴丸3 d疗效明显优于口服液,藿香正气滴丸与液体剂型相比具有起效快、服用方便等优势。

UPLC法同时测定藿香正气滴丸中7个化学成分

目的建立UPLC法同时测定藿香正气滴丸中欧前胡素、异欧前胡素、橙皮苷、和厚朴酚、厚朴酚、苍术素、甘草酸7个成分的含量。方法采用Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱（100 mm×2.1 mm,1.7μm）,流动相：乙腈（A）-体积分数为0.2%的甲酸水溶液（B）,梯度洗脱,流速：0.4 m L·min^-1,柱温：30℃,检测波长：250 nm,检测欧前胡素、异欧前胡素和甘草酸,284 nm检测橙皮苷,290 nm检测和厚朴酚、厚朴酚,336 nm检测苍术素。结果欧前胡素、异欧前胡素、橙皮苷、和厚朴酚、厚朴酚、苍术素、甘草酸质量浓度分别在2.0-80.6、0.6-23.0、15.0-600.0、10.1-403.2、7.5-301.6、1.0-41.6、10.1-202.4 mg·L^-1内与峰面积呈良好的线性关系（r≥0.999 5）,平均回收率在98.6%-100.9%（RSD≤2.2%,n=9）。结论该方法可用于藿香正气滴丸的质量控制。

用高效液相色谱法同时测定藿香正气口服液中厚朴酚和厚朴酚与橙皮苷的含量

目的测定藿香正气口服液中有效成分厚朴酚、和厚朴酚与橙皮苷的含量而用于其质量控制。方法采用高效液相色谱(HPLC)的梯度洗脱法,在ODS柱上以甲醇-水(50∶50￣80∶20)为流动相进行分离,于294nm测定。结果橙皮苷、厚朴酚与和厚朴酚进样量分别在0.4400￣0.7920μg、0.0324￣0.1620μg和0.0392￣0.1960μg范围内与峰面积线性关系良好,相关系数为0.9997、0.9990和0.9991,平均回收率为100.1%、99.1%和101.3%。结论建立的HPLC方法对于所测定的三种有效成分具有良好的色谱分离性。该方法表现出了精密度好、准确度高、简便和稳定等特点,可用于制剂的质量控制。

加味藿香正气丸的质量标准研究

目的建立加味藿香正气丸的质量控制方法。方法采用TLC法对方中白芷、广藿香、陈皮、白术进行定性鉴别;采用GC法测定百秋李醇的含量,色谱柱为HP-5柱,检测器温度为280℃。结果定性鉴别方法专属性强。百秋李醇在0.057～1.14mg.ml-1范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=9995,n=5),平均回收率为99.42%,RSD为1.31%。结论本方法可准确地进行定性、定量,可用于控制加味藿香正气丸的质量。

藿香正气制剂中和厚朴酚及总多糖快速测定分析

目的建立HPLC双波长指纹图谱快速测定藿香正气制剂中和厚朴酚含量的方法,建立糖量计法快速测定其总多糖含量的方法,并分析其差异性。方法 HPLC采用XB-C18(HS)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈和0.1%磷酸水溶液等度洗脱,流速1.0 mL/min,进样量20μL,检测波长294、270 nm,柱温30℃;糖量计法以50%乙醇为阴性对照;聚类分析重复性样品,对比不同指标间的聚类结果。结果 HPLC测得和厚朴酚在1.40～0.14 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好,线性方程为A=12182633C-217418,r^2=0.9995;藿香正气水中和厚朴酚浓度为(0.4008±0.0050)mg/mL,藿香正气滴丸中其浓度为(0.4879±0.0089)mg/mL。总多糖在0.91～0.29 g/mL范围内与其百分值线性关系良好,线性方程为Y=51.949X+0.868,r^2=0.9999;藿香正气水中总多糖浓度为(0.31±0.003)g/mL,藿香正气滴丸中其浓度为(1.12±0.005)g/mL。聚类分析筛选出和厚朴酚峰面积和总多糖百分值作为表现藿香正气水和藿香正气滴丸间差异的指标。结论本研究建立的HPLC及糖量计法能有效用于藿香正气制剂多类指标的质量控制及不同剂型间的差异考察;聚类分析筛选出的峰面积和总多糖百分值作为评价指标具有代表性和准确性。

