基于失巢凋亡相关基因预测肺腺癌转移及预后模型的构建与验证

目的:失巢凋亡是一种特殊的程序性细胞死亡,在肿瘤转移中发挥重要的作用。肺腺癌常发生多器官扩散性转移,严重影响患者的预后。本研究旨在探索新的失巢凋亡相关标志物预测肺腺癌转移及预后。方法:从TCGA数据库和GEO数据库获取肺腺癌转移患者和未转移患者的基因表达谱和相应的临床数据,从GeneCard数据库下载293个失巢凋亡相关基因。通过无监督聚类分析,将肺腺癌转移患者分成两组肿瘤亚型,TIMER数据库和单样本基因集富集分析评估两组的免疫浸润和免疫细胞功能。接着,采用最小绝对收缩和选择算法和Cox回归模型构建失巢凋亡相关基因预后模型并进行外部数据集验证,ROC曲线和列线图进一步评估模型的预测能力。同时,评估了高风险组和低风险组的免疫治疗和药物治疗差异。最后,通过实时荧光定量PCR (qRTPCR)验证标记基因的表达以及多重免疫荧光组化验证标记基因的免疫细胞浸润。结果:两聚类分子亚型在临床病理特征、预后和免疫细胞浸润方面存在显著差异。Lasso及多因素Cox回归筛选得到了3个失巢凋亡相关预后基因(TLE1、EIF2AK3和BIRC3),构建3基因风险模型。根据风险评分中位值将患者分为高、低风险组,低风险组表现出更高的总生存期时间,免疫活性,肿瘤突变负担和PD1/PDL1表达,这与免疫检查点抑制剂的更好应答一致。列线图一步证明了模型的优越预测价值。qRTPCR显示,3个预后标志基因在肺腺癌细胞系和肺腺癌组织表达更高,多重免疫荧光组化验证其表达与免疫细胞浸润程度正相关。结论:综上所述,本研究建立了失巢凋亡相关基因为特征的预后风险模型,该模型在肺腺癌患者中有很好的预后预测价值,因而可作为评估肺腺癌患者预后的潜在诊断标志物和治疗靶点。

利福平联合盐酸乙胺丁醇治疗肺结核的效果分析

目的:分析利福平联合盐酸乙胺丁醇治疗肺结核的效果。方法:选取2023年1月—2024年1月贵阳市公共卫生救治中心收治的肺结核患者70例作为研究对象,通过随机数字表法分为对照组和观察组,各35例。对照组采用盐酸乙胺丁醇治疗,观察组采用利福平联合盐酸乙胺丁醇治疗。比较两组肺功能[最大呼气中段流量(MMF)、用力肺活量(FVC)],基质金属蛋白酶9(MMP-9)、肺腺癌转移相关转录因子1(MALAT1)水平,临床疗效,不良反应发生率。结果:治疗前,两组MMF、FVC水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组MMF、FVC水平升高,观察组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组MMP-9、MALAT1水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组MMP-9、MALAT1水平降低,观察组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组治疗总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P=0.032)。两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:利福平联合盐酸乙胺丁醇治疗肺结核的效果、安全性较好,能改善患者的肺功能,降低MMP-9、MALAT1水平。

