槲芪散及其君药槲寄生对大鼠肝癌前病变组织中促凋亡因子Omi/HtrA2表达的影响

目的:探讨槲芪散及其君药槲寄生干预肝癌前病变组织中癌细胞凋亡机制。方法:用电镜观察模型组、正常组以及槲芪散大小剂量组、槲寄生单体组肝细胞线粒体形态学的变化,用免疫组化SP法、Western Blotting法检测各实验组大鼠肝组织丝氨酸蛋白酶Omi/HtrA2的表达。结果:槲芪散治疗组肝细胞线粒体形态较模型组有明显改善;除正常组外,模型组,槲芪散大、小剂量治疗组,槲寄生单体组均有Omi/HtrA2的表达,模型组、正常组、大剂量治疗组、单体组之间丝氨酸蛋白酶的表达量有统计学意义(P<0.05)。结论:槲芪散及其君药槲寄生能够改善肝细胞线粒体的形态和功能,降低Omi/HtrA2总量的表达,并且促使Omi/HtrA2从线粒体释放,诱导肝癌细胞的凋亡。

虎七散通过PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制自噬的机制研究

目的探讨虎七散对食管鳞癌Eca109的抑制作用及机制。方法采用STITCH进行蛋白互作进行蛋白靶点预测,用不同剂量虎七散(30、40 mg/mL)处理人食管鳞癌Eca109细胞24 h,CCK8检测其OD值;采用Western blotting检PI3K、m TOR、Caspase-3蛋白的表达。结果虎七散(30、40 mg/mL)可以抑制食管癌细胞的迁移,通过蛋白互做网络分析与PI3K/Akt/mTOR关系密切,Western blotting结果显示,虎七散(30、40 mg/mL)可以抑制PI3K、mTOR蛋白表达,增加Caspase-3蛋白表达。结论虎七散可以通过PI3K/Akt/mTOR信号通路,诱导食管鳞癌细胞发生自噬,这可能是虎七散抑制食管鳞癌细胞的原因之一。

虎七散联合化疗治疗中晚期痰瘀互结型食管癌的临床研究

目的观察虎七散联合化疗治疗中晚期痰瘀互结型食管癌的近期和远期疗效,初步研究虎七散联合化疗对比单纯化疗的疗效差异性。方法采用前瞻性、多中心、随机对照研究,将符合标准的86例患者按照随机数字表法随机分为对照组和治疗组各43例。主要观察指标为无进展生存期(Progression Free Survival,PFS)、疾病控制率(Disease Control Rate,DCR)和临床症状积分,次要观察指标为体力状况评分(KPS评分)及毒副反应。研究终点为疾病进展或各种原因导致的死亡。结果1.治疗组中位PFS为6.8(4.464~9.136)月,对照组中位PFS为4.8(2.469~7.131)月,差异无统计学意义(P>0.05)。2.治疗组DCR为81.4%,对照组DCR为60.5%,差异有统计学意义(P<0.05)。3.在临床症状积分方面,治疗后两组总积分有显著差异,治疗组优于对照组;治疗组在改善吞咽困难、呕吐带血、呕吐痰涎以及舌苔方面更有优势(P<0.05)。4.在KPS评分方面,治疗组的治疗后评分显著高于治疗前(P<0.05)。治疗后治疗组评分显著高于对照组(P<0.05)。5.在毒副反应方面,出现的主要毒副反应为白细胞减少、胃肠道反应以及脱发等,未出现其它明显不良反应。治疗后两组出现的各毒副反应无明显差异(P>0.05)。治疗组出现Ⅲ~Ⅳ度毒副反应的例数少于对照组,提示虎七散联合化疗可能有降低毒副反应发生的趋势。结论虎七散联合TP方案治疗中晚期痰瘀互结型食管癌较单纯化疗更有优势,主要体现在疾病控制率、中医症状和KPS评分的改善方面,可在临床中推广应用。

