Process Optimization and Content Determination of Total Flavonoids of Zhuang Medicine Clerodendrum japonicum(Thumb.)Sweet

[Objectives]To optimize the extraction process of total flavonoids of Zhuang medicine Clerodendrum japonicum(Thumb.)Sweet and establish a method for its extraction and content determination.[Methods]The total flavonoids of C.japonicum were extracted by reflux extraction method.Through a single factor experiment,the effects of extraction method,extraction solvent concentration,extraction volume and extraction time on the total flavonoids content of medicinal materials were investigated to select the optimal extraction process of the total flavonoids of C.japonicum.[Results]The optimal extraction process of the total flavonoids of C.japonicum was 75%ethanol,1∶20 solid-to-liquid ratio,and 50 min reflux extraction time.[Conclusions]This method can effectively determine the content of total flavonoids in C.japonicum and provide a certain scientific basis for the study of the quality standard of this Zhuang medicine.This method has high reproducibility.It is stable and feasible in extraction of total flavonoids from Zhuang medicine C.japonicum.

New Constituents from Hypericum Japonicum

Two new glycosides 1,5-dihydroxyxathanone-6-o-beta-D-glucoside and flavanonol-taxifolin-3, 7-o-alpha-L-dirhamnoside. were isolated from the aerial parts of Hypericum japonicum Thunb, ex Murray, The chemical structures were determined by spectroscopic methods and chemical evidences

A New Bisxanthone from Hypericum japonicum Thunb.ex Murray

A new bisxanthone, named bijaponicaxanthone C, was isolated from the whole plant of Hypericum japonicum. The structure was elucidated as 6-[1’’,5’’,6’’-trihydroxy-2’’’-(β-hydroxy-β- methylethyl)-2’’’,3’’’-dihydrofuran(5’’’,4’’’,3’’,4’’)xanthone-3’’’-oxyl]-1,3,5-trihydroxy-4-isoprenylxant- hone (1) on the basis of the spectral and chemical evidences.

New Prenylated flavonol from Hypericum japonicum

One new prenylated flavonol, 7,8-(2'',2'' -dimethylpyrano)-5,3',4'-trihydroxy-3-methoxyflavone was isolated from Hypericum japonicum. The chemical structure was determined by spectroscopic methods.

New Phloroglucinol Glycosides from Hypericum japonicum

Two new phloroglucinol glycosides, 2,6-dihydroxy-3,5-dimethyl-1-isobutyrylbenzene-4-O-beta-D-glucoside and 2,6-dihydroxy-3,5-dimethyl-1-(2-methylbutyryl) benzene-4-O-beta-D-glucoside were isolated from Hypericum japonicum. Their structures were determined by spectroscopic and chemical methods.

基于细胞凋亡探讨白金方对心肌缺血再灌注损伤大鼠的心肌保护作用及机制

目的:通过构建心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠模型,基于细胞凋亡相关通路,观察白金方(乌腺金丝桃、薤白、瓜蒌)对细胞凋亡的影响,进而探讨其对大鼠心肌缺血再灌注损伤的心肌保护作用及相关机制。方法:将3月龄的SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、预处理组、白金方不同比例配伍组(乌腺金丝桃:薤白:瓜蒌)1:1:3组、2:1:3组、3:1:3组。构建大鼠MIRI模型。白金方不同比例配伍组使用不同比例配伍的白金方,灌胃14 d,其余组给予生理盐水灌胃14 d。采用ELISA法测定各组大鼠心肌组织中MDA、SOD含量;使用荧光定量PCR检测心肌细胞凋亡相关基因(BCL-xl、BCL-2)表达水平。结果:白金方(乌腺金丝桃:薤白:瓜蒌)1:1:3组、2:1:3组、3:1:3组均能使心肌组织中的氧化应激指标MDA、SOD含量降低(P<0.05)。2:1:3组、3:1:3组不同程度增加抑制凋亡基因BCL-xl、BCL-2 mRNA的表达水平(P<0.05),进而抑制细胞凋亡,其中3:1:3组抗凋亡能力最佳(P<0.01)。结论:白金方对大鼠MIRI过程的凋亡、抗凋亡基因表达水平进行调控,发挥其心肌保护作用。

