双氢青蒿素诱导外周T细胞淋巴瘤Hut-78细胞凋亡及其可能的机制

目的：考察双氢青蒿素（dihydroartemisinin,DHA）诱导的外周T细胞淋巴瘤Hut-78细胞凋亡,并进一步研究其作用机制。方法：CCK-8法检测1～30μg/ml DHA对Hut-78细胞增殖的影响,运用Hochest 33258染色技术在共聚集显微镜下观察DHA对Hut-78细胞核形态的影响,流式细胞术检测DHA对Hut-78细胞凋亡的影响,10 mmol/L的活性氧（reactive oxygen species,ROS）清除剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）预处理细胞1 h,观察ROS在DHA引起的细胞线粒体膜电位变化中的作用,Western blotting检测在Hut-78细胞凋亡过程中ROS对DHA引起的细胞色素C释放的影响。结果：DHA呈浓度依赖性抑制Hut-78细胞的增殖,并引起细胞核固缩,形成凋亡小体。5、10、20μg/ml DHA引起的细胞凋亡率分别为（25.1±2.8）%、（43.6±3.1）%、（68.9±2.6）%,与对照组相比差异有统计学意义（均P〈0.01）。20μg/ml DHA处理导致Hut-78细胞线粒体膜电位下降（59.4±2.6）%,而经ROS抑制剂NAC预处理之后,线粒体膜电位下降（38.4±2.1）%。DHA能够引起线粒体中细胞色素C的释放,而NAC的预处理能够明显地抑制这一过程,统计结果进一步证明这一点。结论：DHA能够抑制外周T细胞淋巴瘤Hut-78细胞的增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与DHA促进ROS依赖的细胞色素C释放有关。

人皮肤T细胞淋巴瘤系Hut-78细胞FHIT基因缺失的研究

目的 探讨抑癌基因FHIT在Hut 78细胞中的缺失情况。方法 用巢式RT PCR方法研究FHIT的缺失情况。结果 Hut 78细胞中FHIT基因mRNA比正常缩短 ,外显子 5丢失。结论 FHIT基因外显子 5的缺失可能是皮肤T细胞淋巴瘤FHIT基因失活的主要方式 。

抗肝癌单链双功能抗体在Hut-78细胞系中的表达及体外杀伤活性

目的 用携带分泌型抗肝癌单链双功能抗体基因(sFv TNF α)的重组逆转录病毒感染T细胞淋巴瘤Hut 78细胞 ,使其表达并分泌针对人肝癌细胞的sFv TNF α融合蛋白 ,观察转导的T细胞对体外培养肝癌细胞的杀伤作用 .方法 用感染性重组病毒产生细胞C2 2 (PA317/PST)产生的病毒上清转导人T细胞淋巴瘤Hut 78细胞 ,采用PCR、RT PCR、细胞原位杂交及免疫组织化学染色等方法 ,对转导的Hut 78细胞进行DNA、mRNA及蛋白水平的分析 .转导的Hut 78细胞分别与SMMC 772 1、HHCC共培养 ,MTT法检测Hut/PST细胞表达产物对两种肝癌细胞的杀伤作用 .结果 PCR、RT PCR结果显示转导Hut细胞中扩增出外源目的基因对应的电泳条带 .neo基因探针原位杂交显示转导细胞质内有较强的紫蓝色阳性反应信号 ,其阳性率约为 95 % .鼠抗人TNF α多克隆抗体免疫组织化学染色 ,转导细胞质内有明确的棕黄色阳性反应信号 .MTT法检测结果 ,分泌型抗肝癌单链双功能抗体对体外培养的两种肝癌细胞的杀伤率分别为 15 .4 %和2 6 .5 % .结论 分泌型抗肝癌单链双功能抗体基因可以在T细胞中整合并稳定表达 ,其分泌的表达产物对两种肝癌细胞均具有一定的亲合活性 ,并且具有一定的体外杀伤作用 .

