不同产地皱边石杉中石杉碱甲的含量研究

目的 :采用HPLC测定湖南不同产地皱边石杉中的石杉碱甲含量。方法 :采用NovapakC18柱 ( 5 μm ,15 0mm×4 .6mm) ,流动相 :甲醇∶水 ( 4 0∶6 0 ) ,流速 :1mL·min-1,检测波长 :315nm。结果 :石杉碱甲在 4 .2～ 2 1μg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系 ,桑植产皱边石杉中石杉碱甲含量最高。结论 :皱边石杉中石杉碱甲的含量随着外界环境的改变而改变 ,所建立的HPLC方法快捷、灵敏、准确。

长柄石杉中石杉碱甲的含量测定

[目的]建立HPLC法测定长柄石杉中石杉碱甲的含量。[方法]色谱条件:色谱柱为ZORBAX Extend-C18(150 mm×4.6 mm,4.5μm),流动相为乙腈-浓度0.02 mol/L磷酸二氢钾(8∶92,V/V),检测波长为310 nm,柱温为25℃,流速为1 ml/min,进样量为10μl。[结果]石杉碱甲在0.046～0.460μg/ml浓度范围内与峰面积呈良好线性关系(R=0.999 9),平均回收率为97.45%,RSD为2.70%,平均含量为0.025%。[结论]该方法简单、易行,可用于长柄石杉中石杉碱甲的含量测定。

药用蕨皱边石杉的形态解剖学研究

对药用蕨皱边石杉茎、叶进行了外部形态、内部结构的解剖学研究,对孢子囊及孢子进行了扫描电镜观察。维管柱逐渐发展成为介于星状中柱和编织中柱之间的一种过渡类型中柱,木质部为外始式;叶为等面叶,外韧维管束。同时对石杉不同组织器官的组培繁殖存在的问题进行了分析和探讨。

一种分离自皱边石杉茎尖共生藻类的鉴定及培养

湖南产皱边石杉茎尖经过表面消毒和内生菌灭菌后,接种于愈伤组织诱导培养基中,结果分离培养出一种与其共生的藻类,经超显微结构鉴定为椭圆小球藻。扫描电镜结果显示,椭圆小球藻聚积成团状;透射电镜结果显示,椭圆小球藻细胞长7~12μm,宽4.5~8.0μm,椭圆小球藻的胞外多糖层明显分为两层,无性生殖时,原生质体直接分裂成4个似亲孢子,从母体中破壁而出。细胞内含有大量的淀粉核,色素体呈片状,占细胞较大部分;藻体内含叶绿素a 0.134 mg/g,叶绿素b 0.047 mg/g,类胡萝卜素0.057 mg/g,叶绿素a/b为2.855。

内生真菌JSM 10的分离及鉴定

以蛇足石杉为材料,经过严格的表面消毒,分离纯化得到1株内生真菌JSM 10.对JSM 10进行培养特征、显微形态观察和基于ITS序列的系统发育分析.结果表明:菌株JSM 10和Fusarium属的Fusarium oxysporum菌株系统发育关系最为密切,聚在同一个小枝上,相似程度为99%.因此,从系统发育分析来看,JSM 10应为Fusarium oxysporum菌株.

皱边石杉内生真菌资源遗传多样性的ISSR分析

目的采用ISSR标记技术从分子水平探讨皱边石杉内生真菌资源的遗传多样性,建立皱边石杉内生真菌资源遗传分化指纹图谱,为筛选可产石杉碱甲的目标菌株提供快捷的判别依据。方法以从皱边石杉中分离的100株内生真菌为材料,建立其ISSR优化反应体系并分析其遗传多样性;TLC、HPLC检测发酵产物。结果优化筛选的10条ISSR引物对皱边石杉内生真菌进行遗传多样性分析,共扩增出3 975条清晰条带,多态性条带占100%。遗传相似系数为0.59～0.96,在0.64水平,皱边石杉内生真菌可分为11类;在0.67水平,第I类又可分为5个亚类。采用引物UBC868对13号菌株及皱边石杉基因组DNA扩增,在500、200 bp均具有清晰的扩增条带,发酵产物经TLC和HPLC检测,发现13号菌株与宿主植物皱边石杉同样可产生石杉碱甲。结论皱边石杉内生真菌资源遗传多样性高,遗传距离较远,遗传基础较宽,与13号菌株同属一类的内生真菌可作为石杉碱甲生产的潜力菌株进行重点筛选和诱变。