THE STUDIES OF REVERSAL ON INHIBITING DNA SYNTHESIS AND CLONAL FORMATION OF HL－60 CELLS WITH HYPERTHERMIA

It was confirmed that the damage of HL-60 cells caused by heating (42℃, 60min) was of heterogeueity.The partial recovery of colony survival and 3H-TdR incorporation from inhibited HL-60 cells was acquired through short-term (24h) Iiquid culture. The resultsindicated that inhibition of DNA synthesis and colonyformation of leukemic cells by hyperthermia was partlyreversible. Its clinical significance and pathogenicmechanism were also discussed.

四物汤对放射线致血虚证小鼠骨髓Epo和G-CSF基因表达的影响

目的:考察四物汤对放射线致血虚证小鼠的生血作用及对骨髓Epo,G-CSF基因表达的影响,为阐明四物汤补血作用的分子机制提供依据。方法:采用3.5Gy60Coγ射线全身1次性照射,制备小鼠血虚证模型;检测外周血象;骨髓集落培养观察并计数CFU-GM,BFU-E,CFU-E,CFUmix;RTPCR检测骨髓Epo和G-CSF基因表达。结果:四物汤显著升高放射线致血虚证小鼠外周血白细胞数量和骨髓CFUGM,BFUE,CFUE,CFUmix数量,上调骨髓Epo和GCSF基因表达。结论:四物汤促进骨髓细胞Epo和G-CSF基因的表达可能是其生血作用的机制之一。

电离辐射对小鼠骨髓造血细胞周期进程的影响

采用流式细胞术（FCM）观察了X射线全身照射后小鼠骨髓造血细胞周期进程的时程变化和剂量效应关系，为探讨电离辐射对小鼠骨髓细胞周期进程的影响，。结果显示，2GyX射线全身照射后12h骨髓细胞出现G1期细胞百分数升高（p＜0．05），4hS期细胞百分数下降（p＜0．05），G2＋M期细胞百分数于照后4h和12h升高（p＜0．05）。量效研究显示，0．5～6Gy照射后12hG1期细胞百分数高于对照组，其中1、2、4、6Gy照射组有统计学差异（p＜0.05～p＜0.01），S期细胞百分数呈剂量依赖性下降（p＜0．01～p＜0．001），G2＋M细胞百分数呈剂量依赖性增加（p＜0．05～p＜0．001）。提示2GyX射线全身照射后可诱导造血细胞出现G1、G2期阻滞，抑制DNA合成，并且这些变化在0．5～6Gy范围内呈剂量依赖性关系。

亚致死量^(60)Coγ射线照射后小鼠骨髓造血细胞程序性死亡特性研究

照射可引起免疫器官萎缩和免疫功能抑制,研究发现其机制为照射后胸腺细胞发生了程序性死亡(programmed cell death,PCD)。骨髓组织对射线也很敏感,造血细胞辐射损伤机制目前尚不清楚。本实验研究从超微结构、DNA裂解、PI染色FACS分析等方面,动态地观察了^(60)Coγ射线照射后小鼠骨髓细胞的变化。实验采用成年SPFBALB/c小鼠。2.0,4.0,6.0Gy照射后6小时透射电镜显示细胞出现空泡,有不同程度的固缩;第3,6,9,12,24,36小时测得DNA裂解百分率较对照组增高;27000×g上清DNA琼脂糖凝胶电泳有大量小分子片段,分子量约为180bp的整倍数,呈典型梯状图谱;FACS分析也表明PCD细胞百分率于第3小时增高,渐增强,24小时达高峰。实验表明,亚致死量照射可引起骨髓有核细胞PCD。由于造血干细胞在形态上难以辨认,故射线有无引起造血干细胞PCD尚不能肯定,有待进一步研究。

全身照射大鼠骨髓提取液对真皮多能干细胞趋化作用的实验研究

目的 观察 5Gyγ射线全身照射后大鼠骨髓提取液对真皮多能干细胞 (dermalmultipotentstemcells ,dMSCs)的趋化作用 ,并定量分析尾静脉输注的dMSCs在大鼠体内的分布。方法 在Transwell培养体系中 ,观察骨髓提取液对dMSCs的趋化作用。3H TdR标记dMSCs ,经尾静脉输注到大鼠体内后 ,液闪法测量各组织内dMSCs的含量。结果 Transwell培养体系中 ,照射组骨髓提取液组从上层迁移到下层的细胞明显多于不照射的正常对照组和生理盐水组 (P <0 0 1)。照射后 1周始 ,照射组骨髓dMSCs含量明显高于正常对照组 (P <0 0 1) ;伤后 3周和 4周 ,照射组单位重量骨髓dMSCs含量也明显高于同组的肺脏、肝脏等组织。结论 全身照射大鼠骨髓提取液对dMSCs有很强的趋化作用 ,从而促进静脉输注的dMSCs偏向分布于损伤的骨髓。