藿香正气滴丸的波长切换法指纹图谱研究

目的建立藿香正气滴丸的指纹图谱分析方法，更全面分析产品质量。方法运用超高效液相色谱仪的多波长切换技术。色谱条件：三键C18烷基键合技术的ACQUITY UPLC—HSS T3（2．1＊100mm，1．7μm）微径色谱柱，以乙腈-0．5％冰醋酸水为流动相，梯度洗脱；检测波长010min：294nm、10—24min：254nm、24-32min：336nm；柱温：30℃；进样量：1μL。结果运用多波长切换技术所得指纹图谱方法学考察结果良好，采用色谱指纹图谱相似度评价软件，对藿香正气滴丸多波长切换指纹图谱进行相似度计算，其10批样品相似度均〉O．99，说明多批次样品具有代表性。结论该方法快速准确，能全面体现特征吸收波长相差较大的多个成分的指纹信息，能够为藿香正气滴丸的质量控制提供参考。

藿香正气滴丸治疗功能性消化不良痰湿中阻证疗效与安全性的临床研究

[目的]探讨藿香正气滴丸治疗功能性消化不良(痰湿中阻证)临床疗效及调节胃排空作用。[方法]功能性消化不良餐后不适综合征(FD)痰湿中阻证共229例,按分层区组随机、平行对照、双盲双模拟、多中心临床研究的方法,以1∶1比例分为试验组和对照组,可供疗效分析的有218例,治疗组109例采用口服藿香正气滴丸及舒丽启能模拟剂;对照组109例采用舒丽启能片剂口服及藿香正气滴丸模拟剂,疗程为4周。疗后观察两组的临床疗效。用药前日行胃排空检查并对其中74例胃排空障碍的病例于第28日行胃排空复查。[结果]1)证候疗效的总有效率两组相当,2周访视点,治疗组为78.90%、对照组为72.48%。4周访视点,治疗组为93.58%、对照组为93.58%。2周、4周访视点证候积分和情况比较,组间差异均无统计学意义;组内提示4周疗效优于2周疗效。2)两组均能改善功能性消化不良的临床症状,单项证候的整体疗效分析显示腹胀、口淡不渴等证候改善程度治疗组优于对照组。3)两组治疗后胃排空均有改善,组间比较差异无统计学意义。[结论]藿香正气滴丸能改善痰湿中阻型功能性消化不良患者的临床症状,部分单项症状疗效优于舒丽启能。藿香正气滴丸、舒丽启能均能有效改善胃排空减缓的状态,提示藿香正气滴丸有调节胃肠运动的作用。

藿香正气滴心丸的制备工艺研究

目的制备包纳藿香正气方中脂溶性、挥发性和水溶性成分的新剂型滴心丸。方法采用超临界CO2流体萃取法、水煮法,分别提取藿香正气方中的脂溶性、挥发性、水溶性成分,然后将脂溶性和挥发性成分制成滴丸,再将水溶性成分包裹在外形成滴心丸。结果通过正交试验摸索出超临界CO2流体萃取脂溶性、挥发性成分的最佳条件,通过系列平行试验摸索出滴丸母核的最佳滴制条件和水溶性成分的提取工艺,最终制备成藿香正气滴心丸。结论滴心丸吸取了滴丸与水丸的优点,克服了两种剂型各自的不足,减少了试药用量,缩短了溶散时间,使剂型进一步优化;滴心丸适用于水溶性和脂溶性物质均为有效成分的中药复方,属于剂型创新性研究成果。

