长柱金丝桃ISSR-PCR反应体系的建立与优化

为筛选可用于长柱金丝桃遗传分析的最适ISSR-PCR反应体系,采用正交试验对影响ISSR-PCR反应的5个重要因素(Taq DNA聚合酶、dNTPs、Mg^(2+)、引物和模板DNA浓度)进行4水平正交优化,并对退火温度、循环次数进行筛选。结果表明,20μL ISSR-PCR最佳反应体系包括Taq DNA聚合酶1.0 U、dNTPs 0.2 mmol·L-1、Mg2+3.0 mmol·L^(-1)、引物0.4μmol·L^(-1)、DNA模板40 ng,对ISSR-PCR反应的影响程度由大到小为:Taq DNA聚合酶、引物、Mg2+、dNTPs、DNA模板;引物UBC822的最佳退火温度52.7℃,最佳循环次数41,利用优化的反应体系从61条引物中筛选出12条稳定性好、多态性高的引物,验证试验表明优化的反应体系具有较高的稳定性。

长柱金丝桃的化学成分研究

目的研究长柱金丝桃的化学成分。方法利用硅胶柱色谱、高效液相色谱等技术对长柱金丝桃甲醇提取物进行分离纯化,通过波谱数据分析鉴定其化学结构,利用噻唑蓝(MTT)法测试化合物抗肿瘤活性。结果从长柱金丝桃中共分离出10个化合物,均无抗肿瘤活性,分别鉴定为:isodauc-6-ene-10β,14-diol(1)、10-oxoisodauc-3-en-15-al(2)、10β-hydroxyisodauc-6-en-14-al(3)、artabotrol(4)、saniculamoid B(5)、1β-6α-dihydroxy-4(15)endesmene(6)、5-epi-eudesm-4(15)-eno-1β,6β-diol(7)、15-hydroxu-T-muurolol(8)、oplopanone(9)、larixol(10)。结论化合物1~10均为首次从该属植物中分离得到。

长柱金丝桃种子萌发特性

通过对比试验,研究温度,光照,酸、碱、盐胁迫等不同处理对长柱金丝桃种子萌发的影响.结果表明:光照可以促进种子萌发;不同温度处理对长柱金丝桃种子萌发影响显著,20℃下发芽率最高;浓度25 mmol/L的Na2CO3处理和p H为5.0,5.4的低温层积处理可明显提高种子发芽率;盐胁迫下种子能够萌发,但发芽率随盐浓度的提高而降低;碱胁迫下可以促进种子萌发,发芽率随着碱浓度的增大呈先升高后降低的趋势,浓度10 mmol/L Na2CO3下发芽率最高达74%;酸胁迫下能够萌发,发芽率随p H的降低逐渐升高,在p H为4.6下发芽率达到72%.