缺氧对人肺腺癌细胞浸润迁移能力及MMP-2、TIMP-2表达的影响

背景与目的已有的研究表明实体肿瘤组织内部存在一定程度缺氧,而栓塞缺氧治疗可抑制肿瘤细胞生长,但其中缺氧程度的把握是关键。本研究旨在探讨不同程度缺氧对人肺腺癌细胞浸润、迁移特性的影响及其机制。方法将人肺腺癌细胞株暴露于常氧(空气,5%CO2)、缺氧(1%O2,5%CO2,94%N2)或无氧(95%N2,5%CO2)环境48h后,分别用划痕法和羊膜-内皮细胞模型测定各组细胞的迁移和浸润能力。将处理的细胞接种于裸鼠皮下,观察其生长情况及转移特点。同时检测了细胞培养基中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及其抑制因子(TIMP-2)在不同程度缺氧后的水平。结果与常氧组相比,缺氧组细胞迁移、浸润能力显著增高(P<0.05)。缺氧组淋巴结转移率、肺转移率以及培养基中MMP-2水平均显著高于常氧组(P<0.05或P<0.01),TIMP-2显著低于常氧组(P<0.05)。无氧组成瘤率较常氧组显著降低(P<0.01),MMP-2、TIMP-2水平均显著低于常氧组(P<0.01)。结论适度缺氧可以刺激肺腺癌细胞分泌MMP-2并抑制TIMP-2表达,进而增强癌细胞迁移力、浸润力。但是严重缺氧可损伤癌细胞,癌细胞MMP-2、TIMP-2分泌下降,生长增殖能力、迁移力、浸润力下降。

缺氧预处理激活HIF-1α/MALAT1/VEGFA通路促进骨髓间充质干细胞生存和血管再生

背景:既往研究发现缺氧预处理能够提高骨髓间充质干细胞生存和改善其移植治疗效率,且此效应主要由缺氧诱导因子1α(hypoxia induced factor-1α,HIF-1α)介导,但下游机制未明。目的:体外观察缺氧预处理对骨髓间充质干细胞生存和血管再生能力的影响,探讨HIF-1α/MALAT1/VEGFA通路在其中的调控作用。方法:将体外培养的骨髓间充质干细胞分为缺氧实验组(体积分数为1%O2)和常氧对照组(体积分数为20%O2),培养24 h后检测细胞增殖、凋亡以及血管形成情况以及HIF-1α、MALAT1和VEGFA的表达;在此基础上,分别采用相应的siRNA抑制HIF-1α以及MALAT1的表达,以HIF-1αsiRNA scramble和MALAT1 siRNA scramble作为阴性对照,再进行缺氧预处理,检测并比较各组通路因子的表达变化。结果与结论:①与常氧对照组相比,缺氧实验组细胞生存力明显增强,凋亡比例显著减少,血管管腔样结构明显增多(P<0.01),HIF-1α、MALAT1和VEGFA的表达均明显增高(P<0.01);②在抑制HIF-1α的基础上进行缺氧预处理,MALAT1和VEGFA表达均明显下降(P<0.01);而抑制MALAT1后,VEGFA的表达亦显著降低(P<0.01);③结果表明,缺氧预处理能够通过激活HIF-1α/MALAT1/VEGFA通路促进骨髓间充质干细胞生存和血管再生。

基质金属蛋白酶及其组织抑制因子在肺癌中的表达及临床意义

目的探讨基质金属蛋白酶MMP-2及其组织抑制因子-2与肺癌侵袭和转移的关系。方法选取肺癌住院手术患者共45例,其中男30例,女15例,鳞癌、腺癌、小细胞肺癌各15例。术后临床分期Ⅰ期15例,Ⅱ期20例,Ⅲ期10例。取上述肺癌患者切除标本距离肿瘤组织3cm以外的正常组织15例为组织对照组,采用免疫组化S-P法分别对肺癌患者组织中的MMP-2及TIMP-2进行测定,采用χ2检验进行统计学分析。结果肺癌组织中,MMP-2、TIMP-2组织表达明显高于对照组(P<0.01,P<0.05),在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期中,MMP-2在组织中的表达随分期的升高而增加(P<0.05),但TIMP-2的表达则相反,随肿瘤分期增加而降低(P<0.05)。结论基质金属蛋白酶-2在肺癌侵袭和转移中具有重要的作用,可以用来评价肿瘤的恶性程度和估计预后。