虎七散诱导食管癌EC9706细胞线粒体凋亡和铁死亡的研究

目的:本研究旨在探讨虎七散能否通过调控氧化还原和线粒体稳态诱导线粒体凋亡和铁死亡,并进一步分析其对P53蛋白表达的影响。方法:线粒体凋亡试验分为空白对照组、虎七散2、4、8 mg/mL组;铁死亡试验分为空白对照组、铁抑素-110μmol/L组、联合给药组(铁抑素-110μmol/L+虎七散8 mg/mL)、虎七散8 mg/mL组。采用CCK-8法检测细胞存活率;采用试剂盒检测细胞内GSH、MDA含量,SOD活力;ROS荧光探针(DCFH-DA)、脂质过氧化荧光探针(BODIPYTM581/591C11)、线粒体膜电位探针JC-1及铁离子Phen green SK(PGSK)探针,分别测定ROS、脂质ROS、线粒体膜电位及铁离子的荧光强度;Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力;TUNEL一步凋亡法检测细胞凋亡;Western blot法检测细胞线粒体凋亡蛋白(BCL-2、BAX、CytC、Active Caspase-3)、铁死亡蛋白(xCT、ACLS4、GPX4)及P53蛋白的表达。结果:通过线粒体凋亡试验,与空白对照组相比,虎七散8 mg/mL组明显抑制食管癌EC9706细胞增殖,细胞内GSH含量和SOD活力降低,ROS水平增加和线粒体膜电位单体的荧光强度增强,细胞的凋亡率升高,细胞的侵袭和迁移降低,BAX、CytC、Active Caspase-3和P53表达上调,BCL-2表达下调(P<0.05或P<0.01)。铁死亡实验结果显示,与空白对照组相比,虎七散8 mg/mL组的细胞内GSH含量减少,MDA含量增加,ROS水平增加以及线粒体膜电位单体荧光强度增强,铁离子荧光强度降低,ACSL4和P53表达上调,xCT和GPX4表达下调(P<0.05);与虎七散8 mg/mL组相比,铁抑素-110μmol/L+虎七散8 mg/mL组细胞内GSH含量增加,MDA含量降低,ROS水平及线粒体膜电位单体荧光强度均降低,铁离子荧光强度增强,ACSL4和P53蛋白表达下调,xCT和GPX4蛋白表达上调(P<0.05)。结论:虎七散有促氧化作用,能通过促进ROS和脂质ROS过度累积,调控氧化还原和线粒体稳态,诱导线粒体凋亡和铁死亡,上调P53表达;其靶向氧化还原、线粒体稳态及P53,协同线粒体凋亡和铁死亡可能是治疗癌症的潜在药物。

槲芪散对肝癌前病变血清同功酶影响的研究

应用黄曲霉菌毒素B1(AFB1)诱发肝癌癌前病变模型 ,研究槲芪散对肝癌前病变血清同功酶的影响。采用琼脂糖电泳法测定各组动物血清中乳酸脱氢酶 (LDH)总活力及其同功酶、碱性磷酸酶 (ALP)同功酶、血清r 谷氨酰转肽酶同功酶Ⅱ (r GT Ⅱ )。结果 :模型组血清中ALP1、r GT Ⅱ、LDH的活力异常升高 ,且LDH5>LDH4 ;而用槲芪散处理后 ,这些酶的活力明显下降。

中西医结合治疗食管癌临床研究

目的:观察复方虎七散联合卡铂、顺铂、干扰素化疗方案治疗食管癌的临床疗效。方法:将64例食管癌患者随机分为治疗组和对照组,治疗组32例用复方虎七散联合卡铂、顺铂、干扰素方案治疗,对照组32例单用卡铂、顺铂、干扰素方案治疗。比较两组近期疗效、不良反应、血浆D-二聚体、生活质量、临床证候、生存率等变化情况。结果:治疗组近期疗效、不良反应、血浆D-二聚体、生活质量、临床证侯、生存率等治疗组均优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:复方虎七散联合卡铂、顺铂、干扰素方案能提高食管癌患者近期疗效,减轻化疗不良反应,改善患者血液高黏状态,提高生活质量,改善临床症状,提高生存率。