藿香正气四种制剂的药效学和毒理学研究

目的:探讨藿香正气水、藿香正气口服液、藿香正气滴丸和藿香正气水丸四种制剂对动物的药效学和毒性供临床应用时参考。方法:采用对离体家兔回肠收缩力和昆明种在体小鼠小肠运动的影响,观察其药效学和毒性。结果:四种制剂均可使动物离体、在体小肠收缩力加强,幅度加快;对用新斯的明处理后的兴奋小肠有抑制作用;对用阿托品处理后的抑制小肠有兴奋作用;藿香正气水灌胃昆明种小鼠LD50为(30.20±0.03)mL/kg,与45%的乙醇相似(33.88±0.02)mL/kg;藿香正气口服液、水丸、滴丸灌胃最大耐受量分别是200 mL/kg、90 g/kg、39 g/kg。结论:四种制剂均能促进动物小肠运动,并对兴奋小肠有抑制作用,对抑制小肠有兴奋作用的双向性,藿香正气水的毒性与其溶剂乙醇有关。

卡尔-费休氏法测定加味藿香正气丸中的水分

目的:建立加味藿香正气丸中水分测定的方法。方法:分别采用卡尔-费休氏法与甲苯法测定水分。结果:卡尔-费休氏滴定法的平均回收率为99.87%,RSD=0.2%(n=6),两种方法测定的数据基本一致。结论:卡尔-费休氏法测定加味藿香正气丸中的水分简便、准确。

藿香正气丸(浓缩丸)HPLC指纹图谱

目的:建立藿香正气丸(浓缩丸)的HPLC指纹图谱。方法:采用Agilent Zorbax C18色谱柱,流动相为乙腈(A)-0.2%甲酸溶液(B),梯度洗脱,检测波长为270 nm,使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行相似度评价,并对藿香正气丸(浓缩丸)指纹图谱进行了研究。结果:建立了藿香正气丸(浓缩丸)的HPLC指纹图谱,标定了13个共有峰,并指认出9个成分。结论:该方法稳定可靠,可用于藿香正气丸(浓缩丸)的质量控制。

藿香正气丸的质量标准研究

目的建立藿香正气丸的薄层鉴别和含量测定方法。方法采用TLC法定性鉴别藿香正气丸中的广藿香、厚朴、陈皮、白芷、甘草及白术;采用HPLC法测定制剂中橙皮苷、厚朴酚及和厚朴酚的含量。结果藿香正气丸中广藿香、厚朴、陈皮、白芷、甘草及白术的TLC图谱斑点清晰、重复性好、专属性强、分离较好、方法简便。制剂中橙皮苷、和厚朴酚及厚朴酚的线性范围分别为0.95～9.46,0.32～3.16和0.89～8.90μg,水丸平均加样回收率分别为100.63%,101.41%和100.17%,RSD值分别为0.94%,1.23%和0.45%;浓缩丸平均加样回收率分别为100.87%,101.30%和100.40%,RSD值分别为1.28%,1.14%和1.22%;2个指标测定的精密度、重复性、稳定性和准确度RSD值均低于3.00%。结论该方法简便、快捷,结果准确、可靠,可作为该制剂的质量控制标准。

5种中药制剂微生物限度检查方法的建立

目的:建立喉咽清颗粒等5种中药制剂的微生物限度检查方法。方法:按中国药典2015年版四部通则,采用平皿倾注法和薄膜过滤法对喉咽清颗粒等5种中药制剂的微生物限度检查方法进行适用性试验。结果:所建立的检查方法对5种试验菌株的回收比值均在0.5~2.0,试验组控制菌均可检出,阴性对照组均未检出。结论:5种中药制剂的微生物限度检查方法可靠,可用于质量控制。

反相高效液相色谱法测定藿香正气丸(浓缩丸)中橙皮苷的含量

目的建立藿香正气丸(浓缩丸)中橙皮苷的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法。色谱条件:Phenomenex C18色谱柱,流动相为甲醇-水-冰醋酸(35∶60∶4),流速为1 mL/min,柱温40℃,检测波长283 nm。结果橙皮苷在0.165 2～1.652 0μg范围内呈良好的线性关系,回收率为98.55%,RSD=0.37%。结论本法简便、准确,可以作为该制剂的质量控制方法。