电磁辐射对猕猴骨髓中造血细胞损伤效应研究

目的:探讨电磁辐射对猕猴骨髓造血细胞损伤效应.方法:经高场强电磁脉冲源以6×104V/m全身辐照5只猕猴,于照前及照后1、3、7、14、28及90 d麻醉后,经股骨上端穿刺,抽骨髓分离有核细胞离心涂片,采用光镜(gimsa、AgNOR、feulgen染色)、电镜和流式细胞术,观察电磁辐射对猕猴骨髓造血细胞的损伤效应.结果:伤后1～14 d,骨髓中造血细胞进行性减少,尤以各系统幼稚细胞减少为显著.形态结构欠佳,增生不活跃.伤后7～14 d,凋亡的造血细胞明显增加,表现为核染色质浓缩、边移、核固缩.造血细胞中DNA含量和核仁组成区相关蛋白进行性减少.伤后28 d～3 m,骨髓中造血细胞数量、形态、DNA含量和核仁组成区相关蛋白基本恢复至正常状态.结论:电磁辐射可使猕猴骨髓造血细胞发生凋亡的形态改变;并使其增殖能力降低.

白藜芦醇对辐射损伤的保护作用

目的:研究白藜芦醇(resveratrol,RES)对辐射损伤的保护作用。方法:建立60Co-γ辐射损伤小鼠模型。200只小鼠随机分为I,II,III,IV 4大组(n=50)。每大组分别又分为正常对照组(n=10)、辐射模型对照组(n=10)和3个RES剂量组(50,100,300 mg/kg,均n=10),经口灌胃30 d后,选择不同剂量60Co-γ照射后继续灌胃至实验结束,并在不同时间分别测定小鼠外周血白细胞数、血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、血清溶血素以及骨髓有核细胞数。结果:在不同照射剂量60Co-γ照射和规定的实验条件下,照射后第3天100和300 mg/kgRES剂量组小鼠白细胞计数分别为(1.69±0.82)×109和(1.61±0.51)×109/L,较辐射模型对照组[(0.73±0.69)×109/L]显著上升(分别P<0.05,P<0.01);100和300 mg/kg RES剂量组小鼠骨髓有核细胞数分别为(17.5±4.8)×105和(17.1±4.7)×105/mL,较辐射模型对照组[(7.3±2.2)×105/mL]显著上升(P<0.01);此外,100 mg/kg RES剂量组的小鼠血清SOD活性为(110.41±17.04)U/mL,较辐射模型对照组[(95.80±10.42)U/mL]显著提高(P<0.05);而各剂量RES组中的小鼠血清溶血素差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:100和300 mg/kg剂量的RES显示出良好的对抗辐射损伤的作用。

不同剂量X射线全身照射对小鼠骨髓细胞周期进程的影响

本文采用流式细胞术研究了不同剂量 X射线全身照射后小鼠骨髓细胞周期进程的变化。结果表明 ,0 .0 75 Gy X射线全身照射后 2～ 72 h骨髓细胞周期各时相细胞百分数未发生明显变化 ;2 .0 Gy全身照射后 4 h骨髓细胞便开始出现明显的 G2 阻滞 ,12 h同时出现 G1、G2 阻滞 ,而后很快恢复到假照水平。不同剂量 (0 .0 5 Gy～ 6 .0 Gy)全身照射后 12 h量效结果表明 ,低剂量范围内 (0 .0 5～ 0 .2 Gy)骨髓细胞周期各时相细胞百分数未发生明显变化 ;较大剂量范围内 (0 .5 Gy～ 6 .0 Gy)照射后出现明显的G1、G2 阻滞 ,S期细胞百分数减少。提示低剂量全身照射后骨髓细胞周期进程未检测出变化 ;而较大剂量全身照射后 ,骨髓细胞出现 DNA合成抑制 ,G1和 G2