吉西他滨联合培美曲塞不同序贯用药时序对HUT-78细胞增殖及凋亡的影响

目的观察吉西他滨与培美曲塞单药及不同时序联合用药方案对人皮肤T细胞淋巴瘤HUT-78细胞增殖及凋亡的影响。方法采用体外培养技术,应用不同浓度的吉西他滨及培美曲塞处理HUT 78细胞,CCK-8法确定两药的IC50值,后应用CCK-8法及Annexin V-FITC法检测两药不同顺序联合应用对HUT-78细胞增殖及凋亡的影响。结果吉西他滨及培美曲塞单药对HUT-78细胞的增殖的抑制具有时间依赖性及浓度依赖性,吉西他滨的IC50值为(7.50±0.71)×10-3μg/ml,培美曲塞的IC50值为(1.72±0.52)μg/ml。不同顺序药物联合应用效果不同,先用培美曲塞后用吉西他滨及同时应用具有协同作用,抑制率及凋亡率均较各单药组高,而先用吉西他滨后用培美曲塞则无协同作用。结论吉西他滨与培美曲塞单药以及不同时序联合应用均可抑制HUT-78的增殖促进凋亡,作用大小与应用时序有关,先用培美曲塞再用吉西他滨的作用最强。

菝葜提取物对Hut-78细胞Bcl-2基因转录水平的影响

目的探讨菝葜提取物对Hut-78细胞Bcl-2基因转录水平的影响。方法利用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定给药后各组的吸光度值,计算各组的Bcl-2/GAPDH值,从而分析Bcl-2基因转录水平的变化。结果菝葜提取物对Bcl-2基因的转录水平具有下调作用,药物浓度在8μg·mL-1时的效果最为明显。结论该菝葜提取物可降低Hut-78细胞的Bcl-2基因的转录。

硼替佐米与吡喃阿霉素联合对T细胞淋巴瘤细胞系Hut-78细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨硼替佐米（BTZ）与吡喃阿霉素（THP）联合对人皮肤T细胞淋巴瘤细胞系Hut-78细胞的增殖抑制作用及其机制.方法 不同浓度的BTZ、THP单药或两药联合作用于Hut-78细胞48 h后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,应用联合指数分析两药是否存在协同效应,在此基础上应用流式细胞术分析细胞周期分布和细胞凋亡情况,利用Western blot法检测细胞周期抑制蛋白P21的变化.结果 BTZ与THP单药对Hut-78细胞增殖具有显著的抑制作用,呈时间和剂量依赖性,两药联合时,BTZ序贯THP组的细胞增殖抑制率显著高于BTZ与THP同时组及THP序贯BTZ组（P值均＜0.01）,当细胞增殖抑制率＞50%时,THP序贯BTZ呈拮抗效应,而BTZ与THP同时及BTZ序贯THP则表现为协同效应,随着增殖抑制作用的增加,仅BTZ序贯THP的协同作用更为显著.BTZ与THP单药能有效诱导Hut-78细胞凋亡,呈剂量依赖性,且BTZ序贯THP的细胞凋亡诱导作用较单药显著增强.BTZ单药可使细胞明显阻滞于G2/M期,上调P21蛋白的表达水平,序贯应用THP可显著增强BTZ对细胞周期的阻滞作用.结论 BTZ序贯THP可协同抑制Hut-78细胞增殖并诱导其凋亡,协同机制可能与序贯应用THP增强BTZ介导的P21表达上调及G2/M期细胞阻滞有关,提示BTZ与THP联合可能成为治疗T细胞非霍奇金淋巴瘤的新选择.