RNA干扰HIF-2α基因对人肺腺癌A549细胞株侵袭转移的影响

目的:探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制缺氧诱导因子(hyposia-inducible factor 2α,HIF-2α)基因表达对人肺腺癌A549细胞株侵袭转移的影响。方法:构建针对HIF-2α-siRNA并转染A549细胞株,采用实时荧光定量多聚酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和Western blot方法检测HIF-2α表达水平,通过Tran-swell试验及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白检测,探讨HIF-2α-siRNA对A549细胞侵袭力的影响。结果:将HIF-2α-siRNA转染A549细胞后,HIF-2α的mRNA和蛋白表达水平均下调。qRT-PCR检测显示,第4号siRNA表达载体抑制作用最强,转染后24 h和48h对HIF-2α基因mRNA表达水平抑制率分别为(60.63±5.10)%和(80.00±3.55)%。Western blot检测同样证实,第4号siRNA表达载体对于HIF-2α蛋白表达抑制作用最强,转染后24 h和48 h抑制率分别为(31.69±11.56)%和(82.87±4.09)%。Transwell试验发现,转染HIF-2α-siRNA后,穿膜细胞数显著减少(P<0.05),表明细胞侵袭力下降。转染HIF-2α-siRNA后,VEGF表达水平显著下调(P<0.01)。结论:转染HIF-2α-siRNA可有效降低A549细胞的侵袭转移力。

尿液外泌体长链非编码RNA MALAT1和HIF1A-AS2对膀胱癌诊断的价值

目的 检测膀胱癌患者尿液外泌体中人肺腺癌转移相关转录因子1 (MALAT-1)和缺氧诱导因子1α反义RNA2(HIF1A-AS2)的表达水平,分析其与患者临床病理参数的关系,探讨其在膀胱癌诊断中的临床应用价值。方法 收集2019年1月至2020年12月于西安医学院第一附属医院就诊的膀胱癌、膀胱良性疾病患者及健康人各40例尿液样本,采用ELISA法检测各组尿液外泌体中MALAT1和HIF1A-AS2的表达水平。进一步分析其与膀胱癌患者临床病理参数的相关性;绘制ROC曲线并分析MALAT1和HIF1A-AS2对膀胱癌的诊断价值。结果 膀胱癌组中MALAT1和HIF1A-AS2的表达水平显著高于膀胱良性疾病和健康人对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);MALAT1和HIF1A-AS2的表达水平与膀胱癌患者的病理分级和分期的差异无统计学意义(P>0.05),而与肿瘤的大小密切相关(P<0.05);尿液外泌体中MALAT1诊断膀胱癌的曲线下面积(AUC^(ROC))为0.748,敏感性为75.0%,特异性为66.25%;HIF1A-AS2诊断膀胱癌的AUC^(ROC)为0.757,敏感性为75.0%,特异性为68.75%;MALAT1和HIF1A-AS2联合检测诊断膀胱癌的AUC^(ROC)为0.820,敏感性为85.0%,特异性为81.25%,均高于两项指标的单独诊断价值。结论 尿液外泌体中高表达的MALAT1和HIF1A-AS2可作为膀胱癌诊断的潜在生物学标志物。

肺腺癌组织TMSG-1和MMP-2表达及其临床意义

目的探讨肿瘤转移抑制基因-1（TMSG-1）和基质金属蛋白酶-2（MMP-2）在肺腺癌组织表达及其临床意义。方法采用免疫组化PV-6000法检测80例肺腺癌组织及其癌旁正常肺组织中TMSG-1和MMP-2蛋白的表达,分析二者表达与肺腺癌临床病理特征的关系。结果与肺腺癌组织相比,癌旁正常肺组织MMP-2表达明显下降,TMSG-1表达则相对较强（t=3.336、2.356,P〈0.05）。TMSG-1蛋白在Ⅰ~Ⅱ期及淋巴结无转移组肺腺癌组织中的表达明显高于Ⅲ~Ⅳ期及淋巴结有转移组（F=4.515、6.695,P〈0.05）;MMP-2蛋白在Ⅰ~Ⅱ期及淋巴结无转移组肺腺癌组织中的表达明显低于Ⅲ~Ⅳ期及淋巴结有转移组（F=4.461、4.157,P〈0.05）。腺泡样、乳头状、贴壁样生长肺腺癌TMSG-1表达较强,而MMP-2表达较弱;实体型、微乳头状生长肺腺癌TMSG-1表达较弱,而MMP-2表达较强（F=10.506、8.103,P〈0.05）。肺腺癌组织TMSG-1和MMP-2的表达呈负相关（r=-0.55,P〈0.05）。结论 TMSG-1、MMP-2与肺腺癌浸润转移关系密切,并可能与肺腺癌不同亚型的临床行为有关;TMSG-1可能通过抑制MMP-2水平发挥转移抑制作用。