人参皂甙对雄性小鼠骨髓细胞染色体的辐射防护作用

利用小鼠腹腔注射人参皂甙，观察人参皂甙对Ｘ射线照射小鼠骨髓细胞染色体损伤的防护作用。结果表明，不同浓度的人参皂甙（１２．５～２００ｍｇ／ｋｇ）对０．５ＧｙＸ射线诱发小鼠骨髓细胞染色体畸变具有明显的防护作用，且以５０ｍｇ／ｋｇ防护效果最佳。５０ｍｇ／ｋｇ的人参皂甙对不同剂量（０．５～１．０Ｇｙ）Ｘ射线诱发的小鼠骨髓细胞染色体畸变具有防护作用，可使Ｘ射线诱发的染色体畸变率、细胞畸变率明显降低。为此，我们认为ＧＳ对小鼠骨髓细胞染色体具有保护作用。

电离辐射致小鼠骨髓基质细胞凋亡的研究

目的探讨电离辐射致骨髓基质细胞(BMSC)凋亡的规律。方法采用流式细胞仪、电镜技术观察不同剂量6OCoγ射线照射后BMSC的凋亡变化。结果经50Gy剂量照射后,BMSC木见有明显的形态学改变,而经100和200Gy照射后 BMSC出现了明显的凋亡改变。流式细胞检测显示,经50Gy剂量照射后,BMSC的凋亡率与正常对照相比变化不明显(P＞0.05);100Gy照射后BMSC的凋亡率出砚了明显改变(P＞0.01),而且这种变化始于照射后4h,至照后24h到达高峰,随后凋亡率慢慢下降;200Gy照射组的凋亡率略高于100Gy组,但差异不明显(P＞0.05)。结论体外培养的BMSC受一定剂量的6OCoγ射线照射后可发生凋亡,并且有较强的辐射抗性。

三羟异黄酮对辐射损伤小鼠骨髓基质细胞的保护作用

目的 探讨三羟异黄酮(genistein,GEN)对辐射损伤小鼠骨髓基质细胞(bonemarrowstromalcells,BMSCs)的保 护作用。方法 成年雄性小鼠辐射前24h给予GEN,6.0Gyγ射线辐射后观察BMSCs的形态变化、成纤维细胞集落 (CFU -F)形成数量、BMSCs层对正常小鼠骨髓细胞(BMCs)的粘附能力以及血管细胞粘附分子(VCAM- 1)、纤维连接素(Fn) 和层粘素(Ln)等细胞粘附分子的变化。结果 GEN处理组辐射后BMSCs虽然形态上与单纯辐射损伤组在光镜下无差异, 但其CFU -F形成数量、对正常BMCs的粘附能力以及VCAM -1、Fn和Ln等细胞粘附分子的表达均较单纯辐射损伤组高而且 恢复较快。结论 GEN可减小辐射对小鼠BMSCs的损伤,促进受损BMSCs增殖、粘附功能恢复,改善骨髓造血微环境,有 利于辐射损伤小鼠造血重建,具有辐射防护作用。

大鼠移植骨髓细胞向肝细胞转化的实验研究

目的 探讨体内骨髓细胞向肝细胞转化的可行性。方法 将雌性 SD大鼠随机分为3组,每组15只。①R+BMT(全身照射+骨髓移植);②2-AAF+R+BMT:③2-AAF+PH(部分肝切)+BMT。进行交叉性别骨髓细胞移植,雄性骨髓植入雌性受体,分别于第5、10、20天处死雌鼠。以雄性性别决定基因sry作为细胞标记,用原位杂交和FISH作为检测方法对骨髓细胞的肝细胞转化进行分析。结果 PCR移植效果初步分析可见,R+ BMT组11例中有10例PCR阳性;2AAF+PH+BMT组11例中有7例阳性,2AAM+R+BMT组10例中有6例阳性。sry原位杂交染色发现,第5天各组雌性受体肝索中均未见sry阳性的肝细胞。第10天R+BMT组可见1例sry阳性的细胞位于肝细胞索,FISH染色可见这一细胞白蛋白mRNA阳性。第20天各组PCR阳性各例均可在肝索中检测到sry阳性的细胞。FICH染色可见白蛋白mRNA阳性。经统计学分析第20天各组sry阳性细胞数无明显差异。结论 在R+BMT、2-AAF+PH+BMT和2-AAF+R+BMT模型中移植的骨髓细胞均可以植入肝脏,并存在于肝细胞索。植入肝索的骨髓细胞最早可见于移植后第10天,并发生转分化,表达白蛋白mRNA。不经过全身照射的2-AAF+PH+BMT组,移植的骨髓细胞也可以进入肝脏发生转分化,因此全身照射并不一定是移植骨髓细胞活化、植入和转化的必须条件。