白藜芦醇对人皮肤T细胞淋巴瘤Hut-78细胞增殖和凋亡影响观察

目的:研究白藜芦醇对人皮肤T细胞淋巴瘤(cutaneous T cell lymphomas,CTCL)Hut-78细胞株体外增殖和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法:用不同浓度的白藜芦醇(5、10和20μmol/L)作用于人皮肤CTCL Hut-78细胞,24和48h后MTT检测白藜芦醇对细胞增殖的影响;TUNEL末端标记法和AnnexinⅤ-FITC双标记流式法检测白藜芦醇对细胞凋亡的影响。结果:经5、10和20μmol/L浓度的白藜芦醇处理24h后,细胞A值分别为1.202±0.094、0.568±0.019和0.535±0.033,与0μmol/L A值(1.272±0.107)比较,差异有统计学意义,P<0.01。各浓度作用48h后,细胞A值分别为0.604±0.095、0.314±0.042和0.260±0.055,与0μmol/L A值(0.781±0.020)比较,差异有统计学意义,P<0.01;与作用24h后同浓度A值比较,差异均有统计学意义,P<0.01。随着时间和浓度的增加Hut-78细胞生长均受到不同程度的抑制,呈明显的浓度和时间依赖性。经5、10和20μmol/L浓度的白藜芦醇处理24h后,HUT-78细胞抑制率分别为(5.28±2.64)%、(53.52±10.86)%和(56.13±10.79)%,与0μmol/L抑制率(0)比较,差异均有统计学意义,P<0.01;HUT-78细胞凋亡率分别为92.35%、96.39%和98.56%,与0μmol/L凋亡率(55.7%)比较,差异均有统计学意义,P<0.01;各浓度作用48h后,HUT-78细胞抑制率分别为(22.85±10.98)%、(59.77±5.44)%和(66.52±7.80)%,与0μmol/L细胞抑制率(0)比较,差异均有统计学意义,P<0.01;与作用24h后同浓度细胞抑制率比较,差异均有统计学意义,P<0.01。结论:达到5μmol/L的白藜芦醇对人皮肤T细胞淋巴瘤Hut-78细胞产生明显的抑制增殖作用,白藜芦醇主要通过诱导HUT-78细胞凋亡,其中主要是早期凋亡抑制其增殖。

CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除HuT-78细胞PD-1分子对其增殖能力的影响

利用CRISPR/Cas9技术成功敲除人T细胞系HuT-78细胞中编码PD-1分子的基因PDCD1,并比较敲除了PDCD1基因的及对照组的HuT-78细胞增殖能力的差异。实验结果显示敲除PDCD1基因的HuT-78细胞的增殖能力不受PD-L1的影响,为将此技术应用于肿瘤免疫治疗提供了实验依据。

Vasoactive intestinal peptide signaling axis in human leukemia

The vasoactive intestinal peptide (VIP) signaling axis constitutes a master "communication coordinator" between cells of the nervous and immune systems.To date,VIP and its two main receptors expressed in T lymphocytes,vasoactive intestinal peptide receptor (VPAC)1 and VPAC2,mediate critical cellular functions regulating adaptive immunity,including arresting CD4 T cells in G 1 of the cell cycle,protection from apoptosis and a potent chemotactic recruiter of T cells to the mucosa associated lymphoid compartment of the gastrointestinal tissues.Since the discovery of VIP in 1970,followed by the cloning of VPAC1 and VPAC2 in the early 1990s,this signaling axis has been associated with common human cancers,including leukemia.This review highlights the present day knowledge of the VIP ligand and its receptor expression profile in T cell leukemia and cell lines.Also,there will be a discussion describing how the anti-leukemic DNA binding transcription factor,Ikaros,regulates VIP receptor expression in primary human CD4 T lymphocytes and T cell lymphoblastic cell lines (e.g.Hut-78).Lastly,future goals will be mentioned that are expected to uncover the role of how the VIP signaling axis contributes to human leukemogenesis,and to establish whether the VIP receptor signature expressed by leukemic blasts can provide therapeutic and/or diagnostic information.