非小细胞肺癌患者血清HIF-1α、MMP-2和VEGF的检测及其与临床特征的关系

目的探讨非小细胞肺癌患者血清低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、血管内皮生长因子(VEGF)的浓度及其与临床特征的关系。方法收集经病理确诊的非小细胞肺癌患者78例以及健康对照49例,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测2组血清HIF-1α、MMP-2、VEGF浓度并进行相关性分析。分析非小细胞肺癌患者血清HIF-1α、MMP-2及VEGF浓度与肿瘤不同临床分期及病理特征的关系。结果 (1)非小细胞肺癌患者血清HIF-1α、MMP-2、VEGF浓度显著高于健康对照组(P<0.05),(2)血清HIF-1α、MMP-2和VEGF浓度与肿瘤大小,淋巴结转移及肿瘤分期有关(均P<0.05),与病理分型无明显相关(P>0.05)。(3)行Pearson相关性分析HIF-1α与MMP-2呈正相关(r=0.721,P=0.000),HIF-1α与VEGF呈正相关(r=0.765,P=0.000),MMP-2与VEGF呈正相关(r=0.583,P=0.000)。结论血清HIF-1α、MMP-2、VEGF浓度与肿瘤恶性程度相关,有可能作为判断非小细胞肺癌恶性潜能及不良预后的评估指标。

circ_0014130在缺氧诱导肺腺癌侵袭转移中的作用机制

目的 探讨环状RNA(circRNA)circ_0014130在缺氧诱导肺腺癌侵袭转移中的作用机制。方法 收集2018年1月至2021年4月见未出现转移的肺腺癌患者46例、出现转移的肺腺癌患者42例和健康者50例。通过RT-qPCR检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)mRNA和circ_0014130的水平。通过Pearson检测二者的相关性。肺腺癌细胞分为对照组、缺氧组、si-circ_0014130组、缺氧+si-circ_0014130组。通过转染抑制circ_0014130,通过降低氧气浓度(10%)构建体外缺氧环境。比较各组细胞的迁移和侵袭能力。结果 肺腺癌组患者血清中的HIF-1α mRNA(2.14±0.27)和circ_0014130(2.59±0.23)水平均显著高于健康组(分别为1.00±0.16、1.00±0.14)(P<0.01);肺腺癌转移组的HIF-1α mRNA(3.85±0.42)和circ_0014130(4.36±0.44)水平均显著高于健康组和肺腺癌组(P<0.01);HIF-1α mRNA和circ_0014130的表达水平正相关(P<0.01);缺氧组的circ_0014130水平、增殖、迁移和侵袭能力显著高于对照组(P<0.01);si-circ_0014130组的circ_0014130水平、增殖、迁移和侵袭能力显著低于对照组(P<0.01);缺氧+si-circ_0014130组的circ_0014130水平、增殖、迁移和侵袭能力显著低于缺氧组且显著高于si-circ_0014130组(P<0.05)。结论 缺氧可能通过促进circ_0014130促进肺腺癌的转移。