6.0GyX射线辐照所致BALB/c小鼠造血系统损伤的动态检测

目的观察6.0 Gy X射线辐照对BALB/c小鼠造血系统的影响。方法将80只BALB/c小鼠随机分为对照组和辐照组,每组各40只。用直线加速器X射线对辐照组BALB/c小鼠进行一次性全身6.0 Gy X射线照射。照射后,每天记录小鼠体重和状况。辐照前和辐照后1、3、5、7、14、21、28 d检测小鼠外周血血象和骨髓有核细胞数的变化。结果与对照组相比,辐照组小鼠辐照后体重下降(P<0.05),6 d后缓慢上升;外周血象中白细胞、红细胞、血小板和血红蛋白含量均下降(P<0.05),分别于照射后5、14、14、14 d下降至最低值,然后回升;骨髓有核细胞数急剧下降(P<0.05),于照射后5 d下降至最低值,而后逐渐上升。结论 6.0 Gy X射线辐照可引起BALB/c小鼠造血系统损伤,其机体有一定的自我修复机制。

放射损伤对小鼠骨髓间充质干细胞成骨潜能及造血干细胞龛位的影响

目的观察放射对小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stemcells,BMMSCs)体外成骨潜能及体内骨髓造血干细胞(hematologic stemcells,HSCs)龛位的影响。方法分离、培养正常及接受4 Gy放射后不同时间点小鼠BMMSCs,用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色法和实时定量RT-PCR检测成骨分化相关基因,鉴定BMMSCs体外成骨分化潜能的改变,并通过骨组织形态学和免疫组织化学的方法检测放射后小鼠体内成骨细胞及纺锤形的、表达神经钙黏附分子的成骨细胞(spindle-shaped N-cadherin-expressing osteoblasts,SNOs)数量的变化。结果全身照射(total body irradiation,TBI)后早期小鼠BMMSCs的成骨潜能增强,但随后迅速降低;TBI后28 d小鼠骨髓中成骨细胞和SNOs的数量均显著减少。结论4 Gy放射损伤后远期小鼠BMMSCs的成骨潜能显著降低,体内HSCs龛位也明显缩小。

右旋蛋氨酸对小鼠造血系统辐射损伤的作用

本研究旨在探讨右旋蛋氨酸(D-methionine,D-met)对造血系统辐射损伤的影响。将C57BL/6小鼠分为对照组、照射组、D-met 300 mg/kg组+照射组和D-met 1000 mg/kg+照射组。对照组小鼠接受假照射,其余3组小鼠接受7.5 Gy,1、4、8 Gy和1 Gyγ线的全身照射,分别用于小鼠存活率、骨髓细胞存活率、外周血白细胞数及其分类数以及骨髓细胞集落形成能力的检测。D-met于照射前30 min腹腔注射。结果表明,300和1000 mg/kg D-met均未显著提高7.5 Gy照射小鼠的存活率;10-2、10-3和10-4mol/L D-met能明显提高1、4、8 Gy照射小鼠骨髓细胞的存活率;300和1000 mg/kg D-met虽能使受1 Gy全身照射小鼠的外周血白细胞数有所增加,但与照射小鼠相比却无统计学差异,而对骨髓细胞集落形成能力具有明显的促进作用。结论:D-met可有效缓解辐射对骨髓细胞的杀伤作用,提高受照小鼠骨髓细胞的存活率,促进照射小鼠造血功能的恢复。

芍药苷对放射线致血虚证小鼠骨髓Epo和G-CSF基因表达的影响

目的:考察芍药苷对放射线致血虚证小鼠的生血作用及对骨髓Epo、G CSF基因表达的影响,为阐明芍药苷补血作用的分子机制提供依据。方法:采用3.5Gy60 Coγ射线全身1次性照射,制备小鼠血虚证模型,检测外周血象,骨髓集落培养观察并计数CFU GM、BFU E、CFU E、CFU mix ,RT PCR观察并检测骨髓Epo和G CSF基因表达。结果:芍药苷显著升高放射线致血虚证小鼠外周血白细胞数量和骨髓CFU GM、BFU E、CFU E、CFU mix数量,上调骨髓Epo和G CSF基因表达。结论:芍药苷具有生血作用,促进骨髓Epo和G CSF基因的表达可能是其生血作用的机制之一。

