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绵羊肺腺瘤病毒SU蛋白与Hyal-2蛋白的结合域研究 被引量:3
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作者 张月梅 赵世华 +1 位作者 么宏强 马学恩 《动物医学进展》 北大核心 2016年第4期49-53,共5页
试验证明绵羊的Hyal-2不仅可以与绵羊肺腺瘤病毒的囊膜蛋白Env结合,也可以单独与绵羊肺腺瘤病毒SU蛋白亚基结合。为了进一步研究绵羊Hyal-2与SU蛋白可能结合的区域,应用在线生物学软件预测了SU蛋白的膜外区(对应编码基因序列238bp^867bp... 试验证明绵羊的Hyal-2不仅可以与绵羊肺腺瘤病毒的囊膜蛋白Env结合,也可以单独与绵羊肺腺瘤病毒SU蛋白亚基结合。为了进一步研究绵羊Hyal-2与SU蛋白可能结合的区域,应用在线生物学软件预测了SU蛋白的膜外区(对应编码基因序列238bp^867bp)将之前已经构建的缺失型SU蛋白真核表达载体pEGFP-C1-(su1-su5)与pDsRed-monomer-N1-hyal-2共转染293T细胞,运用激光共聚焦方法结合免疫共沉淀方法确定SU蛋白和Hyal-2蛋白可能结合区域。激光共聚焦显微镜观察结果表明,SU1-SU5与Hyal-2均存在细胞内共定位。免疫共沉淀方法检测缺失型蛋白SU1-SU5与绵羊Hyal-2均不存在相互作用。su基因所缺失区域238bp^867bp对于SU蛋白与受体的结合都是必不可少的。 展开更多
关键词 绵羊肺腺瘤病毒 SU蛋白 hyal-2蛋白 结合区域
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构建稳定表达JSRV受体Hyal-2小鼠肺上皮细胞系
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作者 孙丽红 骆爽 +2 位作者 张德纯 斯日古楞 么宏强 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第12期211-213,318,共4页
为了构建稳定表达绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)受体透明质酸酶-2(Hyal-2)蛋白的小鼠肺上皮细胞系,试验采用将重组质粒p DsRed-monomer-N1-Hyal-2转染小鼠肺上皮细胞后,用G418对转染后的细胞进行筛选、纯化,通过对不同培养代次的细胞系进行倒置... 为了构建稳定表达绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)受体透明质酸酶-2(Hyal-2)蛋白的小鼠肺上皮细胞系,试验采用将重组质粒p DsRed-monomer-N1-Hyal-2转染小鼠肺上皮细胞后,用G418对转染后的细胞进行筛选、纯化,通过对不同培养代次的细胞系进行倒置荧光显微镜观察、RT-PCR、基因测序、Western-blot等方法加以验证。结果表明:试验成功构建了JSRV受体Hyal-2蛋白小鼠肺上皮细胞系,在传至20代后Hyal-2仍在该细胞系中稳定表达。说明该细胞系的成功建立,为研究绵羊Hyal-2对JSRV转化目的细胞能力的影响提供了一种体外试验平台。 展开更多
关键词 绵羊肺腺瘤病毒(JSRV) 透明质酸酶-2(hyal-2) 受体 转染 小鼠肺上皮细胞系
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Expression of Endogenous Beta Retroviruses and Hyal-2 mRNA in Immune Organs of Fetuses and Lambs 被引量:5
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作者 Jing-wei Qi Xiao-li Wu +1 位作者 Shu-ying Liu Gui-fang Cao 《Virologica Sinica》 CAS CSCD 2012年第2期83-92,共10页
Endogenous beta retroviruses (enJSRV) are highly homologous with Jaagsiekte sheep retrovirus (exJSRV),this exogenous retrovirus is the aetiological agent of ovine pulmonary adenocarcinoma (OPA). The aim of this study ... Endogenous beta retroviruses (enJSRV) are highly homologous with Jaagsiekte sheep retrovirus (exJSRV),this exogenous retrovirus is the aetiological agent of ovine pulmonary adenocarcinoma (OPA). The aim of this study was to clarify the function of enJSRV and the immunological mechanisms of its corresponding antibody, that is undetectable in JSRV-infected ovine serum. The expression of enJSRV envelope protein and Hyal-2 mRNA in immune organs and lungs of ovine fetuses and lambs were analyzed by Real-Time reverse transcription PCR and In Situ Hybridization using specific probes. In Situ Hybridization results indicated that the enJSRV envelope protein and Hyal-2 mRNA were expressed in thymus, spleen, mesenteric lymph nodes and lungs at different times, while no positive signals were detected in the negative controls. On the other hand, results from Real-Time reverse transcription PCR analysis showed that in 130d fetuses and 3d newborn lambs the enJSRV mRNA levels were much higher in organs associated with the immune system than that in lungs, especially in the thymus and spleen, but levels of Hyal-2 mRNA expression was not significantly different in all collected tissue. These results provided evidence from an immunology point of view to understand why the circulating antibodies against exJSRV are undetectable in JSRV-infected ovine, and will help to unravel the pathogenesis of JSRV-infected ovine. 展开更多
关键词 OVINE ENJSRV hyal-2 In Situ Hybridization Real-Time PCR
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绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白及其TM亚基通过激活Akt诱导NIH 3T3细胞转化 被引量:4
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作者 刘畅 李磊 +3 位作者 于立新 么宏强 周建华 马学恩 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期606-610,共5页
为进一步研究绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)囊膜蛋白(Env)及其亚基诱导NIH 3T3细胞转化的分子机制,本研究利用JSRV Env及其亚基真核细胞表达质粒分别诱导转化NIH 3T3细胞和稳定表达JSRV受体绵羊Hyal-2的NIH 3T3-Hyal2-HA细胞,并检测转化后细胞... 为进一步研究绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)囊膜蛋白(Env)及其亚基诱导NIH 3T3细胞转化的分子机制,本研究利用JSRV Env及其亚基真核细胞表达质粒分别诱导转化NIH 3T3细胞和稳定表达JSRV受体绵羊Hyal-2的NIH 3T3-Hyal2-HA细胞,并检测转化后细胞的接触抑制特性、Akt的激活和肿瘤相关基因的突变。结果显示,在NIH 3T3细胞中,Env及其穿膜蛋白亚基(TM)均具有诱导细胞转化、激活Akt的能力;而在NIH 3T3-Hyal2-HA细胞中,仅TM具有这样的能力。在细胞转化的过程中,肿瘤相关基因kras、nras、egfr、p53和pik3ca均未发生突变。结果表明,在JSRV Env诱导NIH 3T3细胞转化并激活Akt的过程中,TM亚基可能起主要作用,并且还具有单独诱导NIH 3T3细胞转化的能力;绵羊Hyal-2具有抑制JSRV Env诱导NIH 3T3细胞转化的作用。JSRV Env及其亚基诱导NIH 3T3细胞转化的分子机制可能与肿瘤相关基因突变无关。 展开更多
关键词 绵羊肺腺瘤病毒 hyal-2 转化 AKT
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