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蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因的克隆、原核表达及其功能分析
被引量:
9
1
作者
杜次
李菁
+1 位作者
唐云涛
彭清忠
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第8期1299-1307,共9页
赖氨酸脱羧酶(Lysine decarboxylase,LDC)是抗老年痴呆药——石杉碱甲生物合成的第一个酶。为了研究蛇足石杉中LDC的特性和功能,以其总RNA为模板,通过RT-PCR扩增得到2个赖氨酸脱羧酶基因LDC1和LDC2,克隆至pMD?19-T中测序发现,两基因同...
赖氨酸脱羧酶(Lysine decarboxylase,LDC)是抗老年痴呆药——石杉碱甲生物合成的第一个酶。为了研究蛇足石杉中LDC的特性和功能,以其总RNA为模板,通过RT-PCR扩增得到2个赖氨酸脱羧酶基因LDC1和LDC2,克隆至pMD?19-T中测序发现,两基因同源性为95.3%,分别编码212和202个氨基酸。将两基因引入pET-32a(+)构建重组表达质粒pET-32a(+)/LDC1和pET-32a(+)/LDC2,分别转入BL21(ED3)中进行诱导表达,在30℃条件下获得可溶性表达产物Trx-LDC1和Trx-LDC2;采用Ni-NTA亲和层析法纯化目的蛋白,建立酶促反应体系分析其脱羧酶活性,薄层层析(TLC)检测表明重组融合蛋白Trx-LDC1和Trx-LDC2均能催化赖氨酸脱羧生成尸胺。利用生物信息学软件分析发现LDC1和LDC2理化性质存在差异,但预测的二级结构和三维结构基本一致。
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关键词
蛇足石杉
赖氨酸脱羧酶
基因克隆
原核表达
酶活性
结构预测
原文传递
题名
蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因的克隆、原核表达及其功能分析
被引量:
9
1
作者
杜次
李菁
唐云涛
彭清忠
机构
吉首大学生物资源与环境科学学院
植物资源保护与利用湖南省高校重点实验室
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第8期1299-1307,共9页
基金
国家自然科学基金(No.31260081)
湖南省教育厅科学研究基金(No.13A078)资助~~
文摘
赖氨酸脱羧酶(Lysine decarboxylase,LDC)是抗老年痴呆药——石杉碱甲生物合成的第一个酶。为了研究蛇足石杉中LDC的特性和功能,以其总RNA为模板,通过RT-PCR扩增得到2个赖氨酸脱羧酶基因LDC1和LDC2,克隆至pMD?19-T中测序发现,两基因同源性为95.3%,分别编码212和202个氨基酸。将两基因引入pET-32a(+)构建重组表达质粒pET-32a(+)/LDC1和pET-32a(+)/LDC2,分别转入BL21(ED3)中进行诱导表达,在30℃条件下获得可溶性表达产物Trx-LDC1和Trx-LDC2;采用Ni-NTA亲和层析法纯化目的蛋白,建立酶促反应体系分析其脱羧酶活性,薄层层析(TLC)检测表明重组融合蛋白Trx-LDC1和Trx-LDC2均能催化赖氨酸脱羧生成尸胺。利用生物信息学软件分析发现LDC1和LDC2理化性质存在差异,但预测的二级结构和三维结构基本一致。
关键词
蛇足石杉
赖氨酸脱羧酶
基因克隆
原核表达
酶活性
结构预测
Keywords
huperzia serrata
,
lysine decarboxylase
,
gene cloning
,
prokaryotic expression
,
enzyme activity
,
structure prediction
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
蛇足石杉赖氨酸脱羧酶基因的克隆、原核表达及其功能分析
杜次
李菁
唐云涛
彭清忠
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
9
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参考文献
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