基于网络药理学和分子对接探究壮药地耳草抗肝纤维化的潜在作用机制

目的基于网络药理学与分子对接技术探究传统壮药地耳草抗肝纤维化的作用机制。方法利用网络药理学技术搜集地耳草药物作用靶点和肝纤维化疾病靶点,绘制构建“地耳草核心成分-作用靶点”及蛋白-蛋白相互作用网络图,最后使用Discovery studio对分子对接结果进行可视化处理、分析并预测其作用机制。结果筛选得到地耳草有效活性成分7种,药物靶点227个。在药物作用通路中涉及到肝纤维化的主要有Ras-proximate-1信号通路、内分泌抵抗、表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂耐药性通路等;分子对接结果显示,地耳草活性成分与核心靶点蛋白均有较好的结合活性;在地耳草抗肝纤维化核心靶点中,非受体酪氨酸激酶能够竞争血管内皮生长因子结合靶点,或者在血管内皮生长因子的作用下抑制肝血管的再生,可起到阻断肝纤维化进展的作用。蛋白激酶B能够经过血管内皮生长因子诱导后非受体酪氨酸激酶激活其激活PKB/Akt细胞信号传导通路,抑制凋亡诱导基因的表达和蛋白水解酶的活性,减缓肝固有细胞的损伤。结论地耳草有效活性成分能够发挥抗肝纤维化作用,但地耳草在肝纤维化不同进程中具有不同的效果,其药物作用机制有待进一步研究。

基于标准汤剂的地耳草配方颗粒质量标准研究

目的以地耳草标准汤剂为基础建立其配方颗粒的质量标准,为地耳草配方颗粒质量评价提供参考。方法采用高效液相色谱法测定饮片、标准汤剂及配方颗粒中槲皮苷、异槲皮苷的质量分数,计算2种成分转移率,并且采用高效液相色谱建立了标准汤剂及配方颗粒特征分析方法。结果15批标准汤剂样品中槲皮苷、异槲皮苷的质量分数为13.66~32.11 mg/g,4.00~16.81 mg/g,转移率为45.7%~63.5%,37.8%~56.9%,3批配方颗粒槲皮苷的质量分数为16.16、17.02、16.52 mg/g,转移率为55.2%、58.2%、55.3%,异槲皮苷的质量分数为7.61、7.93、7.56 mg/g,转移率为45.0%、48.8%、44.7%;各样品特征图谱与对照图谱的相似度均大于0.90,所建立的特征图谱标定共有峰7个,其中指认了4个,峰3为异槲皮苷、峰5为槲皮苷、峰6为白前苷B、峰7为槲皮素;聚为2类,2种主成分的累积方差贡献率达84.85%。结论所创建的质量分数测定及特征图谱HPLC方法的专属性强、重复性好、合理准确,得到的地耳草标准汤剂、配方颗粒一致性良好,可以对地耳草配方颗粒的质量进行控制和整体性评价提供参考。

田基黄总黄酮提取工艺优化、降血糖活性评价及成分分析

目的优化田基黄总黄酮的超声波辅助提取-低共熔溶剂提取工艺,评价其体外降血糖活性,并初步分析其化学成分。方法以氢键受体及供体组成、摩尔比、含水量为考察因素,以总黄酮得率为响应值,筛选田基黄总黄酮提取的最适低共熔溶剂;以液料比、超声功率、超声温度、超声时间为考察因素,以总黄酮得率为响应值,结合单因素实验和Box-Behnken响应面法优化田基黄总黄酮的提取工艺并验证;以阿卡波糖为阳性对照,测定田基黄总黄酮对α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶的体外抑制活性;采用超高效液相色谱法,通过对比对照品分析其化学成分。结果最适低共熔溶剂为氯化胆碱-草酸(摩尔比1∶1,含水量30%);最优提取工艺为液料比52∶1(mL/g)、超声温度54℃、超声功率240 W、超声时间42 min,3次验证实验的总黄酮得率为(73.26±2.48)mg/g,与理论值(73.48 mg/g)的相对误差为-0.30%。田基黄总黄酮对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的半数抑制浓度分别为0.73、0.44 mg/mL,均高于阿卡波糖的0.23、0.15 mg/mL。田基黄总黄酮提取物中含有异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷、槲皮素。结论优化所得田基黄总黄酮提取工艺稳定、可行,其提取物具有一定的体外降血糖活性,含有异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷等成分。

地耳草总黄酮提取工艺优化与含量测定

采用回流提取法提取地耳草(Hypericum japonicum Thumb.)总黄酮,通过单因素试验,考察提取方法、提取溶剂体积分数、提取体积、提取时间对总黄酮含量的影响,采用正交试验,优化提取工艺条件,筛选出地耳草总黄酮的最佳提取工艺。结果表明,地耳草总黄酮的最佳提取工艺为75%乙醇、料液比1∶30(g/mL)、回流提取时间1.0 h。该方法重复性好、稳定,能有效测定地耳草总黄酮的含量,为该药材的质量标准研究提供一定的科学依据。