碳离子全身辐照致小鼠造血系统的损伤

目的:探讨不同剂量碳离子全身辐射对小鼠造血系统的损伤及其恢复情况。方法:分别用0、0.5、1、4、6 Gy碳离子束对小鼠进行一次性全身辐照,在辐照后第1、3、8天用碱性彗星电泳实验和流式细胞术分别检测小鼠骨髓单核细胞DNA损伤与细胞周期分布,并检测外周血细胞含量及脾脏指数。结果:与对照组相比,碳离子全身辐照导致小鼠骨髓单核细胞DNA损伤,其损伤程度与辐照剂量呈正相关(r均≤0.96,P均<0.01),且在辐照后第3天损伤最为严重,在辐照后第8天,DNA损伤与对照组相比,差异仍显著(P均<0.01)。碳离子全身辐照引起小鼠骨髓单核细胞周期产生明显的S期和G2/M期阻滞,以及外周血有核细胞数急剧下降和脾脏指数降低(P均<0.05),且随辐照剂量的增加而趋于严重。在辐照后第8天,小鼠骨髓单核细胞S期阻滞基本解除(P>0.05),但有核细胞数和脾脏指数并未明显回升(P均<0.05)。结论:不同剂量碳离子全身辐照均使小鼠造血系统严重受损。在0.5~6 Gy碳离子束照后第8天,小鼠骨髓细胞DNA损伤仍较严重,造血功能未明显恢复。

混输脾基质细胞与骨髓细胞悬液在小鼠大剂量辐射损伤修复中的作用

Ｃ５７ＢＬ／６／小鼠经６０Ｃｏγ射线一次整体照射８Ｇｙ后，分成三组：（１）单纯照射８Ｇｙ组。（２）照射后单纯骨髓移植组，（３）照射后混输脾基质细胞（ＳＳＣ）与骨髓细胞（ＢＭＣ）组，以观察骨髓移植和回输脾基质细胞对大剂量照射后受体存活率及造血干细胞（ＣＦＵ－Ｓ）的影响，并初步探讨其可能的机理。结果表明：单纯骨髓移植组受体存活率比单纯照射组高出２７％；而照射后混输ＳＳＣ组之存活率比单照射组高４７％，比单纯骨髓移植组高２２％（Ｐ＜０．０５）。混输ＳＳＣ可明显提高脾ＣＦＵ－Ｓ、ＣＦＵ－Ｆ及ＡＮＡＥ染色（＋）（－）细胞数。在体外混合培养中脾基质细胞对实质细胞增殖起支持与调节作用。

小鼠骨髓基质细胞对粒系祖细胞生长调控的实验研究

目的 研究放射损伤小鼠骨髓基质细胞对粒系祖细胞生长的影响。方法 采用体外小鼠骨髓基质细胞贴壁培养法和粒系祖细胞 (CFU GM)培养法。结果 伤后 3～ 7d ,有基质细胞贴壁的CFU GM生长明显低于无贴壁组 ;伤后 14d贴壁层形成后 ,放射损伤组的CFU GM生长明显低于正常对照组 ;放射损伤后 3～ 7d ,骨髓基质细胞可抑制正常CFU GM生长 ,用薄层琼脂分隔基质细胞贴壁层与靶细胞 ,其抑制作用减弱。当无外源性集落刺激因子 (CSF)时 ,基质细胞贴壁层对CFU GM生长仍显示一定刺激作用。结论 辐射使骨髓基质细胞功能受到一定损伤 ,但在放射损伤造血修复与重建过程中 ,骨髓基质细胞仍起着“刺激”与“抑制”

B_3HM细胞匀浆第3组分对照射小鼠的骨髓细胞及人GM-CSF依赖细胞系MO7e增殖的影响<英文>

B_3HM细胞系可以致小鼠白血病。为了进一步寻找致病物质,将B_3HM细胞经超声波匀浆后,差速离心分成四个组分,分别注射于经^(137)Cs 4.5 Gy照射的615或BALB/c小鼠。结果显示,第3组分含致病活性物质。经与B_3HM细胞第3组分共孵育后的MO7e细胞对GM-CSF依赖性明显减弱,并能生成自发性L-CFU。在SDS-PAGE胶上B_3HM细胞第3组分显示一条分子量约36kD的蛋白带。经制备电泳分离的5条蛋白带中3条带对GM-CSF因子依赖细胞系MO7e有一定促增殖作用。B_3HM细胞使经照射处理的小鼠血细胞发生恶性转化的活性物质可能与这些表达蛋白有关。