纹皮蝇Hypodermin B基因在大肠杆菌中的表达

从纹皮蝇期幼虫中提取总RNA,RT-PCR扩增纹皮蝇Hypodermin B(HB)基因.将扩增基因进行克隆测序,构建原核表达载体pET30-HB,转化大肠杆菌BL21(DE3).用IPTG诱导表达后,得到表达量达全菌蛋白30%以上的特异性蛋白.SDS-PAGE分析表明表达产物主要以包涵体形式存在.Western blotting检测结果表明,获得的重组蛋白为重组Hypodermin B,具有较好的反应原性.

纹皮蝇Hypodermin C基因原核表达及间接ELISA检测方法的建立

为建立牛皮蝇蛆病的抗体检测方法,本研究从纹皮蝇Ⅰ期幼虫中提取总RNA,采用RT-PCR扩增了Hypodermin C(HC)基因。将该基因片段插入到原核表达载体pET-30a(+)中进行原核表达。获得了31 ku以包涵体形式表达的重组HC蛋白。Western blot结果表明表达产物能够与阳性牛血清IgG特异性结合,具有良好的抗原活性。以纯化的重组HC作为包被抗原建立了牛皮蝇蛆病间接ELISA诊断方法,实验确定抗原最佳包被浓度为15.63μg/mL,血清最佳稀释度为1∶80,阳性标准判定为待检血清OD值>0.256。所建立的诊断方法具有较好的特异性、敏感性和可重复性。应用该检测方法对230份临床血清进行检测,阳性率为20.6%。研究结果表明该间接ELISA方法是一种有效的牛皮蝇蛆病血清学检测方法。

在藏羚羊上发现的中国第四种皮蝇

对于从可可西里藏羚羊上采集到的藏羚羊皮蝇Hypoderma sp.3龄幼虫进行了形态学观察,发现其在伪头、第10腹节上的刺、气门板形态上与中国现有记录的3种皮蝇(牛皮蝇、纹皮蝇和中华皮蝇)有着明显的区别。对藏羚羊皮蝇的线粒体COI基因种属特异性序列研究表明,其与牛皮蝇、纹皮蝇和中华皮蝇对应序列的相似性分别为88.1%,87.8%和88.8%。据此认为采自藏羚羊的此种皮蝇可能为中国境内又一皮蝇新种或新记录种,为中国第四种皮蝇。

纹皮蝇HypoderminC基因真核表达质粒构建及小鼠免疫试验

根据GenBank发表的Hypodermin C(HC)基因序列设计引物,以原核表达载体pET-HC为模板,PCR扩增HC基因,将克隆基因插入到真核表达载体pVAX1中,构建重组真核表达质粒pVAX1-HC。将重组质粒pVAX1-HC转染小鼠胎儿成纤维细胞,以间接免疫荧光法检测HC基因在细胞中表达。用真核表达质粒pVAX1-HC经双侧胫前肌注射昆明小鼠,对小鼠进行体液免疫和细胞免疫研究。结果表明,小鼠血清抗体水平和淋巴细胞增殖水平明显高于非免疫对照组。本研究成功构建了真核表达质粒pVAX1-HC,为纹皮蝇核酸疫苗研发奠定了基础。

内蒙古兴安盟牛皮蝇蛆病的病原种类及流行病学的季节动态研究

1997年 7月至 2 0 0 0年 3月 ,对内蒙古兴安盟 5个旗县市 15个乡 (苏木镇 )的 4 83头牛进行了牛皮蝇蛆病的流行病学调查 ,对 2 1个乡 (苏木镇 )的 30 7头牛进行了皮蝇各龄幼虫寄生季节动态监测。结果表明 ,该病病原为纹皮蝇蛆和牛皮蝇蛆 ,其中纹皮蝇蛆是当地的优势虫种。该病临床检查 ,感染率为 80 .53% ,感染强度为 2～ 73个。尸体剖检皮蝇各龄幼虫感染率在 50 %～ 10 0 % ,感染强度 1～ 193个。兴安盟的地理环境和自然条件因素是造成牛皮蝇蛆病在该地区流行的客观因素。