田基黄不同提取物含药血清体外抗乙肝和抗肝癌作用的实验研究

目的观察田基黄不同提取物的含药血清体外抗乙肝和抗肝癌的作用。方法采用酶链免疫法,观察田基黄不同提取物的含药血清对2215细胞分泌HBeAg和HBsAg的抑制作用。采用MTT技术,观察田基黄不同提取物的含药血清对肝癌细胞BEL-7404增殖的抑制作用。结果当含药血清浓度为5%时,田基黄乙醇总提取物和正丁醇提取物对HBeAg和HBsAg呈现较好抑制作用,抑制率分别为34.84%和57.95%,以及76.02%和53.15%(P<0.05);当含药血清浓度为20%时,醋酸乙酯提取物对HBeAg和HBsAg呈现较好的抑制作用,抑制率分别为79.79%和57.22%(P<0.05);水提取物3种浓度的含药血清对HBeAg和HBsAg都有较好的抑制作用,抑制率分别达到了70%和30%以上(P<0.05)。田基黄各提取物对肝癌BEL-7404细胞都有一定的抑制作用,该抑制作用呈明显的量效关系,当含药血清浓度为20%时,乙醇总提取物、醋酸乙酯提取物、正丁醇提取物和水提取物的抑制率分别为29.74%,53.80%,40.79%和54.24%(P<0.01)。结论田基黄不同提取物含药血清能抑制2215细胞分泌HBeAg和HBsAg,并且能抑制肝癌细胞BEL-7404的增殖。其抗乙肝的有效成分主要分布在田基黄的水提取物中,而抗肝癌的有效成分则均衡分布于各种极性部位。

田基黄黄酮类化学成分的研究

目的 :对田基黄的化学成分进行研究。方法 :用多种色谱方法对田基黄乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分进行化学成分的分离 ,并用波谱技术鉴定其化学结构。结果 :从田基黄中分离得到了 7个黄酮类化合物经鉴定为山柰酚 (Ⅰ )、槲皮素 (Ⅱ )、5 ,7,3′ ,4′ 四羟基 3 甲氧基黄酮 (Ⅲ )、槲皮苷 (Ⅳ )、异槲皮苷 (Ⅴ )、槲皮素 7 O 鼠李糖苷 (Ⅵ )、3,5 ,7,3′ ,5′ 五羟基二氢黄酮醇 (Ⅶ )。结论 :田基黄中含有丰富的黄酮类化合物 ,其中化合物Ⅲ。

田基黄酮成分的研究

采用萃取 ,硅胶及凝胶柱色谱等方法从田基黄全草中分离得到了 7个酮类化合物 ,利用UV、IR、1HNMR、13 CNMR、MS等波谱技术将他们的结构分别鉴定为 6 脱氧异巴西红厚壳素 (1)、异巴西红厚壳素(2 )、1,3,5 ,6 四羟基酮 (3)、1,3,6 ,7 四羟基酮 (4) ,1,3,5 ,6 四羟基 4 异戊烯酮 (5 )、1,3,5 三羟基酮(6 )和bijaponicaxanthone(7) ,其中化合物 3、4和 6为首次从该植物中分得的酮类化合物。

田基黄的化学成分研究

目的研究田基黄(Hypericum japonicum Thunb.)的化学成分。方法运用多种色谱技术对田基黄的化学成分进行系统研究,根据光谱数据鉴定化合物结构。结果分离鉴定了12个化合物,分别为:异巴西红厚壳素(Ⅰ),槲皮素(Ⅱ),山柰酚(Ⅲ),槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷(Ⅳ),槲皮苷(Ⅴ),异槲皮苷(Ⅵ),槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(Ⅶ),田基黄双酮(Ⅷ),3,8″-biapigenin(Ⅸ),白桦酸(Ⅹ),豆甾醇(Ⅺ),豆甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅻ)。结论化合物Ⅶ,Ⅸ,Ⅻ为首次从该植物中分离得到。

响应面法优化钙离子沉淀分离田基黄槲皮素

利用响应面(RSM)优化法研究了钙离子沉淀分离田基黄槲皮素的工艺条件。考察了石灰水用量、沉淀温度和沉淀时间对槲皮素得率的影响。结果表明,用64 mL饱和澄清石灰水做沉淀剂,61℃沉淀31 min,槲皮素的得率为3.256%。分离产物用高效液相色谱结合标样进行定性分析,结果与标准品一致。