MALAT-1和HIF-1α在三阴型乳腺癌中表达及临床意义

目的探讨肺腺癌转移相关转录本-1(MALAT-1)、低氧诱导因子-1(HIF-1)αmRNA在三阴型乳腺癌(TNBC)中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学SP法检测HIF-1α的蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测MALAT-1、HIF-1αmRNA的表达情况,分析其与TNBC临床特征的关系。结果 MALAT-1、HIF-1αmRNA在乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(2.62±0.23 vs.2.02±0.08;129.79±15.34 vs.43.46±5.14;P<0.05),HIF-1α蛋白在TNBC组织中的阳性表达率显著高于癌旁组织(69.7%vs.45.4%,P<0.05)。癌组织中的MALAT-1、HIF-1αmRNA的表达水平与TNBC组织的组织学分化程度、浸润深度、淋巴结转移、临床分期相关(P<0.01)。结论检测MALAT-1、HIF-1αmRNA的表达水平可能对TNBC浸润转移及增殖有一定的预测意义。

MALAT1、COX-2、β-catenin、MMP-3、MMP-9等基因在结直肠癌发生发展中的意义

目的探讨人肺腺癌转移相关转录因子1（MALATl）、环氧合酶-2（COX-2）、B-连环素（β-catenin）、基质金属蛋白酶（MMP）-3、MMP-9等基因在结直肠癌发生发展中的意义。方法收集新鲜结直肠癌组织标本及其对应癌旁组织标本各30例，采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）方法检测MALAT1、COX-2、β—catenin、MMP-3、MMP-9的mRNA表达水平，并与患者性别、年龄、癌胚抗原（CEA）、细胞免疫因子（CIM和CD8）、临床分期、肿瘤侵袭转移程度等进行相关性分析。结果MALAT1、COX-2、β—catenin、MMP-9在癌组织和癌旁组织中的表达差异均有统计学意义（P〈0．05），MMP-3则无统计学意义（P〉0．05）。MALAT1、COX-2、MMP-9和β-catenin在癌组织中的表达量分别是癌旁组织表达量的2．22倍、1．86倍、2．16倍、0．58倍（P〈0．01）。MALAT1（癌／癌旁）的表达差异与β—catenin（癌／癌旁）的表达差异呈负相关（r=-0．346，P=0．030），MMP-9（癌／癌旁）的表达差异与13-catenin（癌／癌旁）的表达差异则呈正相关（r=0．312，P=0．047）。COX-2（癌／癌旁）与MMP-9（癌／癌旁）在男女患者之间的差异均有统计学意义（P=0．047；P=0．018）；COX-2（癌／癌旁）在CEA上升与未见改变的患者之间的差异也有统计学意义（P=0．021）。结论MALAT1、COX-2、MMP-9、β—catenin在结直肠癌的发生发展中有重要意义，而MMP-3无重要参考价值；MALAT1和β-catenin的负相关性及MMP-9和β-eatenin的正相关性说明其在结直肠癌的发生发展中存在-定的相互作用关系；COX-2（癌／癌旁）和MMP-9（癌／癌旁）在男女患者中的差异提示二者影响男女患结直肠癌的概率；检测COX-2可在-定程度上辅助肿瘤标志物CEA对结直肠癌的诊断。

小檗碱对人非小细胞肺腺癌细胞迁徙转移的影响及其分子机制的研究

目的:观察低剂量的小檗碱的抗肿瘤活性,并探讨其抑制肿瘤细胞增殖及肿瘤转移的分子机制。方法:以人非小细胞肺腺癌A549为模型,用0、5、10、20、30μmol/L的小檗碱处理处于对数期增长的A549细胞24小时或者30μmol/L的小檗碱处理细胞不同时间。侵袭小室以及基质凝胶转移实验检测A549细胞的侵袭与迁移能力;免疫印迹方法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、上皮钙黏素(E-Cadherin,N-Cadherin)以及细胞信号转导分子(Stat3)的表达。结果:20、30μmol/L小檗碱孵育A549细胞48h后,其迁移与侵袭率显著降低;免疫印迹结果显示小檗碱能显著抑制Stat3转移到细胞核内;此外,抑制Stat3表达后,能显著抑制MMP以及N-Cadherin而增强E-Cadherin的表达。结论:小檗碱通过抑制Stat3转移到细胞核从而调节MMP的表达和A549细胞转移和迁徙。