为研究蛋白酶酶解制备猪肠粘膜蛋白粉工艺,以天然猪肠衣加工副产物肠粘膜为原料,以酶解产物中可溶性蛋白含量为指标,通过单因素实验和响应面实验,筛选适宜用于酶解猪小肠粘膜的蛋白酶并对其酶解工艺条件进行优化。结果表明,木瓜蛋白酶...为研究蛋白酶酶解制备猪肠粘膜蛋白粉工艺,以天然猪肠衣加工副产物肠粘膜为原料,以酶解产物中可溶性蛋白含量为指标,通过单因素实验和响应面实验,筛选适宜用于酶解猪小肠粘膜的蛋白酶并对其酶解工艺条件进行优化。结果表明,木瓜蛋白酶酶解猪肠粘膜制备蛋白粉可溶性蛋白含量达7.37%±0.06%,显著高于胰蛋白酶和胃蛋白酶酶解制备得到的肠粘膜蛋白粉可溶性蛋白含量,最佳酶解工艺条件为:水解时间6.5 h,酶添加量5400 U/g蛋白,液固比4 m L/g,在此条件下酶解产物中可溶性蛋白含量为15.81%±0.04%,这表明酶法制备肠粘膜蛋白粉工艺合理可行,为动物副产物的开发利用提供参考依据。展开更多
猪小肠粘膜经过Tris-HCl缓冲液(pH8.5)充分溶解、正丁醇除脂、冷冻离心、真空冻干等步骤处理后,先后经过Phenyl High Performance疏水层析/DEAE Fast Flow阴离子层析/Sephacryl S-200凝胶层析纯化后得到猪小肠粘膜ALP(碱性磷酸酶),并对...猪小肠粘膜经过Tris-HCl缓冲液(pH8.5)充分溶解、正丁醇除脂、冷冻离心、真空冻干等步骤处理后,先后经过Phenyl High Performance疏水层析/DEAE Fast Flow阴离子层析/Sephacryl S-200凝胶层析纯化后得到猪小肠粘膜ALP(碱性磷酸酶),并对其蛋白二级结构及理化性质进行研究。结果表明:该酶经过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离得到ALP蛋白带,分子量约为57.0 kDa。该酶纯化倍数为68.2,比活力倍数为19.1 U/mg。利用圆二色性光谱测定纯化后蛋白二级结构,发现α-螺旋3.6%、β-折叠41.8%、β-转角21.5%、无规则卷曲33.1%。ALP在催化底物对硝基苯磷酸二钠(p-NPP)作用下最佳温度30℃、最佳pH为9.5;金属离子对ALP起到激活的离子为Mg^2+和Ca^2+,起到抑制的离子为Zn^2+和EDTA。展开更多
文摘为研究蛋白酶酶解制备猪肠粘膜蛋白粉工艺,以天然猪肠衣加工副产物肠粘膜为原料,以酶解产物中可溶性蛋白含量为指标,通过单因素实验和响应面实验,筛选适宜用于酶解猪小肠粘膜的蛋白酶并对其酶解工艺条件进行优化。结果表明,木瓜蛋白酶酶解猪肠粘膜制备蛋白粉可溶性蛋白含量达7.37%±0.06%,显著高于胰蛋白酶和胃蛋白酶酶解制备得到的肠粘膜蛋白粉可溶性蛋白含量,最佳酶解工艺条件为:水解时间6.5 h,酶添加量5400 U/g蛋白,液固比4 m L/g,在此条件下酶解产物中可溶性蛋白含量为15.81%±0.04%,这表明酶法制备肠粘膜蛋白粉工艺合理可行,为动物副产物的开发利用提供参考依据。
文摘猪小肠粘膜经过Tris-HCl缓冲液(pH8.5)充分溶解、正丁醇除脂、冷冻离心、真空冻干等步骤处理后,先后经过Phenyl High Performance疏水层析/DEAE Fast Flow阴离子层析/Sephacryl S-200凝胶层析纯化后得到猪小肠粘膜ALP(碱性磷酸酶),并对其蛋白二级结构及理化性质进行研究。结果表明:该酶经过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离得到ALP蛋白带,分子量约为57.0 kDa。该酶纯化倍数为68.2,比活力倍数为19.1 U/mg。利用圆二色性光谱测定纯化后蛋白二级结构,发现α-螺旋3.6%、β-折叠41.8%、β-转角21.5%、无规则卷曲33.1%。ALP在催化底物对硝基苯磷酸二钠(p-NPP)作用下最佳温度30℃、最佳pH为9.5;金属离子对ALP起到激活的离子为Mg^2+和Ca^2+,起到抑制的离子为Zn^2+和EDTA。