RP-HPLC同时测定田基黄药材中异槲皮苷、槲皮苷和槲皮素的含量

目的:建立田基黄药材中异槲皮苷、槲皮苷和槲皮素的 RP-HPLC 同时含量测定方法。方法:使用 Hypersil C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)柱,以乙腈(A)-0.02 mmol·L^(-1)磷酸二氢钾缓冲液(磷酸调 pH 3.0)(B)为流动相进行梯度洗脱(0～20 min,A 相为14%;20～35 min,A 相从14%变至30%;35～45 min,A 相从30%变至38%),流速:1.0 mL·min^(-1),检测波长:360 nm,柱温:35℃。结果:异槲皮苷、槲皮苷和槲皮素浓度分别在9.90～330μg·mL^(-1)(r=0.9996,n=6)、19.2～640 μg·mL^(-1)(r=0.9998,n=6)和2.16～72.0 μg·mL^(-1)(r=0.9997,n=6)范围内与峰面积积分值线性关系良好;平均加样回收率(n=9)分别为97.2%,99.1%,98.9%。结论:不同购买地田基黄药材中异槲皮苷、槲皮苷和槲皮素含量存在较大差异;该方法简便可靠,重复性好,为田基黄药材质量控制提供了方法。

分光光度法测定田基黄中总黄酮的含量

目的建立紫外分光光度法测定田基黄药材中总黄酮含量的方法。方法利用黄酮类化合物母核上的酚羟基能与铝离子络合而显色,采用分光光度法,以槲皮苷为对照品,以10%三氯化铝醇溶液为显色剂,在波长273nm处对样品中的总黄酮进行含量测定。结果总黄酮在3.20～16.0μg.mL-1范围内线性良好(r=0.9999);该法的平均加样回收率为98.25%,RSD为2.21%(n=9);且该法稳定性较好,24.0h内吸光度基本无变化,RSD为0.40%(n=6)。结论该方法稳定、简便、快速,适用于田基黄药材中总黄酮的含量测定。

微波消化火焰原子吸收分光光度法测定田基黄中重金属

采用微波消解田基黄样品,用火焰原子吸收分光光度法测定了5种重金属含量。结果表明,田基黄中锌、铜、铅、铬、镉含量依次为193.94,36.51,77.68,13.68,49.06μg/g,平均加标回收率分别为100.03%,101.02%,103.11%,101.06%,103.92%,RSD分别为0.89%,1.62%,4.01%,3.81%,4.27%。精密度和重复性实验的RSD为0.28%～2.68%和1.02%～3.8%。

田基黄总黄酮抗胆管结扎所致大鼠肝纤维化的研究

采用胆总管结扎法制备肝纤维化大鼠模型,对田基黄总黄酮抗大鼠肝纤维化作用进行了研究。从造模首日起,灌胃给药,每天给予田基黄总黄酮(9、18、36 mg/kg)1次,4周后,测定血清总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、TNF-α水平及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(Hyp)的含量及MMP-1、TIMP-1蛋白的表达。结果表明,田基黄总黄酮能显著降低胆总管结扎诱导的肝纤维化大鼠血清中TBIL、DBIL、ALT、AST、PCⅢ、HA、LN的水平、肝组织中Hyp的含量和TIMP-1蛋白的表达,说明田基黄总黄酮具有良好的抗胆汁性肝纤维化的作用。此外,田基黄总黄酮也能提高肝组织SOD、GSH-Px的活性,降低肝组织MDA及血清中TNF-α的含量。田基黄总黄酮可抑制胆总管结扎诱导的大鼠肝纤维化的形成,其抗肝纤维化作用可能与其抗氧化作用及抗TNF-α的分泌有关。

田基黄对大鼠呼吸道及全身免疫功能的影响

目的 :研究田基黄对大鼠呼吸道及全身免疫功能的影响。方法 :将雄性重 2 0 0～ 2 5 0 g Wistar大鼠随机分成对照组与实验组 (每组 n =10 ) ,应用免疫学细胞技术 ,对大鼠呼吸道及全身免疫功能各项指标进行检测。结果 :田基黄能明显提高外周血中性粒细胞 (PMN)吞噬率 (75 .2± 3.9,83.5± 5 .1,P <0 .0 0 1)及 T淋巴细胞百分率 (6 4.8± 5 .4,72 .2± 3.1,P <0 .0 0 1) ;提高支气管肺泡灌洗液 (BAL F)中 T淋巴细胞百分率 (6 0 .4± 6 .3,6 8.8± 6 .5 ,P <0 .0 1) ;对外周血白细胞移行抑制指数 (MI) (0 .45 5± 0 .15 6 ,0 .439± 0 .148,P >0 .0 5 )及肺泡巨噬细胞 (AM)吞噬率 (4 1.8± 5 .8,48.2± 9.5 ,P >0 .0 5 )无明显影响。结论 :田基黄能提高大鼠全身的特异性和非特异性细胞免疫功能 ;