兴安升麻皂甙体外SIV抑制作用及其机制

以猴艾滋病病毒ＳＩＶ作为人艾滋病病毒ＨＩＶ体外模型，观察了兴安升麻皂甙（Ｃｄ－Ｓ）在Ｈｕｔ－７８－ＳＩＶ体外培养系统对ＳＩＶ的抑制作用，并与阳性药叠氮胸苷（ＡＺＴ）的作用进行了比较。结果２００ｍｇ／ｍｌＣｄ－Ｓ可抑制荧光阳性细胞数。抑制率为２４．００％，ＳＩＶ产量下降２～３个单位，细胞病变程度亦有所缓解。与阳性药ＡＺＴ相比，Ｃｄ－Ｓ对ＳＩＶ的抑制作用仅为轻度。为探讨其作用机制，同时观察了Ｃｄ－Ｓ在体外ＰＨＡ刺激的淋巴细胞培养系统对３Ｈ－ＴｄＲ转运的影响，结果表明１７５．０μｇ／ｍｌ剂量Ｃｄ－Ｓ可明显抑制３Ｈ－ＴｄＲ的转运，抑制率达９３．８５％，提示Ｃｄ－Ｓ是通过抑制细胞膜的核苷转运过程，导致ＳＩＶ在宿主细胞内自身ＤＮＡ合成受限，ＳＩＶ产量下降，表现为Ｃｄ－Ｓ对ＳＩＶ的抑制作用。

西达本胺联合姜黄素对人皮肤T细胞淋巴瘤细胞系Hut78的影响及其分子机制

目的研究西达本胺联合姜黄素对皮肤T细胞淋巴瘤（CTCL）细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用，探讨西达本胺联合姜黄素治疗CTCL的机制。方法分别用0．3、0．6、1．2、2．4μmol／L西达本胺，10μmol／L姜黄素，1．2μmol／L西达本胺联合10μmol／L姜黄素处理Hut78细胞24、48、72h后，采用MTS法检测Hut78细胞的生存率。用0．6、1．2μmol／L西达本胺，10μmol／L姜黄素，1．2μmol／L西达本胺联合10μmol／L姜黄素分别处理Hut78细胞24h，用流式细胞仪检测细胞凋亡情况及细胞周期，用实时PCR和Western印迹法检测凋亡相关基因Fas、caspase8、NF—κBp65及细胞周期相关基因P21、CDK2、细胞周期蛋白E（cyclinE）mRNA和蛋白的表达。统计分析采用重复测量方差分析、单因素方差分析和LSD-t检验。结果西达本胺能明显抑制Hut78细胞的增殖，且呈剂量依赖性（F=266．558，P〈0．001）和时间依赖性（F=564．966，P〈0．001）。培养48h和72h时，1．2μmol／L西达本胺联合10μmol／L姜黄素对细胞增殖的抑制作用显著强于1．2μmol／L西达本胺及10μmol／L姜黄素（均P〈0．001）。流式细胞仪结果显示，联合组的凋亡细胞比例均显著高于0．6、1．2μmol／L西达本胺组和10μmol／L姜黄素组（均P〈0．001）。此外，联合组和1．2μmol／L西达本胺组G0／G1期细胞比例明显高于0．6μmol／L西达本胺组和10μmol／L姜黄素组，而其S期细胞比例及G2／M期细胞比例均明显低于0．6μmol／L西达本胺组和10μmol／L姜黄素组（均P〈0．05），联合组与1．2μmol／L西达本胺组各细胞周期比例差异均无统计学意义（均P〉0．05）。实时PCR结果显示，联合组和1．2μmol／L西达本胺组Fas、caspase8、P21mRNA的表达均明显高于0．6μmol／L西达本胺组和10μmol／L姜黄素组（均P〈0．001），而其NF—κBp65、CDK2、eyclinEmRNA的表达均明显低于0．6μmol／L西达本胺组和10μmol／L姜黄素组（均P〈0．001）。联合组FasmRNA的表达明显高于1．2μmol／L西达本胺组（P〈0．001），而easpase8、P21、NF—κBp65、CDK2、cyclinEmRNA的表达与1．2μmol／L西达本胺组差异无统计学意义（均P〉0．05）。Western印迹结果显示，联合组与0．6、1．2μmol／L西达本胺、不加药物的对照组比较，Fas、caspase8、P21蛋白的表达明显增加，而NF—κBp65、CDK2、CyelinE蛋白的表达明显降低，与以上基因mRNA的表达一致。结论西达本胺通过抑制细胞增殖和促进细胞凋亡来抑制CTCL细胞系Hut78生长，联合姜黄素能明显提高抑制CTCL细胞系Hut78的生长率。